Белтък в урината (протеинурия). Определяне на протеин в урината

За клиниката е важно както качественото, така и количественото определяне на протеина в урината.

Качествени тестове за определяне на протеин в урината
Предложени са повече от 100 реакции за качествено определяне на протеин в урината. Повечето от тях се основават на утаяване на протеини чрез физически (нагряване) или химични средства. Наличието на белтък се доказва от появата на мътност.

Колориметричните сухи проби също представляват интерес.

По-долу ще бъдат описани само най-важните проби за практиката.

Проба със сулфосалицилова киселина. Към няколко милилитра урина добавете 2-4 капки 20% разтвор на сулфосалицилова киселина. При положителна реакция се появява мътност. Резултатът се означава с термините: опалесценция, слабо положителна, положителна или силно положителна реакция. Тестът за сулфосалицилова киселина е един от най-чувствителните тестове за определяне на белтък в урината. Открива дори най-незначителните патологични увеличения на белтъка в урината. Благодарение на простата техника този тест намери широко приложение.

Асептол тест. Асептол е заместител на сулфосалициловата киселина. Може да се приготви от материали, налични във всяка лаборатория (фенол и сярна киселина). Като реагент се използва 20% разтвор на асептол. Тестът се провежда по следния начин: в епруветка, съдържаща 2-3 ml урина, добавете 0,5-1 ml разтвор на асептол на дъното. Ако на границата между двете течности се образува бял пръстен от коагулиран протеин, тестът е положителен.

Тест на Гелер. Под няколко милилитра урина добавете 1-2 ml 30% азотна киселина (сп. тегло 1,20). Ако на границата на двете течности се появи бял пръстен, пробата е положителна. Реакцията става положителна, ако протеинът е повече от 3,3 mg%. Понякога се получава бял пръстен при наличие на голямо количество урати. За разлика от протеиновия пръстен, уратният пръстен не се появява на границата между двете течности, а малко по-високо. Ларионова предлага вместо 30% азотна киселина да се използва като реагент 1% разтвор на азотна киселина в наситен разтвор на готварска сол; това дава голямо спестяване на азотна киселина.

Тест с железен калий и оцетна киселина. Тази реакция прави възможно разграничаването на серумните протеини от нуклеоалбумините.

В две епруветки се изсипват равни количества урина. Към един от тях се добавят няколко капки 30% разтвор на оцетна киселина. Ако има мъгла в сравнение с контролната епруветка, урината съдържа нуклеоалбумин. Ако не се появи мътност, съдържанието на двете епруветки се смесва и отново се разделя на две части. В една от двете епруветки добавете няколко капки (излишъкът може да превърне положителната проба в отрицателна) от 10% разтвор на жълта кръвна сол (калиев ферицианид). При наличието на суроватъчни протеини се получава помътняване.

При концентрирана урина, съдържаща големи количества пикочна киселина и урати, трябва да се направи тест с калиев ферицианид и оцетна киселина след предварително разреждане (2-3 пъти) на урината с вода. В противен случай може да възникне помътняване, причинено от утаената пикочна киселина.

Това е особено важно при изследване на урината на бебета, съдържаща много пикочна киселина и урати.

От другите качествени тестове за белтък в урината, основани на утаяване на белтъци, са използвани: тестът с кипене, тестовете на Есбах, Пърди, Робъртс, Алмен, Балони, Буро, Клавдиус, Корсо, Доум, Гудман. -Suzanne, Jollet, Exton, Kamlet, Kobuladze, Liliendal-Petersen, Polacci, Pons, Spiegler, Tanre, Thiele, Brown, Tsushiya и др.

При производството на качествени белтъчни проби от урина на базата на протеинова преципитация трябва да се спазват следните общи правила, чието нарушаване води до значителни грешки в анализа.

1. Урината, която ще се изследва, трябва да е кисела. При алкална реакция урината е леко подкислена с оцетна киселина. Произвеждането на алкална проба от урина, когато киселината се използва като реагент, може да доведе до неутрализация на киселината и отрицателен резултат, ако е положителен. Това важи особено за пробата от сулфосалицилова киселина, тъй като киселината се добавя в много малки количества и може лесно да се неутрализира.

2. Урината, която ще се изследва, трябва да е бистра.

3. Пробите за определяне на белтък в урината винаги трябва да се правят в две епруветки, едната от които служи за контрола. Без контролна епруветка може да не забележите лека мътност в реакциите.

4. Количеството добавена киселина в пробите не трябва да бъде твърде голямо. Голямо количество киселина може да доведе до образуването на разтворими киселинни албумини и до превръщането на положителна проба в отрицателна.

Заслужават голямо внимание, поради простата си техника, колориметричните сухи проби. Тези тестове използват влиянието, което даден протеин има върху цвета на индикатор в буферен разтвор (така наречената грешка на индикаторния протеин). Лента от филтърна хартия, импрегнирана с киселинен цитратен буфер и бромофенол синьо като индикатор, се потапя за кратко в урината. Тестът е положителен, ако се получи синьо-зелен цвят. Чрез сравняване на интензитета на цвета със стандартите за цветна хартия могат също да се направят предварителни и количествени заключения. Индикаторните хартии се продават на купчини с подходящи цветови стандарти, подобни на универсалните индикаторни хартии.

Методи за количествено определяне на белтък в урината
Предложени са много методи за количествено определяне на протеин в урината. Прецизните количествени методи за определяне на протеини в биологичен материал не са намерили широко приложение при определяне на протеин в урината, поради сложни и отнемащи време техники. Обемните методи, особено методът на Esbach, са широко използвани. Те са много прости, но, за съжаление, не са много точни. Методите на групата Брандберг-Столников също са удобни за клиниката, дават по-точни резултати от обемните методи, с относително проста техника. При наличие на фотометър или нефелометър удобни са и нефелометричните методи.

Метод на Есбах. Предложен е от парижкия лекар Есбах през 1874 г. В специална епруветка (албуминометър на Есбах) се налива урина и реактив. Епруветката се запушва с гумена запушалка, разбърква се старателно (без разбиване!) и се оставя в изправено положение до следващия ден. Те отчитат разделението, до което достига колоната от белтъчна утайка. Намереното число показва съдържанието на протеин. При метода на Esbach е много важно урината да е кисела. Алкалната урина може да неутрализира киселинните съставки на реагента и да предотврати утаяването на протеини.

Предимства на метода: той е прост и удобен на практика.

Недостатъци: методът е неточен, резултатът се получава след 24 - 48 часа.

Метод Брандберг-Столников. Базира се на качествен тест на Гелер. Тестът на Heller може да се използва за количествено определяне, тъй като дава положителен резултат над 3,3 mg% протеин. Това е граничната концентрация на протеин, под която пробата става отрицателна.

Модификация на Ерлих и Алтхаузен. Съветските учени С. Л. Ерлих и А. Я. Алтхаузен модифицират метода на Брандберг-Столников, като посочват възможността за опростяване на изследването и спестяване на време при неговото производство.

Първото опростяване е свързано с времето на появата на пръстена. Определя се точният час на появата му, без непременно да се спазват 2-ра и 3-та минута.

Второто опростяване дава възможност да се установи какво разреждане трябва да се направи. Авторите доказаха, че необходимото разреждане може приблизително да се определи от вида на получения пръстен. Различават нишковидни, широки
и компактен пръстен.

От нефелометричните методи заслужава да се отбележи Метод на Кингсбъри и Кларк. 2,5 ml филтрирана урина се излива в малък градуиран цилиндър, допълва се с 3% воден разтвор на сулфосалицилова киселина до 10 ml. Разбърква се старателно и след 5 минути се фотометрира в 1 cm кювета с жълт филтър, като се използва вода като компенсационна течност. С фотометър Pulfrich установената екстинкция, умножена по 2,5, дава количеството протеин в %o. В случай, че индексът на екстинкция е по-висок от 1,0, урината се разрежда предварително 2 пъти, 4 пъти или дори повече.

За да имате ясна представа за количеството протеини, отделени в урината, е необходимо да се определи не само концентрацията им в отделна порция урина, но и общото им дневно количество. За да направите това, вземете урината на пациента в продължение на 24 часа, измерете нейния обем в милилитри и определете концентрацията на протеин в част от дневната урина в g%. Количеството протеини, отделени с урината за 24 часа, се определя в зависимост от дневното количество урина в грамове.

Клинично значение на белтък в урината

Човешката урина обикновено съдържа минимални количества протеин, които не могат да бъдат установени чрез рутинни качествени тестове за протеини в урината. Отделянето на големи количества протеин, при което обикновените качествени тестове за протеин в урината стават положителни, е необичайно явление, наречено протеинурия. Протеинурията е физиологична само при новородено, през първите 4-10 дни след раждането. Често използваното наименование албуминурия е неправилно, тъй като с урината се отделят не само албумини, но и други видове протеини (глобулини и др.).

Протеинурията, като диагностичен симптом, е открита през 1770 г. от Cotugno.

Най-важните функционални бъбречни протеинурии при деца са както следва:

1. Физиологична протеинурия на новороденото. Среща се при повечето новородени и няма неблагоприятно значение. Обяснява се със слаб бъбречен филтър, увреждане при раждането или загуба на течности в първите дни от живота. Физиологичната протеинурия изчезва на 4-10-ия ден след раждането (по-късно при недоносени бебета). Количеството протеин е малко. Това е нуклеоалбумин.

Дългосрочната неонатална албуминурия може да бъде симптом на вроден луес.

2. Инсулт албуминурия. Причиняват се от превишаване на прага на нормална възбудимост на бъбречния филтър от значителни механични, термични, химични, психични и други дразнения - загуба на течности при кърмачета (дехидратационна протеинурия), студено къпане, обилна, богата на протеини храна (алиментарна протеинурия) , палпация на бъбреците (палпаторна албуминурия), физическо преумора, страх и др.

Инсултната албуминурия се появява по-лесно при деца в ранна възраст, отколкото при по-големи деца и възрастни, тъй като бъбреците на бебето и малкото дете са по-лесно раздразнени. Особено често при кърмачета се наблюдава дехидратационна албуминурия (недохранване, хидролабилност, токсикоза, диария, повръщане).

Албуминурията при инсулт е доброкачествена. Те изчезват веднага след отстраняване на причините, които ги предизвикват. В депозит понякога има единични левкоцити, цилиндри и еритроцити. Протеинът най-често е нуклеоалбумин.

3. Ортостатична протеинурия. Това състояние е типично за деца в предучилищна и училищна възраст. Възниква на базата на вазомоторни нарушения на кръвоснабдяването на бъбрека. Характерно за ортостатичната албуминурия (откъдето идва и името ѝ) е, че се появява само при изправено положение на детето, когато гръбначният стълб е в лордозна позиция. В легнало положение изчезва. Освобождава се нуклеоалбумин. В съмнителни случаи можете да прибягвате до ортостатичен опит, който е както следва: вечер, един час преди лягане, детето изпразва пикочния мехур; на сутринта ставайки от леглото пак уринира. Тази урина не съдържа протеин. След това детето се поставя на колене за 15-30 минути с пръчка зад гърба, между свитите лакти на двете ръце. Създава се положение на лордоза, което води до освобождаване на протеин, без промени в седимента.

При ортостатична албуминурия могат да се секретират 8-10 g протеин на ден.

Най-важното клинично значение сред всички протеинурия е органичната бъбречна протеинурия. Причиняват се от органични заболявания на бъбреците (нефрит, нефроза, нефросклероза). Протеинурията е един от най-важните и добре познати симптоми на органично бъбречно заболяване.

1. При остър и хроничен гломерулонефрит протеинурията се появява редовно. Количеството протеин е умерено и няма паралел между степента на протеинурия и тежестта на заболяването. Обратно, хроничният и по-тежък нефрит често протича с по-малко протеин от острия. След остър нефрит, понякога за продължително време (години), се установяват малки количества белтък в урината, които нямат патологично значение ("остатъчна албуминурия"). Не бива да забравяме, че може да възникне и "нефрит без протеинурия". Понякога протеинът се намира в една част от урината, но не и в другата. Съотношението на албумини към глобулини при острия нефрит е ниско, а при хроничния е по-високо.

2. При нефросклероза количеството протеин в урината е много малко, често има форми на заболяването без протеин в урината.

3. От всички бъбречни заболявания нефрозата протича с най-силно изразена протеинурия.

4. При инфекциозно-токсични състояния възниква т. нар. фебрилна и токсична протеинурия. Това са остри нефрози, при които количеството на протеина е малко. Тази група включва също протеинурия при конвулсивни състояния (конвулсии), хипертиреоидизъм, жълтеница, инвагинация, ентероколит, изгаряния, тежка анемия и др. Тези албуминурии са доброкачествени и преминават бързо (преходна албуминурия).

5. При застой на кръвта в бъбреците възниква т. нар. застойна албуминурия, характерна за сърдечно болните в стадия на декомпенсация. Среща се и при асцит и тумори на корема.

При фебрилна, токсична и конгестивна албуминурия е особено изразена повишената пропускливост на бъбречния филтър. Според някои автори много от тези протеинурия протичат без органично увреждане на бъбречния паренхим.

Екстраренална албуминурияобикновено се причиняват от протеинови примеси (секрети, разпаднали се клетки), които се отделят от болни пикочни пътища и генитални органи. Екстрареналната албуминурия е по-честа поради цистопиелит (пиурия), по-рядко поради вулвовагинит, конкременти и тумори на пикочните пътища.

При екстраренална албуминурия в седимента се откриват голям брой левкоцити и бактерии. Почти никога не се откриват бъбречни елементи. Количеството протеин е малко. Филтрираната или центрофугирана урина обикновено не дава положителен тест за протеин.

При тези, които се възстановяват от пиелит, албуминурията изчезва след бактериурия и пиурия.

Като характерно явление трябва да се подчертае, че органичните бъбречни заболявания се появяват изключително рядко в ранна детска възраст, поради което рядко се среща и органичната протеинурия. От тях има предимно фебрилни и токсични. За разлика от органичната протеинурия, инсултната албуминурия е много честа при деца в ранна възраст.

При по-големи деца органичната протеинурия е по-често функционална. Като цяло с възрастта функционалната протеинурия е по-рядка, а органичната по-често.

Електрофоретични изследвания на протеини в урината

Редица автори използват електрофоретичен метод за изследване на протеини в урината (уропротеини). От получените електрофореграми се вижда, че те имат същия качествен състав като плазмените протеини. Това показва, че протеините в урината са получени от плазмени протеини.

Страница 52 от 76

В урината на здраво дете протеинът се съдържа в незначително количество и не се открива при обикновени тестове за качество. Количеството протеин в урината (протеинурия) се увеличава при бъбречно заболяване, токсикоза, левкемия, пернициозна анемия, задръствания в бъбреците, след палпация на бъбреците (албуминурия при палпация) и физическо преумора, с емоционално претоварване, треска, хипотермия и други състояния .
Качествено определяне на протеин в урината. За качествено определяне на протеин в урината най-широко се използват тестът със сулфосалицилова киселина, тестът на Хелер с азотна киселина, тестът с кипене и др.. Когато се използват проби, базирани на утаяване на протеини, е важно да се спазват някои общи правила при за да избегнете грешки.

1. Урината трябва да е кисела. Ако тестовата урина е алкална, тя се подкиселява леко чрез добавяне на оцетна киселина. Количеството киселина обаче не трябва да е голямо, за да не предизвика разтваряне на албумина.
2. Урината трябва да е бистра. Ако има мътност, тя трябва да се отстрани, без да се причинява утаяване на протеини.
3. Пробата трябва да се направи в две епруветки - опитна и контролна. При липса на контрол може да не забележите леко помътняване на урината в експериментална епруветка.

Тестът със сулфосалицилова киселина е един от най-чувствителните към наличието на белтък в урината. 3-5 ml урина се изсипват в епруветка и се добавя 20% разтвор на сулфосалицилова киселина със скорост 2 капки на 1 ml урина.
При друга модификация, за определяне на пробата, 1 ml урина се излива в епруветка и към нея се добавят 3 ml 1% разтвор на сулфосалицилова киселина.

В първия и втория случай, при наличие на белтък в урината, след добавяне на сулфосалицилова киселина се появява мътност. Резултатът се взема предвид от интензивността на мътността: слабо положителна реакция (опалесценция) се обозначава с (кратък +), положителен (+), рязко положителен.
Тестът на Heller се провежда по следния начин: няколко милилитра урина се наслояват внимателно (без смесване) върху 1-2 ml 30% разтвор на азотна киселина с относителна плътност 1,20. Ако в урината има 0,033 g/l протеин или повече, на границата на двете течности се образува бял пръстен, което се оценява като положителен тест. При голямо количество урати в урината може да се образува и бял пръстен, но той се намира точно над границата между течностите. При леко нагряване уратният пръстен изчезва.
Тестът за кипене дава надеждни резултати, но само ако урината има рН 5,6. Този тест се провежда най-добре в модификацията на Ruppert с ацетатен буфер на Bange, който включва 56,5 ml ледена оцетна киселина, 118 g кристален натриев ацетат, разтворени в 1 литър вода. Добавете 5 ml урина към 1-2 ml буфер на Bange и кипете 1/2 min. При наличие на белтък в урината се образува помътняване.
Количествено определяне на протеин в урината. За количествено определяне на белтък в урината най-често се използват методът на Esbach, методът на Brandberg-Roberts-Stolnikov, методът на Sols biuret и др.
Методът Brandberg - Roberts - Stolnikov се основава на качествен тест на Geller и ви позволява да определите наличието на протеин в урината от 0,033 g / l и повече. Подготвят се редица епруветки. Урината, съдържаща протеин, се разрежда с физиологичен разтвор или вода, докато престане да се образува бял пръстен на границата на течностите (реактив на Робъртс-Столников и урина). Пръстен на границата на две течности между втората и третата минута се появява при съдържание на протеин от 0,033 g/L. Ако пръстенът се появи по-рано от няколко минути, урината се разрежда с вода. Най-високото разреждане на урината, в което се образува пръстенът, съдържа 0,033 g/l протеин. Степента на разреждане на урината в последната епруветка се умножава по 0,033 g/l и се получава концентрацията на белтък в цялата урина.

протеинурия. При бъбречни заболявания се дължи на повишена пропускливост на бъбречния филтър. Протеинът може да попадне в урината и по друг начин (от лигавиците на пикочните пътища, вагината, простатата и др.) - екстраренална протеинурия. Бъбречната протеинурия е разделена на органична и функционална. Органичната протеинурия е свързана с увреждане на бъбречния паренхим, функционална - с вазомоторни нарушения. Един от видовете функционална протеинурия е ортостатичната (лордозна, интермитентна, постурална, циклична) албуминурия. Предполага се, че при изразена лордоза се създава позиция, при която долната куха вена се притиска към гръбначния стълб от черния дроб, което води до застой в бъбречните вени и застойна албуминурия. Електронномикроскопските изследвания показват, че ортостатичната албуминурия има морфологични признаци на възпалителен процес в бъбречните гломерули.

Нашите дългосрочни наблюдения показват, че ортостатичната албуминурия често се причинява от аномалии на бъбреците или тяхното необичайно местоположение.В тази връзка препоръчваме използването на ортостатичния тест като скринингов тест. След идентифициране на ортостатична албуминурия с това изследване обикновено извършваме екскреторна урография, за да изключим аномалии в развитието на отделителната система.
Ортостатичен тест. В навечерието на теста, вечер, около час преди лягане, детето трябва да изпразни пикочния мехур. На сутринта, ставайки от леглото, той веднага уринира и тази урина се събира в отделна купа, като се отбелязва като порция преди натоварването. След това на детето се предлага да коленичи на полумек стол с пръчка зад гърба си, като го хваща с лакти. В това положение детето трябва да бъде 15-20 минути, след което изпразва пикочния мехур и събраната урина се отбелязва като порция след упражнение. Протеинът се изследва в порции урина, получени преди и след тренировка. Откриването или увеличението с 2-3 или повече пъти на съдържанието на протеин във втората порция (получена след тренировка) в сравнение с първата порция се оценява като положителен ортостатичен тест.
Определяне на протеинови фракции в урината.Начертаните елементи се изпълняват. При гломерулонефрит, туберкулоза, поликистоза на бъбреците, тумори на бъбреците, хеморагичен васкулит, колагенози, възпаление на пикочния мехур и други заболявания на червените кръвни клетки в урината може да има значително количество. Има макро- и микрохематурия. При груба хематурия вече може да се забележи макроскопски, че цветът на урината се е променил. Поради наличието на голям брой червени кръвни клетки в урината, тя става червена или "с цвета на месни помия". При микрохематурия еритроцитите се откриват само чрез микроскопия на утайката.
Проникването на еритроцити в урината по време на гломерулонефрит, интоксикация се дължи на повишената пропускливост на гломерулните капиляри и техните разкъсвания. При възпалителни заболявания на пикочните пътища, камъните в таза, уретерите, пикочния мехур, еритроцитите навлизат в урината от увредени лигавици. При събиране на урина на порции (проби от две и три чаши) по време на едно уриниране е възможно с голяма вероятност да се установи от кой сегмент на пикочната система идва хематурия. Така че при хематурия от уретрата може да има кръвни съсиреци в първата част на урината. Ако хематурията се дължи на остро възпаление на лигавицата, камък или друго заболяване на пикочния мехур, в последната струя урина ще се отдели повече кръв. При хематурия, свързана с увреждане на уретера, понякога се откриват фибринови отливки, които съответстват по форма на лумена на уретера. При дифузно бъбречно заболяване хематурията оцветява равномерно отделената урина.
Левкоцити. В урината на здраво дете те могат да бъдат единични в зрителното поле. Откриването на 5-7 левкоцити във всяко зрително поле показва възпалителен процес в пикочните пътища. Винаги обаче трябва да се изключва възможността левкоцитите да навлизат в урината от външните гениталии, което се случва при фимоза, баланит и баланопостит при момчета и вулвовагинит при момичета. Пробите от две и три стъкла се използват широко за левкоцитурия.
цилиндри. В урината те могат да бъдат под формата на хиалинни, гранулирани, епителни и восъчни отливки. Всички те могат да се образуват при патологични състояния в бъбреците. Цилиндрите в урината на здрави деца са редки. Често те се срещат в количествените методи за изследване на уринарния седимент. Като правило това са хиалинови цилиндри, които представляват протеин, коагулиран в лумена на тубулите. Епителните отливки са показателни за увреждане на бъбречния паренхим и се състоят от прилепнали епителни клетки на бъбречните тубули. При по-изразен дистрофичен процес в бъбреците се появяват гранулирани и восъчни цилиндри. Това са отливки от разкъсани клетки на тубуларния епител, претърпял мастна дегенерация. В допълнение, в утайката на урината можете да намерите цилиндри, образувани от формирани елементи, хемоглобин, кръвен метхемоглобин. Основата на такива цилиндри обикновено е протеин, върху който се наслагват други елементи.
Цилиндроидите са образувания, подобни на хиалиновите цилиндри, състоящи се от кристали от соли на амониев урат, слуз, левкоцити, бактерии. Цилиндроидите се откриват във фазата на възстановяване при остър гломерулонефрит. Те се различават от хиалиновите цилиндри по разнородността на тяхната структура.
неорганичен остатък.В неорганичния седимент при децата по-често се срещат урати, оксалати, фосфати и кристали на пикочната киселина. Прекомерното им отделяне с урината може да доведе до образуване на камъни в пикочните пътища.
Уратурия - повишено отделяне на соли на пикочната киселина с урината. Наблюдава се в първите дни от живота на новородените. Поради значителното количество урати, урината на новородените може да има керемиденочервен цвят. Големият разпад на клетъчните елементи при новородени често води до образуване на инфаркт на пикочната киселина, който изчезва до края на първата седмица от живота, тъй като уратните соли се отстраняват с увеличаване на диурезата. Уратурията при по-големи деца може да бъде свързана с консумация на големи количества месо, с мускулна умора, трескави състояния. Хиперуратурията може да се дължи на наследствена хиперурикемия, която е особено изразена при синдрома на Lesch-Nyhan.
Оксалатурия - повишена екскреция на калциев оксалат с урината, може да бъде свързана с прием на храни, богати на оксалова киселина. Продукти от този вид включват киселец, спанак, домати, зелен грах, боб, репички, чай, кафе и др. Причината за оксалатурия също е патологичен процес в тялото на детето, придружен от разрушаване на тъканите (дистрофия, туберкулоза, диабет, бронхиектазии , левкемия и др.). Оксалатурията е известна и като наследствено заболяване, често усложнено от нефролитиаза и хроничен пиелонефрит. При тежка оксалатурия съдържанието на оксалати в дневната урина е 3-4 пъти или повече над допустимата стойност (нормата е 8-10 mg%).
Фосфатурия - повишена екскреция с урината на фосфатни соли, които се утаяват в алкална урина. Наблюдава се при прием на растителни продукти (зеленчуци, плодове и др.), както и при възпалителен процес в лигавицата на пикочните пътища, когато настъпва бактериална ферментация и алкализиране на урината. Фосфатурията може да причини образуването на камъни в пикочния мехур.

Много заболявания протичат без изразени клинични прояви, поради което определянето на протеин в урината с цел навременно откриване и лечение на патологично състояние е важен момент за практическата медицина.

Протеинът в урината може да се определи чрез качествени и количествени методи.

Качествени методи

В момента има около 100 известни качествени реакции на протеина. Те се състоят в утаяване на протеин чрез метода на физични или химични въздействия. При положителна реакция настъпва помътняване.

Най-информативни са пробите:

1. Със сулфосалицилова киселина. Той се счита за най-чувствителен и с негова помощ е възможно да се определят дори най-малките количества протеинови тела в урината. Описанието на резултата при следи от белтък се обозначава с термина "опалесценция", а при по-голямо количество - "слабо положителен", "положителен" и при голяма загуба на белтък в урината - "силно положителна реакция" .
2. С киселинен заместител - асептол. Към урината се добавя разтвор на веществото и когато на границата на разтворите се образува пръстен, се казва, че пробата е положителна.
3. Гелър. Произвежда се с помощта на разтвор на азотна киселина. Резултатът от провеждането се интерпретира подобно на този с асептол. Понякога пръстенът може да присъства по време на наличието на урати в тестваната течност.
4. С оцетна киселина с добавяне на селезистосинеродист калий. При висока концентрация на урина по време на такъв тест, тя се разрежда, в противен случай може да се получи фалшиво положителен резултат, тъй като реакцията ще бъде към урати и пикочна киселина.

Неправилното провеждане на такъв тест често може да даде неправилен резултат при новородени, тъй като те произвеждат урина с високо съдържание на пикочна киселина.

Основните правила за вземане на проби са следните - необходимо е изследваната урина да е прозрачна, да има леко кисела среда (за това понякога се добавя малко количество оцетна киселина), трябва да има две епруветки за контрол.

количествено определяне

Когато се прави изследване на урината, общият протеин се определя и чрез количествени методи. Има много от тях, но най-често се използват следните:

1. Метод на Есбах. Използва се от 19 век. За да направите това, урината и реагентът се изсипват в определена епруветка. След това сместа се разклаща малко и се оставя затворена за 24-48 часа. Получената утайка се преброява според разделението в епруветката. Правилно заключение може да се направи само при кисела урина. Тази техника е доста проста, но няма висока точност и отнема много време.
2. Метод Брандберг-Столников. Въз основа на теста на Heller, който ви позволява да получите резултат при концентрация на протеин над 3,3 mg%. По-късно този метод беше модифициран и опростен.
3. Нефелометричните методи за определяне на количеството протеин са широко използвани.

За да разберете напълно количеството протеин, най-добре е да използвате тест за урина за дневен протеин.

За правилен резултат първата сутрешна порция се изсипва, събирането започва с втората порция в един съд, който се препоръчва да се съхранява в хладилник.

Последната порция се събира сутрин. След това е необходимо да се измери обемът, след това да се разбърка старателно и да се изсипе част от не повече от 50 ml в буркан. Този контейнер трябва да се занесе в лабораторията. В специален формуляр е необходимо да се посочат резултатите от общия обем на дневната урина, както и височината и теглото на пациента.

Приложение на тест ленти

Тестът за белтък в урината работи на принципа на индикаторите. Специалните ленти могат да променят цвета си в зависимост от концентрацията на протеин. Те са удобни за определяне на промени, които настъпват по различно време и се използват както у дома, така и във всякакви медицински и превантивни институции.

Тест лентите за урина се използват, когато е необходимо ранно определяне и проследяване на резултатите от лечението при патологии на пикочно-половата система. Тази диагностична техника е чувствителна и реагира на албумин в концентрация от 0,1 g / l и ви позволява да определите качествените и полуколичествените промени в съдържанието на протеин в урината.

Въз основа на резултатите от тази диагноза е възможно да се следи ефективността на терапията, да се коригира и да се предпише необходимата диета.

26.02.2009

Куриляк О.А., д-р.

Обикновено протеинът се екскретира с урината в относително малко количество, обикновено не повече от 100-150 mg / ден.

Дневната диуреза при здрав човек е 1000-1500 ml / ден; по този начин концентрацията на протеин при физиологични условия е 8-10 mg/dL (0,08-0,1 g/L).

Общият протеин на урината е представен от три основни фракции - албумини, мукопротеини и глобулини.

Албуминът в урината е тази част от серумния албумин, която е била филтрирана в гломерулите и не е била реабсорбирана в бъбречните тубули; нормалната екскреция на албумин в урината е по-малка от 30 mg/ден. Друг основен източник на протеин в урината са бъбречните тубули, особено дисталната част на тубулите. Тези тубули секретират две трети от общия протеин в урината; от това количество приблизително 50% е представен от гликопротеина на Tamm-Horsfall, който се секретира от епитела на дисталните тубули и играе важна роля при образуването на уринарни камъни. Други протеини присъстват в урината в малки количества и идват от филтрирани през бъбречния филтър на плазмени протеини с ниско молекулно тегло, които не се реабсорбират в бъбречните тубули, микроглобулини от бъбречния тубуларен епител (RTE) и простатен и вагинален секрет.

Протеинурията, т.е. увеличаването на съдържанието на протеин в урината, е един от най-значимите симптоми, отразяващи увреждане на бъбреците. Въпреки това, редица други състояния също могат да бъдат придружени от протеинурия. Следователно има две основни групи протеинурия: бъбречна (истинска) и извънбъбречна (фалшива) протеинурия.

При бъбречна протеинурия протеинът навлиза в урината директно от кръвта поради увеличаване на пропускливостта на гломерулния филтър. Бъбречната протеинурия често се среща при гломерулонефрит, нефроза, пиелонефрит, нефросклероза, амилоидоза на бъбреците, различни форми на нефропатия, като нефропатия при бременност, треска, хипертония и др. Протеинурия може да се открие и при здрави хора след тежки физически натоварвания, хипотермия, психологически стрес. При новородени се наблюдава физиологична протеинурия през първите седмици от живота, а при астения при деца и юноши, съчетана с бърз растеж на възраст 7-18 години, е възможна ортостатична протеинурия (в изправено положение на тялото).

При фалшива (екстраренална) протеинурия източникът на протеин в урината е смес от левкоцити, еритроцити и уротелни клетки на епитела на пикочните пътища. Разграждането на тези елементи, особено изразено при алкалната реакция на урината, води до навлизане на протеин в урината, който вече е преминал през бъбречния филтър. Особено висока степен на фалшива протеинурия дава примес на кръв в урината, с обилна хематурия може да достигне 30 g / l или повече. Заболявания, които могат да бъдат придружени от екстраренална протеинурия - уролитиаза, бъбречна туберкулоза, тумори на бъбреците или пикочните пътища, цистит, пиелит, простатит, уретрит, вулвовагинит.

Клиничната класификация включва лека протеинурия (по-малко от 0,5 g/ден), умерена (0,5 до 4 g/ден) или тежка (по-голяма от 4 g/ден).

Повечето пациенти с бъбречно заболяване като остър гломерулонефрит или пиелонефрит имат лека протеинурия, но пациентите с нефротичен синдром обикновено отделят повече от 4 g протеин дневно в урината.

За количествено определяне на протеин се използва широк спектър от методи, по-специално унифицираният метод на Brandberg-Roberts-Stolnikov, биуретният метод, методът с използване на сулфосалицилова киселина, методите с използване на багрило Coomassie blue, пирогалолно червено багрило и др.

Използването на различни методи за определяне на протеин в урината доведе до сериозно объркване при тълкуването на границите на нормалното съдържание на протеин в урината. Тъй като в лабораториите най-често се използват 2 метода - със сулфосалицилова киселина и пирогалолно червено багрило, ще разгледаме проблема с коректността на границите на нормите за тях. От позицията на сулфосалициловия метод в нормалната урина съдържанието на протеин не трябва да надвишава 0,03 g / l, от позицията на пирогалолния метод - 0,1 g / l! Разликите са тройни!

Ниските стойности на нормата на концентрацията на протеини в урината при използване на сулфосалицилова киселина се дължат на следните точки:

• калибровъчната крива се изгражда върху воден разтвор на албумин. Съставът на урината е много различен от водата: рН, соли, нискомолекулни съединения (креатинин, урея и др.). В резултат на това, според Алтшулер, Раков и Ткачев, грешката при определяне на протеин в урината може да бъде 3 пъти или повече! Тези. правилни резултати от определянето могат да бъдат получени само когато урината има много ниско специфично тегло и е близка до водата по състав и pH;
• по-висока чувствителност на сулфосалициловия метод към албумин в сравнение с други протеини (докато, както бе споменато по-горе, албуминът в нормални проби от урина не надвишава 30% от общия протеин на урината);
• ако pH на урината се измести към алкалната страна, сулфосалициловата киселина се неутрализира, което също е причина за подценяване на резултатите от определянето на протеина;
• скоростта на утаяване на утайките е обект на значителни промени - при ниски концентрации на протеин утаяването се забавя и ранното спиране на реакцията води до подценяване на резултата;
• скоростта на реакцията на утаяване по същество зависи от разбъркването на реакционната смес. При високи концентрации на протеин, енергичното разклащане на епруветката може да доведе до образуването на големи люспи и бързото им утаяване.

Всички горепосочени характеристики на метода водят до значително подценяване на концентрацията на протеин, определена в урината. Степента на подценяване силно зависи от състава на конкретна проба от урина. Тъй като методът със сулфосалицилова киселина дава подценени концентрации на протеини, нормалната граница за този метод от 0,03 g / l също е подценена около три пъти в сравнение с данните, дадени в чуждестранни справочници за клинична лабораторна диагностика.

По-голямата част от лабораториите в западните страни са изоставили използването на сулфосалициловия метод за определяне на концентрацията на протеин в урината и активно използват пирогалолния метод за тази цел. Пирогалолният метод за определяне на концентрацията на протеин в урината и други биологични течности се основава на фотометричния принцип за измерване на оптичната плътност на оцветен комплекс, образуван от взаимодействието на протеинови молекули с молекули на пирогалоловия червен багрилен комплекс и натриев молибдатен комплекс ( Пирогалол червено-молибдат комплекс).

Защо методът с пирогалол осигурява по-точни измервания на протеина в урината? Първо, поради по-голямото разреждане на пробата от урина в реакционната смес. Ако при сулфосалициловия метод съотношението проба от урина / реагент е 1/3, то при метода с пирогалол то може да варира от 1/12,5 до 1/60, в зависимост от варианта на метода, което значително намалява ефекта на състава на урината върху резултат от измерването. Второ, реакцията протича в сукцинатен буфер, тоест при стабилно рН. И накрая, самият принцип на метода, може да се каже, е по-„прозрачен“. Натриевият молибдат и пирогалоловото червено багрило образуват комплекс с протеинова молекула. Това води до факта, че молекулите на багрилото в свободно състояние, които не абсорбират светлина при дължина на вълната 600 nm, абсорбират светлина в комбинация с протеина. По този начин ние маркираме всяка протеинова молекула с багрило и в резултат откриваме, че промяната в оптичната плътност на реакционната смес при дължина на вълната от 600 nm ясно корелира с концентрацията на протеин в урината. Освен това, тъй като афинитетът на пирогалоловото червено към различните протеинови фракции е почти еднакъв, методът ви позволява да определите общия протеин в урината. Следователно границата на нормалните стойности на концентрацията на протеин в урината е 0,1 g/l (това е посочено във всички съвременни западни ръководства за клинична и лабораторна диагностика, включително Клиничното ръководство за лабораторни изследвания, редактирано от N. Titz) . Сравнителните характеристики на пирогалол и сулфосалицилови методи за определяне на протеин в урината са представени в таблица 1.

В заключение бих искал още веднъж да се съсредоточа върху факта, че когато лабораторията премине от сулфосалициловия метод за определяне на протеин в урината към метода с пирогалол, границата на нормалните стойности се повишава значително (от 0,03 g / l до 0,1 g). /л!). Лабораторният персонал със сигурност трябва да информира клиницистите за това, т.к. в тази ситуация диагнозата протеинурия може да се постави само когато съдържанието на протеин в урината надвишава 0,1 g / l.

Библиография.

1. Алтшулер Б.Ю., Раков С.С., Ткачев Г.А. // Въпрос. пчелен мед. химия. - 2001. - № 4. - C.426-438.
2. Ким Ю.В., Потехин О.Е., Токар М.И., Шибанов А.Н. // Lab. пчелен мед. - 2003. - № 6. - C.94-98.
3. Клинично ръководство за лабораторни тестове, изд. Н. Тица.- М.- Унимед-прес.-2003.- 942 с.
4. Козлов А.В., Слепишева В.В. Методи за определяне на протеин в урината: възможности и перспективи // Сборник от трудове на VII годишен. SPb нефрол. семинар. - Санкт Петербург: TNA. - 1999. - C.17-28.
5. Пупкова В.И., Пикалов И.В., Хрикина Е.Н., Харковски А.В. // Новини "Вектор-Бест". - 2003. - № 4 (30).
6. Chambers R.E., Bullock D.G., Whicher J.T. // Ann. Clin. Biochem. - 1991. - кн. 28 (Pt 5). - С.467-473.
7. Клинични лаборатории Медицина. Изд. от Кенет Д. Макклачи. - 2-ро изд.-2001.- 1993p.
8. Eppel G.A., Nagy S., Jenkins M.A., Tudball R.N., Daskalakis M., Balazs N.D.H., Comper W.D. // клиника. Biochem. - 2000. - кн. 33.-P.487-494.
9. Франке Г., Салвати М., Зомер Р.Г. Състав и устройство за анализ на протеин в урината и метод за използване на същите // Патент на САЩ № 5326707. - 1994.
10. Каплан И.В., Левинсън С.С. // клиника. Chem. - 1999. - кн. 45.-С.417-419.
11. Kashif W., Siddiqi N., Dincer H.E., Dincer A.P., Hirsch S. // Cleveland Clin. J. of Med. - 2003. - кн. 70 (6). - С.535-547.
12. Koerbin G, Taylor L, Dutton J, Marshall K, Low P, Potter JM. // клиника. Chem. - 2001. - кн. 47.-P.2183-2184.
13. Le Bricon T., Erlich D., Dussaucy M., Garnier J.P., Bousquet B. // Статия на френски. - Ан. Biol. Clin. (Париж). - 1998. - кн. 56 (6). - С.719-723.
14. Маршал Т., Уилямс К.М. // клиника. Chem. - 2003. - кн. 49 (12). - P.2111-2112.
15. Pugia M., Newman D.J., Lott JA., D'Mello L., Clark L., Profitt JA., Cast T. // Clin. Чим. акта. - 2002. - кн. 326 (1-2). - С.177-183.
16. Ringsrud K.M., Linne J.J. Анализ на урината и телесни течности: ColorText и Atlas // Mosby. - 1995. - С.52-54.
17. Shepard M.D., Penberthy L.A. // клиника. Chem. - 1987. - кн. 33.-P.792-795.
18. Williams K.M., Marshall T. // J. Biochem. Biophys. методи. - 2001. - кн. 47.-С.197-207.
19. Williams K.M., Arthur S.J., Burrell G., Kelly F., Phillips D.W., Marshall T. // J. Biochem. Biophys. методи. - 2003. - кн. 57(1). - С.45-55.

Съдържание [Покажи]

Здравият човек отделя 1,0-1,5 литра урина на ден. Съдържанието на 8–10 mg/dl протеин в него е физиологичен феномен. Дневната норма на протеин в урината от 100-150 mg не трябва да предизвиква подозрение. Глобулинът, мукопротеинът и албуминът съставляват общия протеин в урината. Голямото изтичане на албумин показва нарушение на процеса на филтриране в бъбреците и се нарича протеинурия или албуминурия.

На всяко вещество в урината се определя „здравословна“ норма и ако индексът на протеин се колебае, това може да означава бъбречна патология.

Общият анализ на урината предполага използването или на първата (сутрешна) порция, или се взема ежедневна проба. Последното е за предпочитане за оценка на нивото на протеинурия, тъй като съдържанието на протеин има изразени дневни колебания. Урината през деня се събира в един контейнер, измерва се общият обем. За лаборатория, която анализира урината за протеин, е достатъчна стандартна проба (50 до 100 ml) от този контейнер, останалата част не е необходима. За повече информация се провежда допълнителен тест на Зимницки, който показва дали показателите на урината на ден са нормални.

Методи за определяне на протеин в урината
Преглед	Подвид			Особености
качество	Тест на Гелер			Изследване на урината за наличие на протеин
	Тест за сулфосалицилова киселина
	Анализ на кипене
количествен		Турбидиметричен	Протеинът от урината взаимодейства с реагента, което води до намаляване на неговата разтворимост. Като реактиви се използват сулфосалицилова и трихлороцетна киселина, бензетониев хлорид.
		Колориметричен	При някои вещества протеинът от урината променя цвета си. Това е в основата на биуретовата реакция и метода на Lowry. Използват се и други реактиви - брилянтно синьо, пирогалол червено.
полуколичествен			Дайте относителна представа за количеството протеин, резултатът се интерпретира чрез промяната на цвета на пробата. Полуколичествените методи включват тест ленти и метода Brandberg-Roberts-Stolnikov.

Назад към индекса

Протеинът в урината е нормален при възрастен не трябва да надвишава 0,033 g / l. В този случай дневната норма не е по-висока от 0,05 g / l. За бременните жени нормата на протеин в дневната урина е повече - 0,3 g / l, а в сутрешната урина същата - 0,033 g / l. Нормите на протеина в общия анализ на урината и при деца се различават: 0,036 g / l за сутрешната част и 0,06 g / l на ден. Най-често в лабораториите анализът се извършва по два метода, които показват колко протеинова фракция е в урината. Горните нормални стойности са валидни за анализа, извършен със сулфосалицилова киселина. Ако е използвано пирогалолно червено багрило, стойностите ще се различават с фактор три.

Назад към индекса

• филтрацията в бъбречните гломерули върви по грешен път;
• абсорбцията в тубулите на протеина е нарушена;
• някои заболявания натоварват тежко бъбреците - когато протеинът в кръвта е повишен, бъбреците просто „нямат време“ да го филтрират.

Останалите причини се считат за небъбречни. Така се развива функционалната албуминурия. Протеинът в теста за урина се появява при алергични реакции, епилепсия, сърдечна недостатъчност, левкемия, отравяне, миелом, химиотерапия и системни заболявания. Най-често този показател в анализите на пациента ще бъде първият звънец на хипертонията.

Увеличаването на протеина в урината може да се дължи на непатологични фактори, така че ще са необходими допълнителни изследвания.

Количествените методи за определяне на протеин в урината дават грешки, така че се препоръчва да се проведат няколко анализа и след това да се използва формулата за изчисляване на правилната стойност. Съдържанието на протеин в урината се измерва в g/l или mg/l. Тези стойности на протеина позволяват да се определи нивото на протеинурия, да се предложи причина, да се оцени прогнозата и да се вземе решение за стратегия.

Назад към индекса

За пълното функциониране на тялото е необходим постоянен обмен между кръвта и тъканите. Възможно е само ако има определено осмотично налягане в кръвоносните съдове. Протеините на кръвната плазма просто поддържат такова ниво на налягане, когато нискомолекулните вещества лесно преминават от среда с висока концентрация в среда с по-ниска. Загубата на протеинови молекули води до освобождаване на кръв от неговия канал в тъканите, което е изпълнено със силен оток. Така се проявява умерената и тежка протеинурия.

Началните етапи на албуминурия са асимптоматични. Пациентът обръща внимание само на проявите на основното заболяване, което е причината за белтък в урината.

Следова протеинурия се нарича повишаване на нивото на протеин в урината поради употребата на определени храни.

Урината за анализ се събира в чист, обезмаслен контейнер. Преди събирането се показва тоалетната на перинеума, трябва да се измие със сапун. Жените се съветват да покрият вагината с парче памук или тампон, така че вагиналното течение да не повлияе на резултата. В навечерието е по-добре да не пиете алкохол, минерална вода, кафе, пикантни, солени и храни, които придават цвят на урината (боровинки, цвекло). Силно физическо натоварване, продължително ходене, стрес, треска и изпотяване, прекомерна консумация на протеинови храни или лекарства преди уриниране провокират появата на белтък в урината на напълно здрав човек. Това поносимо явление се нарича следова протеинурия.

Назад към индекса

Бъбречно заболяване, водещо до загуба на протеин:

• Амилоидоза. Нормалните клетки в бъбреците се заменят с амилоиди (протеин-захариден комплекс), което пречи на органа да работи нормално. На протеинуричния етап амилоидите се отлагат в бъбречните тъкани, разрушавайки нефрона и в резултат на това бъбречния филтър. Ето как протеинът преминава от кръвта в урината. Този етап може да продължи повече от 10 години.
• диабетна нефропатия. Поради неправилен метаболизъм на въглехидрати и липиди, настъпва разрушаване на кръвоносните съдове, гломерулите и тубулите в бъбреците. Белтъкът в урината е първият признак на предвидимо усложнение на диабета.
• Заболявания с възпалителен произход - нефрит. Най-често лезиите засягат кръвоносните съдове, гломерулите и тазовата система, нарушавайки нормалното протичане на филтрационната система.
• Гломерулонефритът в повечето случаи има автоимунен характер. Пациентът се оплаква от намаляване на количеството на урината, болки в гърба и повишено налягане. За лечение на гломерулонефрит се препоръчва диета, режим и медикаментозна терапия.
• пиелонефрит. В острия период протича със симптоми на бактериална инфекция: втрисане, гадене, главоболие. Това е инфекциозно заболяване.
• Поликистоза на бъбреците.

В здраво тяло протеиновите молекули (а те са доста големи по размер) не могат да преминат през филтриращата система на бъбреците. Следователно в урината не трябва да има белтък. Тази цифра е еднаква както за мъжете, така и за жените. Ако анализът показва протеинурия, важно е да се консултирате с лекар, за да разберете причините. Специалистът ще прецени колко е повишено нивото на протеина, дали има съпътстваща патология, как да възстанови нормалното функциониране на тялото. Според статистиката жената има по-висок риск от развитие на инфекция на пикочните пътища, отколкото мъжът.

Принцип на метода въз основа на коагулация на протеин в урината в присъствието на азотна (или 20% сулфосалицилова киселина) киселина.

Напредък: 1-2 капки азотна (или сулфосалицилова) киселина се добавят към 5 капки урина. Ако има протеин в урината, се появява мътност.

Таблица. Откриване на патологични компоненти на урината .

Забележка:при наличие на глюкоза и белтък в изследваната урина се определя тяхното количествено съдържание.

Принцип на метода : когато протеинът взаимодейства с пирогалол червено и натриев молибдат, се образува оцветен комплекс, чийто интензитет на цвета е пропорционален на концентрацията на протеин в пробата.

Реактиви: Работен реактив - разтвор на пирогалол червено в сукцинатен буфер, протеинов калибровъчен разтвор с концентрация 0,50 g/l

Напредък:

Смесете пробите, задръжте за 10 минути. при стайна температура (18 -25ºС). Измерете оптичната плътност на експерименталната (Dop) и калибровъчната проба (Dk) спрямо контролната проба при λ=598 (578-610) nm. Цветът е стабилен за 1 час.

Изчисление: концентрацията на протеин в урината (С) g/l се изчислява по формулата:

С= Dop/Dk×0,50

където: Dop \u003d Dk \u003d C \u003d g / l.

Нормални стойности: до 0,094 g/l, (0,141 g/ден)

Заключение:

Принцип на метода : Когато D-глюкозата се окислява от атмосферния кислород под действието на глюкозооксидазата, се образува еквимоларно количество водороден пероксид. Под действието на пероксидазата водородният пероксид окислява хромогенните субстрати (смес от фенол и 4 аминоантипирин - 4AAP) с образуването на оцветен продукт. Интензивността на цвета е пропорционална на съдържанието на глюкоза.

глюкозооксидаза

Глюкоза + O2 + H2O глюконолактон + H2O2

пероксидаза

2H2O2 + фенол + 4AAP оцветено съединение + 4H2O

Напредък: добавете 1 ml работен разтвор и 0,5 ml фосфатен буфер в две епруветки. В първата епруветка се добавят 0,02 ml урина, във втората епруветка се добавят 0,02 ml от калибратора (калибриране, стандартен разтвор на глюкоза, 10 mmol/l). Пробите се смесват, държат се 15 минути при температура 370С в термостат и се измерва оптичната плътност на експерименталните (Dop) и калибровъчните (Dc) проби спрямо работния реагент при дължина на вълната 500-546 nm.

Изчисляване: С = Dop/Dk  10 mmol/l Dop= Dk =

Заключение:

Забележка.Ако съдържанието на захар в урината е повече от 1%, тя трябва да се разреди.

Понастоящем биохимичните лаборатории използват унифициран експресен метод за изследване на урината за глюкоза чрез реактивна хартия за глюкоза Glucotest или чрез комбинирани тест ленти за pH, протеин, глюкоза, кетонни тела и кръв. Тест лентите се спускат в съд с урина за 1 секунда. и сравнете цветовата скала.

Определяне на протеин с помощта на пирогалолов червен индикатор

Принципът на метода се основава на фотометричното измерване на оптичната плътност на разтвор на оцветен комплекс, образуван от взаимодействието на протеинови молекули с молекули на комплекса пирогалол червено-молибдатно багрило в кисела среда. Интензитетът на цвета на разтвора е пропорционален на съдържанието на протеин в тестовия материал. Наличието на детергенти в реагента осигурява еквивалентно определяне на протеини с различна природа и структура.

Реактиви. 1) 1,5 mmol/l разтвор на пирогалол червено (PGD): 60 mg PGA се разтварят в 100 ml метанол. Да се ​​съхранява при температура 0–5 °C; 2) 50 mmol/l сукцинатен буфер рН 2,5: 5,9 g янтарна киселина (HOOC-CH2-CH2-COOH); 0,14 g натриев оксалат (Na2C2O4) и 0,5 g натриев бензоат (C6H5COONa) се разтварят в 900 ml дестилирана вода; 3) 10 mmol/l разтвор на натриев молибдат кристален хидрат (Na2MoO4 × 2H2O): 240 mg натриев молибдат се разтварят в 100 ml дестилирана вода; 4) Работен реагент: 40 ml разтвор на PGA и 4 ml разтвор на натриев молибдат се добавят към 900 ml разтвор на сукцинатен буфер. рН на разтвора се регулира до 2,5 с 0,1 mol/l разтвор на солна киселина (HCl) и обемът се регулира до 1 литър. Реагентът в тази форма е готов за употреба и е стабилен при съхранение на защитено от светлина място и при температура 2–25 °C в продължение на 6 месеца; 5) 0,5 g/l стандартен разтвор на албумин.

Напредък на дефиницията. В първата епруветка се добавят 0,05 ml от изследваната урина, във втората епруветка се добавят 0,05 ml стандартен разтвор на албумин, а в третата епруветка (контролна проба) се добавят 0,05 ml дестилирана вода, след това 3 ml от работната реагент се добавя към тези епруветки. Съдържанието на епруветките се смесва и след 10 минути пробата и стандартът се фотометрират спрямо контролната проба при дължина на вълната 596 nm в кювета с дължина на оптичния път 10 mm.

Изчисляването на концентрацията на протеин в тестовата проба от урина се извършва по формулата:

където С е концентрацията на протеин в пробата от урина, g/l; Apr и Ast - екстинкция на изследваната проба от урина и стандартен разтвор на албумин, g/l; 0,5 - концентрация на стандартен разтвор на албумин, g/l.

Бележки:

• цветът на разтвора (цветен комплекс) е стабилен за един час;
• правопропорционалната връзка между концентрацията на протеин в тестовата проба и абсорбцията на разтвора зависи от вида на фотометъра;
• при съдържание на белтък в урината над 3 g/l, пробата се разрежда с изотоничен разтвор на натриев хлорид (9 g/l) и определянето се повтаря. Степента на разреждане се взема предвид при определяне на концентрацията на протеин.

Вижте също:

• Определяне на протеин в урината
• Стандартизиран тест със сулфосалицилова киселина
• Единен метод на Брандберг–Робъртс–Столников
• Определяне на количеството протеин в урината чрез реакция със сулфосалицилова киселина
• Биурет метод
• Откриване на протеин на Bence-Jones в урината

Протеинурията е явление, при което се определя протеин в урината, което показва възможността за увреждане на бъбреците, служи като фактор за развитието на заболявания на сърцето, кръвоносните и лимфните съдове.

Откриването на протеин в урината не винаги показва заболяване. Подобно явление е характерно дори за абсолютно здрави хора, в чиято урина може да се определи протеин. Хипотермия, физическа активност, употребата на протеинови храни води до появата на протеин в урината, който изчезва без никакво лечение.

По време на скрининга протеинът се открива при 17% от видимо здравите хора, но само при 2% от този брой хора положителният резултат от теста е признак на бъбречно заболяване.

Протеиновите молекули не трябва да влизат в кръвта. Те са жизненоважни за организма – те са градивният материал за клетките, участват в реакции като коензими, хормони, антитела. И при мъжете, и при жените нормата е пълната липса на протеин в урината.

Функцията за предпазване на тялото от загуба на протеинови молекули се изпълнява от бъбреците.

Има две системи на бъбреците, които филтрират урината:

1. бъбречни гломерули - не пропускат големи молекули, но не задържат албумини, глобулини - малка част от протеиновите молекули;
2. бъбречни тубули - адсорбират протеини, филтрирани от гломерулите, връщат се обратно в кръвоносната система.

В урината се откриват албумини (около 49%), мукопротеини, глобулини, от които имуноглобулините представляват около 20%.

Глобулините са суроватъчни протеини с високо молекулно тегло, които се произвеждат от имунната система и черния дроб. Повечето от тях се синтезират от имунната система, отнасят се до имуноглобулини или антитела.

Албумините са фракцията от протеини, които първи се появяват в урината вече при леко увреждане на бъбреците. Определено количество албумин има и в здравата урина, но то е толкова незначително, че не се открива с помощта на лабораторна диагностика.

Долният праг, който може да бъде открит с помощта на лабораторна диагностика, е 0,033 g / l. Ако се губят повече от 150 mg протеин на ден, тогава се говори за протеинурия.

Основни факти за протеина в урината

Заболяването с лека степен на протеинурия е асимптоматично. Визуално урината, която не съдържа протеин, не може да се разграничи от урината, която съдържа малко количество протеин. Донякъде пенеста урина става вече с висока степен на протеинурия.

Възможно е да се приеме активно отделяне на протеин в урината от външния вид на пациента само с умерена или тежка степен на заболяването чрез появата на оток на крайниците, лицето и корема.

В ранните стадии на заболяването индиректни признаци на протеинурия могат да бъдат симптоми:

• промени в цвета на урината;
• нарастваща слабост;
• липса на апетит;
• гадене, повръщане;
• болка в костите;
• сънливост, световъртеж;
• повишена температура.

Появата на такива признаци не трябва да се пренебрегва, особено по време на бременност. Това може да означава леко отклонение от нормата и може да е симптом на развиваща се прееклампсия, прееклампсия.

Количественото определяне на загубата на протеин не е лесна задача, за постигане на по-пълна картина на състоянието на пациента се използват няколко лабораторни теста.

Трудностите при избора на метод за откриване на излишния протеин в урината се обясняват с:

• ниска концентрация на протеин, за чието разпознаване са необходими високоточни инструменти;
• съставът на урината, което усложнява задачата, тъй като съдържа вещества, които изкривяват резултата.

Най-голяма информация може да се получи от анализа на първата сутрешна порция урина, която се събира след събуждане.

В навечерието на анализа трябва да се спазват следните условия:

• не използвайте пикантни, пържени, протеинови храни, алкохол;
• избягвайте приема на диуретици в продължение на 48 часа;
• ограничаване на физическата активност;
• внимателно спазвайте правилата за лична хигиена.

Най-информативна е сутрешната урина, тъй като тя остава дълго време в пикочния мехур и в по-малка степен зависи от приема на храна.

Възможно е да се анализира количеството протеин в урината чрез произволна порция, която се взема по всяко време, но такъв анализ е по-малко информативен и вероятността от грешка е по-висока.

За количествено определяне на дневната загуба на протеин се прави анализ на общата дневна урина. За целта в рамките на 24 часа цялата отделена през деня урина се събира в специален пластмасов контейнер. Можете да започнете да събирате по всяко време. Основното условие е точно един ден събиране.

Качественото определение на протеинурията се основава на свойството на протеина да денатурира под въздействието на физични или химични фактори. Качествените методи са методи за скрининг, които ви позволяват да определите наличието на протеин в урината, но не дават възможност да се оцени точно степента на протеинурия.

Използвани мостри:

• с варене;
• сулфосалицилова киселина;
• азотна киселина, реактив на Ларионова с пръстеновидния тест на Хелър.

Тест със сулфосалицилова киселина се извършва чрез сравняване на контролна проба от урина с опитна, при което към урината се добавят 7-8 капки 20% сулфосалицилова киселина. Изводът за наличието на протеин се прави по интензитета на опалесциращата мътност, която се появява в епруветката по време на реакцията.

По-често се използва тестът на Geller с 50% азотна киселина. Чувствителността на метода е 0,033 g/l. При тази концентрация на протеин в епруветка с проба от урина и реактив 2-3 минути след началото на експеримента се появява бял нишковиден пръстен, чието образуване показва наличието на протеина.

Тест на Гелер

Полуколичествените методи включват:

• метод за определяне на протеин в урината с тест ленти;
• Метод Брандберг-Робъртс-Столников.

Методът за определяне на Брандберг-Робъртс-Столников се основава на метода на пръстена на Гелер, но позволява по-точна оценка на количеството протеин. При извършване на изследване по този метод с няколко разреждания на урината се постига появата на нишковиден протеинов пръстен в интервала от време между 2-3 минути от началото на изследването.

В практиката се използва методът на тест ленти с нанесено багрило бромофенол синьо като индикатор. Недостатъкът на тест лентите е селективната чувствителност към албумин, което води до изкривяване на резултата в случай на повишаване на концентрацията на глобулини или други протеини в урината.

Недостатъците на метода включват и относително ниската чувствителност на теста към протеина. Тест лентите започват да реагират на наличието на протеин в урината при концентрация на протеин над 0,15 g / l.

Методите за количествено определяне могат условно да се разделят на:

1. турбидиметричен;
2. колориметричен.

Методите се основават на свойството на протеините да намаляват разтворимостта под действието на свързващ агент с образуването на слабо разтворимо съединение.

Свързващите протеините агенти могат да бъдат:

• сулфосалицилова киселина;
• трихлороцетна киселина;
• бензетониев хлорид.

Резултатите от тестовете се заключават въз основа на степента на отслабване на светлинния поток в суспензионната проба в сравнение с контролата. Резултатите от този метод не винаги могат да бъдат приписани на надеждни поради разликите в условията на провеждане: скоростта на смесване на реагентите, температурата, киселинността на средата.

Повлияйте на оценката на приема на лекарства предишния ден, преди провеждане на тестове с помощта на тези методи, не можете да приемате:

• антибиотици;
• сулфонамиди;
• йодни препарати.

Методът е достъпен, което позволява широкото му приложение за скрининг. Но по-точни резултати могат да бъдат получени с помощта на по-скъпи колориметрични техники.

Колориметричните техники са сред чувствителните методи за точно определяне на концентрацията на белтък в урината.

За да направите това с висока точност, позволете:

• биуретова реакция;
• техника на Лоури;
• техники за оцветяване, които използват багрила, които образуват комплекси с протеини в урината, които се различават визуално от пробата.

Колориметрични методи за откриване на белтък в урината

Методът е надежден, високочувствителен, позволяващ определяне на албумин, глобулини, парапротеини в урината. Използва се като основен начин за изясняване на противоречиви резултати от тестове, както и ежедневен протеин в урината при пациенти с нефрологични отделения на болници.

Още по-точни резултати могат да бъдат постигнати чрез метода на Lowry, който се основава на биуретовата реакция, както и реакцията на Folin, която разпознава триптофан и тирозин в протеинови молекули.

За да се елиминират възможните грешки, пробата от урина се пречиства чрез диализа от аминокиселини, пикочна киселина. Възможни са грешки при използване на салицилати, тетрациклини, хлорпромазин.

Най-точният начин за определяне на протеин се основава на способността му да се свързва с багрила, от които се използват:

• понсо;
• кумази брилянтно синьо;
• пирогалово червено.

През деня количеството протеин, отделено в урината, се променя. За по-обективна оценка на загубата на протеин в урината се въвежда понятието дневен протеин в урината. Тази стойност се измерва в g/ден.

За бърза оценка на дневния протеин в урината се определя количеството протеин и креатинин в една порция урина, след което се използва съотношението протеин/креатинин, за да се направи заключение за загубата на протеин на ден.

Методът се основава на факта, че скоростта на отделяне на креатинин в урината е постоянна стойност, не се променя през деня. При здрав човек нормалното съотношение протеин:креатинин в урината е 0,2.

Този метод елиминира възможните грешки, които могат да възникнат при събирането на ежедневната урина.

Качествените проби са по-склонни от количествените тестове да дадат фалшиво положителни или фалшиво отрицателни резултати. Възникват грешки във връзка с приема на лекарства, хранителни навици, физическа активност в навечерието на теста.

Тълкуването на този качествен тест се дава чрез визуална оценка на мътността в епруветката в сравнение на резултата от теста с контролата:

1. слабо положителна реакция се оценява като +;
2. положителен ++;
3. рязко положителен +++.

Пръстеновият тест на Heller е по-точен при оценката на наличието на протеин в урината, но не определя количествено протеина в урината. Подобно на теста за сулфосалицилова киселина, тестът на Heller дава само груба представа за количеството протеин в урината.

Методът ви позволява да определите количествено степента на протеинурия, но е твърде трудоемък, неточен, тъй като при силно разреждане точността на оценката намалява.

За да изчислите протеина, трябва да умножите степента на разреждане на урината по 0,033 g / l:

1	1	1: 2	0,066
1	2	1: 3	0,099
1	3	1: 4	0,132
1	4	1: 5	0,165
1	5	1: 6	0,198
1	6	1: 7	0,231
1	7	1: 8	0,264
1	8	1: 9	0,297
1	9	1: 10	0,33

Тестът не изисква специални условия, тази процедура е лесна за извършване у дома. За да направите това, трябва да спуснете тест лентата в урината за 2 минути.

Резултатите ще бъдат изразени чрез броя на плюсовете на лентата, чието декодиране се съдържа в таблицата:

1. Резултатите от теста, съответстващи на стойности до 30 mg/100 ml, съответстват на физиологичната протеинурия.
2. Стойностите на тест лентата 1+ и 2++ показват значителна протеинурия.
3. Стойности 3+++, 4++++ се наблюдават при патологична протеинурия, причинена от бъбречно заболяване.

Тест лентите могат само приблизително да определят повишения протеин в урината. Те не се използват за точна диагноза и още повече, че не могат да кажат какво означава.

Не позволявайте тест ленти за адекватна оценка на количеството протеин в урината на бременни жени. По-надежден метод за оценка е определянето на протеин в ежедневната урина.

Определяне на протеин в урината с помощта на тест лента:

Ежедневният протеин в урината служи като по-точна диагноза за оценка на функционалното състояние на бъбреците. За да направите това, трябва да съберете цялата урина, отделена от бъбреците на ден.

Допустимите стойности за съотношението протеин / креатинин са данните, дадени в таблицата:

Ако загубите повече от 3,5 g протеин на ден, състоянието се нарича масивна протеинурия.

Ако има много белтък в урината, се изисква втори преглед след 1 месец, след това след 3 месеца, според резултатите от който се установява защо нормата е превишена.

Причините за повишен протеин в урината са повишеното му производство в организма и нарушаване на бъбречната функция, протеинурията се отличава:

• физиологични - незначителни отклонения от нормата са причинени от физиологични процеси, решават се спонтанно;
• патологични - промените са причинени в резултат на патологичен процес в бъбреците или други органи на тялото, прогресира без лечение.

Леко увеличение на протеина може да се наблюдава при обилно протеиново хранене, механични изгаряния, наранявания, придружени от увеличаване на производството на имуноглобулини.

Леката степен на протеинурия може да бъде причинена от физическа активност, психо-емоционален стрес и прием на определени лекарства.

Физиологичната протеинурия се отнася до повишаване на протеина в урината при деца в първите дни след раждането. Но вече след седмица от живота съдържанието на протеин в урината на детето се счита за отклонение от нормата и показва развиваща се патология.

Бъбречните заболявания, инфекциозните заболявания също понякога са придружени от появата на белтък в урината.

Такива състояния обикновено съответстват на лека степен на протеинурия, са преходни явления, бързо изчезват сами, без да изискват специално лечение.

По-тежки състояния, тежка протеинурия се отбелязва в случай на:

• гломерулонефрит;
• диабет
• сърдечно заболяване;
• рак на пикочния мехур;
• множествена миелома;
• инфекция, нараняване, причинено от лекарства, поликистоза на бъбреците;
• високо кръвно налягане;
• системен лупус еритематозус;
• Синдром на Гудпасчър.

Чревна обструкция, сърдечна недостатъчност, хипертиреоидизъм могат да причинят следи от протеин в урината.

Разновидностите на протеинурията се класифицират по няколко начина. За качествена оценка на протеините можете да използвате класификацията на Ярошевски.

Според систематиката на Ярошевски, създадена през 1971 г., протеинурията се разграничава:

1. бъбречна - която включва нарушение на гломерулната филтрация, освобождаване на тубуларен протеин, недостатъчна обратна абсорбция на протеини в тубулите;
2. преренална - възниква извън бъбреците, екскреция на хемоглобин, протеини, които се срещат в излишък в кръвта в резултат на множествена миелома;
3. постренална - възниква в областта на пикочните пътища след бъбреците, отделянето на протеин по време на разрушаването на пикочните органи.

За да се определи количествено какво се случва, степента на протеинурия е условно изолирана. Трябва да се помни, че те могат лесно да станат по-тежки без лечение.

Най-тежкият стадий на протеинурия се развива при загуба на повече от 3 g протеин на ден. Загубата на протеин от 30 mg до 300 mg на ден съответства на умерен стадий или микроалбумнурия. До 30 mg протеин в дневната урина означава лека степен на протеинурия.

Колко протеин в урината?

1. Обикновено в урината практически няма протеин (по-малко от 0,002 g / l). Въпреки това, при определени условия, малко количество протеин може да се появи в урината на здрави индивиди след прием на голямо количество протеинова храна, в резултат на охлаждане, с емоционален стрес, продължителна физическа активност (така наречената маршируваща протеинурия).

   Появата на значително количество протеин в урината (протеинурия) е патология. Протеинурията може да бъде причинена от заболявания на бъбреците (остър и хроничен гломерулонефрит, пиелонефрит, нефропатия на бременността и др.) или пикочните пътища (възпаление на пикочния мехур, простатата, уретерите). Бъбречната протеинурия може да бъде органична (гломерулна, тубулна и прекомерна) и функционална (фебрилна протеинурия, ортостатична при юноши, с прехранени бебета, при новородени). Функционалната протеинурия не е свързана с бъбречна патология. Дневното количество протеин варира при пациенти от 0,1 до 3,0 g или повече. Съставът на протеините в урината се определя чрез електрофореза. Появата на протеин на Bence-Jones в урината е характерна за мултиплен миелом и макроглобулинемия на Waldenström, #223;2 микроглобулин в случай на увреждане на бъбречните тубули.

2. Обикновено в урината практически няма протеин (по-малко от 0,002 g / l).
3. Основните признаци на заболяването се откриват при изследване на урината.

   SG Специфично тегло. Намаляването на специфичното тегло показва намаляване на способността на бъбреците да концентрират урината и да премахват токсините от тялото, което се случва при бъбречна недостатъчност. Увеличаването на специфичното тегло е свързано с голямо количество захар и соли в урината. Трябва да се отбележи, че е невъзможно да се оцени специфичното тегло само с едно изследване на урината, може да има случайни промени, необходимо е да се повтори изследването на урината 1-2 пъти.

   Протеин Протеин в урината - протеинурия. Причината за протеинурия може да бъде увреждане на самите бъбреци с нефрит, амилоидоза, увреждане от отрови. Протеинът в урината може да се появи и поради заболявания на пикочните пътища (пиелонефрит, цистит, простатит).

   Глюкоза Глюкозата (захар) в урината - глюкозурия - най-често се причинява от диабет. По-рядка причина е увреждане на бъбречните тубули. Много е тревожно, ако заедно със захарта в урината се определят кетонни тела. Това се случва при тежък, неправилно регулиран захарен диабет и е предвестник на най-тежкото усложнение на диабета – диабетна кома.

   Билирубин, уробилиноген Билирубин и уробилин се определят в урината при различни форми на жълтеница.

   Еритроцити Еритроцити в урината - хематурия. Това се случва или при увреждане на самите бъбреци, най-често при тяхното възпаление, или при пациенти със заболявания на пикочните пътища. Ако например по тях се движи камък, той може да нарани лигавицата, в урината ще има червени кръвни клетки. Разлагащият се бъбречен тумор също може да доведе до хематурия.

   Левкоцити Левкоцити в урината - левкоцитурия, най-често следствие от възпалителни промени в пикочните пътища при пациенти с пиелонефрит, цистит. Левкоцитите често се определят при възпаление на женските външни полови органи, при мъжете - при възпаление на простатната жлеза.

   Цилиндрите Цилиндрите са своеобразни микроскопични образувания. Хиалиновите цилиндри в количество от 1-2 могат да бъдат при здрав човек. Те се образуват в бъбречните тубули, това са частици протеин, залепени заедно. Но увеличаването на техния брой, цилиндри от други видове (гранулирани, еритроцитни, мастни) винаги показват увреждане на самата бъбречна тъкан. Има цилиндри при възпалителни заболявания на бъбреците, метаболитни лезии, например, захарен диабет.

   Информативност на метода и неговите граници. Информативността на общия тест за урина за разпознаване на специфични бъбречни заболявания е ниска, обикновено са необходими допълнителни, по-точни изследвания. Но това изследване е много важно, особено при провеждане на превантивни изследвания, тъй като ви позволява да идентифицирате ранните признаци на бъбречно заболяване. Известно е също, че често бъбречните заболявания са скрити и само изследването на урината позволява да се подозират и да се извършат допълнителни необходими изследвания.

4. В повечето лаборатории, когато изследват урината за протеин, първо използват качествени реакции, които не откриват протеин в урината на здрав човек. Ако протеинът в урината се открие чрез качествени реакции, се извършва количествено (или полуколичествено) определяне. Същевременно са важни особеностите на използваните методи, обхващащи различен спектър от уропротеини. По този начин, когато се определя протеин с помощта на 3% сулфосалицилова киселина, количеството протеин до 0,03 g / l се счита за нормално, докато се използва методът на пирогалол, границата на нормалните протеинови стойности се повишава до 0,1 g / l. В тази връзка във формуляра за анализ трябва да се посочи нормалната стойност на протеина за използвания от лабораторията метод.

   При определяне на минималните количества протеин се препоръчва да се повтори анализът, в съмнителни случаи трябва да се определи дневната загуба на протеин в урината. Нормалната дневна урина съдържа протеин в малки количества. При физиологични условия филтрираният протеин почти напълно се реабсорбира от епитела на проксималните тубули и съдържанието му в дневното количество урина варира според различните автори от следи до 20-50, 80-100 mg и дори до 150-200 mg. мг. Някои автори смятат, че дневната екскреция на протеини в размер на 30-50 mg / ден е физиологичната норма за възрастен. Други предполагат, че отделянето на протеин с урината не трябва да надвишава 60 mg/m2 телесна повърхност на ден, с изключение на първия месец от живота, когато физиологичната протеинурия може да бъде четири пъти над посочената стойност.

   Общото условие за появата на протеини в урината на здрав човек е тяхната достатъчно висока концентрация в кръвта и молекулно тегло не повече от 100-200 kDa.

5. това не е норма, с вашата диагноза това е възможно, друго нещо е, че за нефротичния синдром това всъщност е малък показател .. погледнете клиниката - подуване, натиск и т.н. продължете да приемате предписаното лечение ..
6. и все пак ще кажа: НЕ трябва да е нормално!