Kvalitativno određivanje proteina u urinu. Proteini u urinu, laboratorijske pretrage

Brandberg-Roberts-Stolnikov metoda se odnosi na semi-kvantitativne metode za određivanje ukupnog proteina u urinu. Metoda se bazira na Hellerovom prstenastom testu, koji se sastoji u tome da se na granici dušične kiseline i urina, u prisustvu proteina, koagulira i pojavljuje se bijeli prsten.

Reagensi

50% rastvor azotne kiseline ili reagens Larionova.
Priprema Larionova reagensa: pripremiti zasićeni rastvor natrijum hlorida (20 - 30 g soli se rastvori u 100 ml vode kada se zagreje, ostavi da odstoji dok se ne ohladi). Supernatant se ocijedi, filtrira. U 99 ml filtrata dodati 1 ml koncentrovane azotne kiseline. Umjesto azotne kiseline može se dodati 2 ml koncentrovane hlorovodonične kiseline.

Napredak definicije

U epruvetu se ulije 1 - 2 ml azotne kiseline (ili Larionskog reagensa), pusti se da se kiselina ocijedi sa stijenki epruvete (5 - 8 minuta), u suprotnom, kada se proteinski urin nanese slojevima, nastaje zamućenje. zbog miješanja dušične kiseline na stijenkama epruvete s urinom, što sprječava stvaranje izrazitog prstena. Stoga je potrebno prethodno pripremiti seriju epruveta sa kiselinom. Pipetom pažljivo nanesite istu količinu filtriranog prozirnog urina duž stijenke epruvete, trudeći se da ne protresete tekućinu u epruveti. Pojava tankog bijelog prstena na granici između dvije tekućine između 2. i 3. minute ukazuje na prisustvo proteina u koncentraciji od približno 0,033 g/L. Vrijeme nanošenja slojeva se računa kao četvrt minute.

Ako se prsten pojavi ranije od 2 minute nakon nanošenja slojeva, urin treba razrijediti vodom i ponoviti nanošenje slojeva već razrijeđenog urina. Stepen razblaženja urina se bira u zavisnosti od vrste prstena, odnosno njegove širine, kompaktnosti i vremena pojavljivanja. Kod filiformnog prstena koji se pojavio prije 2 minute, urin se razrijedi 2 puta, kod širokog - 4 puta, kod kompaktnog - 8 puta itd. Oznaka od 1 ml i dodavanje vode do oznake, koliko puta se vrši uzgoj. Sadržaj epruvete se dobro promeša Pasteurom pipetom sa balonom. Ako se tokom razrjeđivanja urina pojavi zamućenost, tada se smjesa mora ponovo filtrirati i samo prozirni filtrat nanijeti na dušičnu kiselinu. Koncentracija proteina se zatim izračunava množenjem 0,033 omjerom razrjeđenja i izražava se u gramima po litru (g/l). Takvo razrjeđivanje urina je odabrano tako da kada se nanese na dušičnu kiselinu, prsten se pojavljuje u 2. - 3. minuti.

U slučaju da se između 1. i 4. minute formira prsten sa nerazrijeđenim ili razrijeđenim urinom, može se koristiti Ehrlich-Althausenova korekcija kako se urin ne bi dodatno razrjeđivao (ovo štedi vrijeme). Autori su predložili da se odredi vrijeme pojave filamentoznog prstena i da se ispravi proračun za vrijeme. U ovom slučaju, količina proteina se izračunava množenjem 0,033 g/l sa stepenom razblaženja i korekcijom.

Kada se prsten formira prije isteka 1 minute, potrebno je napraviti jedno frakciono razrjeđivanje, odnosno 1,5 puta (dva dijela urina i 1 dio vode). Ovo razrjeđivanje se također uzima u obzir prilikom izračunavanja količine proteina u urinu.

Primjer određivanja ukupnog proteina u urinu metodom Brandberg-Roberts-Stolnikov.

Kada se urin nanese na reagens, odmah se formira široki prsten. Urin je razrijeđen 4 puta (1 dio urina + 3 dijela vode), slojevit; odmah se dobija filiformni prsten. Potrebno je razrijediti postojeće razrjeđenje za još 2 puta; pri nanošenju slojeva ovog razblaženja formira se prsten nakon 1,5 minuta. Ne možete se više razmnožavati.

Proračun proteina: urin je razrijeđen 4 i 2 puta, dakle 8 puta. Količina proteina je 0,033*8*1 1/4 = 0,33 g/l

Nedostaci metode Brandberg-Roberts-Stolnikov:

• subjektivnost,
• napornost,
• smanjenje točnosti određivanja koncentracije proteina kako se urin razrjeđuje.

Vidi također:

književnost:

• Priručnik "Laboratorijske metode istraživanja u klinici", ur. prof. V. V. Menshikov. - Moskva, "Medicina", 1987
• L. V. Kozlovskaya, A. Yu. Nikolaev. Udžbenik o metodama kliničkih laboratorijskih istraživanja. Moskva, Medicina, 1985
• A. Ya. Althausen, "Klinička laboratorijska dijagnostika" - Moskva, Medgiz, 1959.
• A. Ya. Lyubina, L. P. Ilyicheva i koautori, "Klinička laboratorijska istraživanja", Moskva, "Medicina", 1984.

Proteinurija (proteinurija) - pojava proteina u urinu u koncentracijama koje ga mogu identificirati kvalitativnim metodama.

Razlikovati

• Bubrežna proteinurija i
• Ekstrarenalna (postrenalna) proteinurija

Bubrežna proteinurija

Bubrežna proteinurija je uzrokovana oštećenjem glomerularnog filtera ili disfunkcijom epitela uvijenih tubula.

Razlikovati selektivnu i neselektivnu proteinuriju ovisno o odnosu pojedinih proteina plazme i urina, njihovoj molekularnoj težini i naboju.

Selektivna proteinurija

Selektivna proteinurija javlja se uz minimalno (često reverzibilno) oštećenje glomerularnog filtera, koje predstavljaju proteini niske molekularne težine (molekularna težina ne prelazi 68.000) - albumin, ceruloplazmin, transferin.

Neselektivna proteinurija

Neselektivna proteinurija je češća sa ozbiljnijim oštećenjem filtera, kada počinju da se gube veliki molekularni proteini. Selektivnost proteinurije je važna dijagnostička i prognostička karakteristika.

Bubrežna proteinurija može biti:

• organski i
• funkcionalna (fiziološka).

Organska bubrežna proteinurija

Organska bubrežna proteinurija nastaje organskim oštećenjem nefrona. U zavisnosti od preovlađujućeg mehanizma nastanka, mogu se razlikovati određene vrste organske proteinurije.

Glomerularna proteinurija

Glomerularna proteinurija - zbog oštećenja glomerularnog filtera, javlja se kod glomerulonefritisa i nefropatije povezane s metaboličkim ili vaskularnim oboljenjima. (glomerulonefritis, hipertenzija, infektivni i alergijski faktori, srčana dekompenzacija)

tubularna proteinurija

Tubularna proteinurija - povezana sa nesposobnošću tubula da reapsorbuju plazmatske proteine ​​niske molekularne težine koji su prošli kroz nepromenjeni glomerularni filter. (amiloidoza, akutna tubularna nekroza, intersticijski nefritis, Fanconijev sindrom)

Prerenalna proteinurija

Prerenalna proteinurija (prekomerna) - razvija se u prisustvu neuobičajeno visoke koncentracije proteina niske molekularne težine u plazmi, koji se filtrira u normalnim glomerulima u količini koja premašuje fiziološku sposobnost tubula da se reapsorbuju. (multipli mijelom, nekroza mišićnog tkiva, hemoliza eritrocita)

Funkcionalna bubrežna proteinurija

Funkcionalna bubrežna proteinurija nije povezana s bolešću bubrega i ne zahtijeva liječenje.

Funkcionalna proteinurija uključuje:

• marširanje,
• emocionalno
• hladno,
• intoksikacija,
• ortostatski (samo kod djece i samo u stojećem položaju).

Ekstrarenalna (postrenalna) proteinurija

S ekstrarenalnom (postrenalnom) proteinurijom, protein može ući u urin iz urinarnog i genitalnog trakta (kod kolpita i vaginitisa - s nepravilno prikupljenim urinom). U ovom slučaju, ovo nije ništa drugo nego mješavina upalnog eksudata.

Ekstrarenalna proteinurija obično ne prelazi 1 g/dan i često je prolazna.

Dijagnoza ekstrarenalne proteinurije pomaže se testom od tri čaše i urološkim pregledom.

Postrenalna proteinurija se javlja kod cistitisa, uretritisa.

Metode za određivanje proteina u urinu

Preduvjet za provođenje studija o prisutnosti proteina je apsolutna transparentnost urina.

Kvalitetni uzorci

Uzorak sa sulfosalicilnom kiselinom

U dvije epruvete sipa se 3–4 ml filtriranog urina. Dodajte 6-8 kapi 20% rastvora sulfosalicilne kiseline u eksperimentalnu epruvetu. Druga cijev je kontrola. Na tamnoj pozadini uporedite kontrolnu epruvetu sa eksperimentalnom. U prisustvu proteina u uzorcima urina, pojavljuje se opalescentna zamućenost.

Rezultat je prikazan na sljedeći način:

• reakcija je slabo pozitivna (+),
• pozitivno (++),
• oštro pozitivno (+++).

Uzorak je vrlo osjetljiv.

Možete koristiti i suhi test, kada se u nekoliko mililitara urina doda nekoliko kristala sulfosalicilne kiseline ili filter papir prethodno natopljen otopinom ove kiseline.

Lažno pozitivni rezultati može biti posljedica uzimanja preparata joda, sulfa lijekova, velikih doza penicilina i prisutnosti visokih koncentracija mokraćne kiseline u urinu.

Test azotne kiseline (Gellerov test)

U epruvetu se sipa 1-2 ml 50% rastvora azotne kiseline, a zatim se na kiselinu nanese jednaka količina urina. U prisustvu proteina, bijeli prsten se pojavljuje na granici između dvije tekućine. Ponekad se crvenkasto-ljubičasti prsten formira nešto iznad granice između tekućina zbog prisustva urata. Uratni prsten se, za razliku od proteinskog, rastvara uz lagano zagrijavanje.

Svijetli uzorak

Test Bright boil i testovi za skrining proteinurije (suvi kolorimetrijski uzorci) praktično ne zahtijevaju reagense.

Kada se urin koji sadrži protein prokuha, denaturira, stvarajući mutni talog ili ljuspice koji se ne otapaju u 6% sirćetnoj kiselini, za razliku od fosfatnih soli. Skrining testovi se zasnivaju na sposobnosti proteina (albumina) da promijeni boju papira obloženog indikatorom (obično bromofenol plavim) i puferom. Direktna veza između intenziteta boje indikatorskog papira (Albufan, Albutest - Češka; Labstix, Multistix - SAD; Comburtest - Njemačka) i količine proteina omogućava grubu procjenu količine proteinurije. Međutim, trenutno korišteni skrining testovi nisu bez nedostataka. Konkretno, bromofenol plavo ne otkriva Bence-Jones protein.

Kvantitativne metode

Brandberg-Roberts-Stolnikov metoda

Metoda se zasniva na kvalitativnom uzorku sa dušičnom kiselinom. Tok testa je gore opisan. Pojava tankog prstena na granici dvije tekućine između 2. i 3. minute nakon nanošenja slojeva ukazuje na prisustvo 0,033 g/l proteina u urinu (koncentracija proteina u urinu se obično izražava u ppm, tj. u gramima po litri ). Ako se prsten pojavi prije 2 minute, urin treba razrijediti vodom. Takvo razrjeđivanje urina je odabrano tako da kada se nanese na dušičnu kiselinu, prsten se pojavi u 2-3 minuti. Stepen razblaženja zavisi od širine i kompaktnosti prstena i vremena njegovog pojavljivanja.

Koncentracija proteina se izračunava množenjem 0,033 g/l sa stepenom razblaženja urina (tabela 8).

Roberts-Stolnikovova metoda razrjeđivanja ima brojne nedostatke: subjektivna je, dugotrajna, točnost određivanja koncentracije proteina opada kako se urin razrjeđuje.

Najpogodnije i najpreciznije su nefelometrijske i biuretne metode.

Nefelometrijska metoda

Zasnovan je na svojstvu proteina da daje zamućenje sa sulfosalicilnom kiselinom, čiji je intenzitet proporcionalan koncentraciji proteina. 1,25 ml filtriranog urina sipa se u graduisanu epruvetu i doda se 3% rastvor sulfosalicilne kiseline do zapremine od 5 ml, dobro promeša. Nakon 5 minuta, ekstinkcija se mjeri na FEK-M (ili bilo kom drugom fotometru) na talasnoj dužini od 590–650 nm (filter narandžastog ili crvenog svjetla) naspram kontrole u kiveti sa debljinom sloja od 0,5 cm. , koristi se 1,25 ml filtrirane mokraće (isto), kojoj se dodaje izotonični rastvor natrijum hlorida u zapremini od 5 ml.

Kalibraciona kriva se preliminarno gradi ovisno o vrijednosti ekstinkcije na koncentraciji proteina. Standardna otopina albumina (iz ljudskog ili goveđeg seruma) koristi se za pripremu različitih koncentracija proteina. Popunite radni list.

Biuret metoda

Zasniva se na sposobnosti proteina da sa bakrenim sulfatom i kaustičnom alkalijom daje kompleks ljubičastog biureta, čiji je intenzitet boje direktno proporcionalan količini proteina. U 2 ml mokraće dodajte 2 ml rastvora trihloroctene kiseline da se istaloži protein i centrifugirajte. Supernatant se odbacuje. U talog (protein) dodati 4 ml 3% rastvora NaOH i 0,1 ml 20% rastvora bakar sulfata, promešati i centrifugirati. Ljubičasti supernatant se fotometrira na talasnoj dužini od 540 nm (filter zelene svetlosti) na destilovanu vodu u kiveti sa debljinom sloja od 1,0 cm Koncentracija proteina se određuje iz tabele dobijene empirijski (kalibraciona kriva se gradi kao u prethodnom metoda).

Ortostatski test

Indicirano za sumnju na ortostatsku proteinuriju i nefroptozu. Nakon potpunog pražnjenja mokraćnog mjehura, ispitanik zadržava horizontalni položaj 2 sata, a zatim, bez ustajanja, ispušta jednu (kontrolnu) porciju urina. U naredna 2 sata ispitanik hoda neprekidno, zadržavajući položaj maksimalne lumbalne lordoze (drži štap iza donjeg dijela leđa), nakon čega ispušta drugu porciju urina. U oba dijela urina utvrđuje se koncentracija proteina i sadržaj proteina u gramima, a u slučaju nefroptoze broj crvenih krvnih stanica u 1 ml. Kod ortostatske proteinurije, proteinurija ili 2-3 puta povećanje početnog sadržaja proteina u gramima otkriva se u drugoj porciji. Pojava hematurije, često u kombinaciji sa proteinurijom u tragovima u drugom dijelu, karakteristična je za nefroptozu.

Određivanje Bence-Jones uroproteina

Bence-Jones proteini su termolabilni paraproteini niske molekularne težine (relativne molekulske težine 20.000-45.000) koji se nalaze uglavnom u multiplom mijelomu i Waldenstromovoj makroglobulinemiji. Oni su laki L-lanci imunoglobulina. Zbog svoje male molekularne težine, L-lanci lako prolaze iz krvi kroz netaknuti bubrežni filter u urin i tamo se mogu odrediti reakcijom termoprecipitacije. Studiju je preporučljivo provesti samo uz pozitivan test sa sulfosalicilnom kiselinom. Definicija se provodi na sljedeći način. U 10 ml urina dodajte 3-4 kapi 10% rastvora sirćetne kiseline i 2 ml zasićenog rastvora natrijum hlorida, lagano zagrejte u vodenom kupatilu, postepeno povećavajući temperaturu. Ako u urinu postoje Bence-Jones proteini, tada se na temperaturi od 45-60 ° C pojavljuje difuzna zamućenost ili se formira gusti bijeli talog. Daljnjim zagrijavanjem do ključanja talog se otapa, a hlađenjem se ponovo pojavljuje. Ovaj uzorak nije dovoljno osjetljiv i mora se provjeriti elektroforezom i imunoelektroforezom.

Target- Određivanje proteina u urinu.

Indikacije- hipertenzivna stanja u trudnoći, oboljenja bubrega kod trudnica

Kontraindikacije- Ne.

Moguće komplikacije- Ne

Resursi- posuda, sterilna tegla, epruvete, 30% sulfosalicilna ili 3% sirćetna kiselina, pipeta, alkoholni gorionik.

Algoritam akcije:

1. Objasnite trudnici o potrebi određivanja proteina u urinu.

2. Zamolite trudnicu da skupi urin u sterilnu teglu.

3. Test sa sulfosalicilnom kiselinom: u epruvetu sipajte 4-5 ml urina, dodajte 6-10 kapi kiseline. Ako u urinu ima proteina, stvara se precipitat ili zamućenje.

4. Uzorak sa 3% sirćetne kiseline: u epruvetu sipajte 8-10 ml mokraće, prokuhajte na alkoholnom plameniku, ako urin sadrži proteine, zamutiće se. Dodajte nekoliko kapi 3% rastvora sirćetne kiseline u zamućen urin. Ako zamućenje u urinu nestane, test je negativan.

NAPOMENE Određuje se na prijemnom odjeljenju akušerske ustanove.

Standard "Određivanje datuma očekivanog datuma rođenja."

Cilj: procijeniti praktičnu sposobnost diplomca u određivanju datuma očekivanog roka

Indikacije- svaka posjeta porodilištu za trudnicu.

Kontraindikacije- Ne

Moguće komplikacije- Ne

Resursi- stol, dvije stolice, kalendar, akušerski kalendar, pisane podatke o datumu prvog dana posljednje menstruacije, prvom pojavljivanju u antenatalnoj ambulanti, datumu ultrazvuka sa zaključkom, datumu prenatalnog odsustva

Algoritam akcije:

1. Predstavite se, objasnite ženi značenje izračunavanja predviđenog termina porođaja.
2. Od trudnice saznajte prvi dan posljednje menstruacije, ovom datumu dodajte 280 dana ili, koristeći Negele formulu, dodajte 7 dana na 1 dan posljednje menstruacije i oduzmite 3 mjeseca, dobije se datum porođaja. za menstruaciju.
3. Saznajte datum prvog pokreta fetusa, dodajte 140 dana ovom danu za prvorotkinje i 154 dana za višeporodice, rezultirajući datum je rok za pomicanje fetusa.
4. Prema menstrualnom ciklusu odredite kog dana je nastupila zadnja ovulacija i od prvog dana zadnje menstruacije odbrojite tri mjeseca unazad i dodajte broj dana prije ovulacije, dobijete datum rođenja.
5. Izračunajte termin porođaja pri prvom pojavljivanju u antenatalnoj ambulanti. Greška će biti minimalna ako je trudnica išla kod lekara tokom prvih 12 nedelja trudnoće.
6. Odredite termin poroda prema datumu prenatalnog odsustva. Period prenatalnog odsustva počinje u 30. sedmici trudnoće. Ovom datumu dodaje 10 sedmica, dobija se datum rođenja.
7. Izračunajte termin porođaja ultrazvukom koji se izvodi u antenatalnoj ambulanti.

Standard "Pregled spoljašnjih genitalnih organa"

Cilj: procijeniti praktične vještine maturanta prilikom pregleda vanjskih genitalija trudnice

Indikacije- inicijalna žalba akušerskoj ustanovi trudnice, prijem u bolnicu uz redovnu porođajnu aktivnost.

Kontraindikacije- Ne

Moguće komplikacije- Ne

Resursi– ženski fantom, kauč, jednokratno rublje za kauč

Algoritam akcije:

1. Predstavite se, objasnite ženi važnost pregleda spoljašnjih genitalija, faze njegovog sprovođenja, dobijete njen pristanak

2. Izvršite higijensku dezinfekciju ruku

3. Stavite sterilne rukavice na obe ruke.

4. Pregledati vanjske genitalne organe: procijeniti vrstu rasta dlačica, strukturu velikih i malih usana, klitoris, stanje perineuma.

5. Palcem i kažiprstom obje ruke raširiti velike usne, ispitati stanje vanjskog otvora uretre, predvorja vagine, palpirati predio Bartholinovih žlijezda (donja trećina velikih usana).

6. Skinite jednokratne rukavice i stavite ih u sigurnu kutiju za odlaganje.

7. Operite ruke sapunom.

8. Dajte trudnici informacije o stanju spoljašnjih genitalija.

9. Zabilježite u dokumentaciji.

BILJEŠKA Pregled se obavlja povjerljivo, bez ponižavanja dostojanstva žene.

Standard "Pružanje hitne pomoći za eklampsiju"

Cilj: procijeniti praktične vještine diplomca koji pruža hitnu pomoć za eklampsiju

Indikacije- Napadi kod eklampsije

Kontraindikacije- Ne

Moguće komplikacije- ponovljeni napadi, eklamptična koma.

Resursi– model žene, 25% rastvor magnezijum sulfata, lopatica, držač za jezik, špric od 20 ml, fiziološki rastvor 500 ml, sistem za intravensku infuziju, alkohol, vata, podvezak

Algoritam akcije:

1. U slučaju napada, pozvati svo slobodno osoblje i tim za reanimaciju bez napuštanja pacijenta.

2. Uradite sljedeće u isto vrijeme:

· oslobodite disajne puteve otvaranjem usta lopaticom ili kašikom umotanom u gazu, izvucite jezik držačem za jezik.

Uklonite pljuvačku iz usne šupljine, čim dođe do udisaja, osigurajte slobodan pristup zraka.

Nakon zaustavljanja napadaja intravenozno, unesite početnu dozu magnezijum sulfata - 25% -20 ml u trajanju od 10-15 minuta.

3. Započnite intravensku infuziju 320 ml fiziološkog rastvora sa 80 ml - 25% rastvora magnezijum sulfata

4. Pod kontrolom krvnog pritiska i tekućom terapijom magnezijumom pacijentkinju prebaciti na nosila i transportovati u jedinicu intenzivne nege najbližeg porodilišta.

BILJEŠKA

Kod eklampsije porođaj treba nastupiti nakon stabilizacije stanja pacijenta, ali najkasnije 12 sati od početka napadaja.

Standard "Hitna pomoć za tešku preeklampsiju".

Cilj: procijeniti praktične vještine diplomca u pružanju hitne pomoći za tešku preeklampsiju

Indikacije- teška preeklampsija

Kontraindikacije- tokom napadaja

Moguće komplikacije- Napadi, eklamptička koma.

Resursi– model žene, 25% rastvor magnezijum sulfata, špric od 20 ml, fiziološki rastvor 500 ml, sistem za intravensku infuziju, alkohol, vata, podvezak

Algoritam akcije:

1. Dijagnoza: "Teška preeklampsija" ako je prisutan jedan od ovih simptoma: glavobolja, bol u epigastričnoj regiji, smetnje vida, mušice pred očima, mučnina, povraćanje, na pozadini arterijske hipertenzije (140/90 mm Hg i više). ) i proteinurija.

2. Pozovite svo besplatno osoblje i tim za reanimaciju bez napuštanja pacijenta.

3. Uradite sljedeće u isto vrijeme:

Položite trudnicu na ravnu površinu, izbjegavajući oštećenje i okrenite pacijentovu glavu na jednu stranu.

Intravenozno unesite početnu dozu magnezijum sulfata - 25% -20 ml u trajanju od 10-15 minuta.

4. Započnite intravensku infuziju 320 ml normalnog fiziološkog rastvora sa 80 ml 25% rastvora magnezijum sulfata.

5. Kada je krvni pritisak jednak ili veći od 160/100 mm Hg. reguliše krvni pritisak prepisivanjem 10 mg nifedipina sublingvalno, ponovo nakon 30 minuta 10 mg pod kontrolom krvnog pritiska (održavanje krvnog pritiska na 130/90-140/95 mm Hg).

6. Pod kontrolom krvnog pritiska i tekućom terapijom magnezijumom pacijentkinju prebaciti na nosila i transportovati u jedinicu intenzivne nege najbližeg porodilišta.

BILJEŠKA Ako se pojave znaci predoziranja magnezijum sulfatom, injicirajte 10 ml 10% rastvora Ca glukonata intravenozno tokom 10 minuta.

Standard amniotomije.

Target- otvaranje fetalne bešike.

Indikacije- prije indukcije porođaja, stimulacije porođaja, slabosti porođaja Kontraindikacije- prijeteća stanja majke ili fetusa

Moguće komplikacije- prolaps malih dijelova fetusa, ascendentna infekcija, ozljeda žila fetalne bešike, odvajanje normalno locirane posteljice

Resursi- ginekološka stolica, individualna pelena, sterilne rukavice, antiseptik za liječenje vanjskih genitalija žene, grana pincete.

Algoritam akcije:

1. Predstavite se.

2. Objasnite ženi potrebu za ovom operacijom.

3. Uzmite informirani pristanak pacijenta za proceduru

4. Položite ženu na ginekološku stolicu sa krevetom za jednokratnu upotrebu ispod nje.

5. Obraditi ženine spoljašnje genitalne organe antiseptičkim rastvorom, staviti sterilnu pelenu na želudac.

6. Izvršite higijensku dezinfekciju ruku.

7. Nosite jednokratne rukavice na obje ruke.

8. Prstima lijeve ruke raširite usne, uzastopno ubacite u vaginu

kažiprst, zatim srednji prst desne ruke.

9. Unesite granu pincete u vaginu između indeksa i sredine

prsti.

10. Probušite amnionsku vrećicu.

11. Kažiprst, a zatim srednji prst unesite u otvor na fetalnoj bešici, postepeno proširite rupu, uklonite membrane sa glave. Plodvu vodu otpuštajte polako, pod kontrolom prstiju (prevencija prolapsa sitnih dijelova, odvajanje normalno smještene posteljice).

13. Izvucite prste.

14. Skinite rukavice i stavite ih u sigurnu kutiju za odlaganje.

15. Operite ruke sapunom.

16. Zapišite podatke iz istorije porođaja.

BILJEŠKA.

Kod polihidramnija se napravi mala rupa i voda se polako ispušta. Potrebno je kontrolirati brzinu odljeva vode, jer uz njihov brz i oštar izljev, mali dijelovi fetusa mogu ispasti. Nakon izbijanja vode, ženi se preporučuje da leži 30 minuta.

Uputstvo

Kvalitativne metode za određivanje proteina u urin: Hellerova metoda, test 20% sulfosalicilne kiseline, test ključanja, itd. Semi-kvantitativne metode: upotreba dijagnostičkih test traka za određivanje proteina u urin, Brandberg-Roberts-Stolnikov metoda. Kvantitativne metode: turbidimetrijska i kolorimetrijska.

Određivanje proteina u dnevnom urin u koncentraciji od 0,033 g/l ili više je patologija. U pravilu, u jutarnjem dijelu urina, koncentracija proteina ne prelazi 0,002 g/l, au dnevnom urin koncentracija proteina nije veća od 50-150 mg proteina.

Izvori:

• određivanje proteina u urinu

Urin je proizvod ljudskog metabolizma. Nastaje tokom filtracije krvi u bubrezima, zbog čega sastav urina daje jasan opis stanja ljudskog organizma.

Urin je složeni rastvor više od 150 jedinjenja. Neke specifične tvari, na primjer, aceton, žučne kiseline, proteini, glukoza, mogu biti prisutne samo kod određenih bolesti.

Za kontrolu zdravlja ljudi, prije svega, potrebno je odrediti količinu urina. Norma je formiranje 1-1,8 litara urina dnevno. Kada se izluči više od 2 litre urina, to je znak mogućeg poremećaja u radu bubrega, dijabetes melitusa i niza drugih bolesti. Ako se dnevno formira manje od 0,5 litara urina, dolazi do začepljenja uretera ili mokraćne bešike.

boja urina

Boja izlučenog urina zavisi od mnogih faktora, pa može varirati, od svetlo žute do narandžaste. Na prisutnost određenih nijansi mogu utjecati određena hrana, kao i lijekovi koje osoba uzima.

Nakon uzimanja lijekova, urin može postati obojen i dobiti crvenkastu nijansu. Ako se osoba aktivno kreće, a oslobađa veliku količinu znoja, urin će imati intenzivnu žutu boju, kao kod uzimanja lijekova kao što su Nitroxoline ili Biomycin.

Ako osoba nije uzimala hranu i lijekove za bojenje, ali mu je boja urina drugačija od uobičajene, može se posumnjati na prisustvo bolesti u tijelu. Na primjer, kod bolesti jetre, urin će imati tamnožutu ili zelenkastu boju.

Prisustvo krvi u izlučenom urinu jasno ukazuje na prisustvo kamena ili bubrežno krvarenje, ako se primećuje i bol.

Ako je mokrenje otežano, to može ukazivati ​​na upalni proces uzrokovan infekcijom u mjehuru. Ali prljav i zamućen urin ukazuje na tešku bolest bubrega.

Proteini u urinu

U krvi osobe nema proteina ili je njegova količina toliko mala da se ne može utvrditi laboratorijskim testovima. Ako se u urinu otkrije protein, potrebno je ponoviti testove, jer može biti prisutan kada se osoba probudi ujutro, kao i nakon teškog fizičkog rada ili vježbanja kod sportaša.

Vizuelno utvrditi da li je protein prisutan u urinu ili ne je 100% nemoguće. Može se samo nagađati kada se u urinu nalazi velika količina bjelkastih pahuljica.

Ako se protein u urinu više puta otkriva, to ukazuje na prisustvo neke vrste bolesti bubrega. Upalni procesi koji se javljaju u njima izazivaju blagi porast količine proteina. Ako se urinom izluči više od 2 grama, ovo je alarmni signal.

Pijelonefritis je upalna bolest koja zahvaća bubrežnu karlicu, čašice i parenhim. U većini slučajeva, upala je uzrokovana bakterijskom infekcijom. Potpuni oporavak moguć je samo uz pravovremenu dijagnozu, stoga je, kada se pojave simptomi, neophodan temeljit pregled.

Male količine proteina se nalaze u dnevnom urinu zdravih osoba. Međutim, tako male koncentracije ne mogu se otkriti konvencionalnim istraživačkim metodama. Izlučivanje veće količine proteina, pri čemu uobičajeni kvalitativni testovi na protein u urinu postanu pozitivni, naziva se proteinurija. Postoje renalna (prava) i ekstrarenalna (lažna) proteinurija. Kod bubrežne proteinurije, protein ulazi u urin direktno iz krvi zbog povećanja njegove filtracije u glomerulima bubrega ili smanjenja tubularne reapsorpcije.

Bubrežna (prava) proteinurija

Bubrežna (prava) proteinurija je funkcionalna i organska. Među funkcionalnom bubrežnom proteinurijom najčešće se primjećuju sljedeće vrste:

Fiziološka proteinurija novorođenčadi, koja nestaje 4. - 10. dana nakon rođenja, a kod nedonoščadi nešto kasnije;
- ortostatska albuminurija, koja je tipična za djecu od 7-18 godina i javlja se samo u uspravnom položaju tijela;
- prolazna (moždana) albuminurija, koja može biti uzrokovana raznim bolestima probavnog sistema, teškom anemijom, opekotinama, povredama ili fiziološkim faktorima: teškim fizičkim naporima, hipotermijom, jakim emocijama, obiljem hrane bogate proteinima itd.

Organska (bubrežna) proteinurija se javlja zbog prolaska proteina iz krvi kroz oštećena područja endotela bubrežnih glomerula kod bolesti bubrega (glomerulonefritis, nefroza, nefroskleroza, amiloidoza, nefropatija trudnoće), poremećaja bubrežne hemodinamike (renalne hipertenzija, hipoksija), trofičko i toksično (uključujući i ljekovito) djelovanje na zidove glomerularnih kapilara.

Ekstrarenalna (lažna) proteinurija

Ekstrarenalna (lažna) proteinurija, u kojoj je izvor proteina u urinu mješavina leukocita, eritrocita, bakterija, urotelnih stanica. uočeno kod uroloških bolesti (urolitijaza, tuberkuloza bubrega, tumori bubrega i mokraćnih puteva itd.).

Određivanje proteina u urinu

Većina kvalitativnih i kvantitativnih metoda za određivanje proteina u urinu zasniva se na njegovoj koagulaciji u zapremini urina ili na granici medija (urina i kiseline).

Među kvalitativnim metodama za određivanje bedka u urinu, najšire se koriste objedinjeni test sa sulfosalicilnom kiselinom i Hellerov prsten.

Standardizirani uzorak sa sulfasalicilnom kiselinom izvodi se na sljedeći način. 3 ml filtrirane mokraće se sipa u 2 epruvete. U jedan od njih dodajte 6-8 kapi 20% rastvora sulfasalicilne kiseline. Obje cijevi se upoređuju na tamnoj pozadini. Zamućenost urina u epruveti sa sulfasalicilnom kiselinom ukazuje na prisustvo proteina. Prije studije potrebno je odrediti reakciju urina, a ako je alkalna, zakiseliti s 2-3 kapi 10% otopine octene kiseline.

Gellerov test se zasniva na činjenici da u prisustvu proteina u urinu na granici dušične kiseline i urina dolazi do zgrušavanja i pojavljivanja bijelog prstena. U epruvetu se sipa 1-2 ml 30% rastvora azotne kiseline i tačno ista količina filtrirane mokraće pažljivo se nanese duž zida epruvete. Pojava bijelog prstena na granici između dvije tekućine ukazuje na prisustvo proteina u urinu. Treba imati na umu da se ponekad bijeli prsten formira u prisustvu velike količine urata, ali za razliku od proteinskog prstena, on se pojavljuje malo iznad granice između dvije tekućine i otapa se kada se zagrije [Pletneva N.G., 1987].

Najčešće korištene kvantitativne metode su:

1) objedinjenu metodu Brandberg-Roberts-Stolnikov, koja se zasniva na testu Hellerovog prstena;
2) fotoelektrokolorimetrijska metoda za kvantitativno određivanje proteina u urinu po zamućenju nastaloj dodatkom sulfasalicilne kiseline;
3) biuretska metoda.

Detekcija proteina u urinu pojednostavljenom ubrzanom metodom vrši se kolorimetrijskom metodom pomoću indikatorskog papira, koji proizvodi Lachema (Slovačka), Albuphan, Ames (Engleska), Albustix, Boehringer (Njemačka), Comburtest itd. Metoda se sastoji u uranjanjem posebne papirnate trake impregnirane tetrabromfenol plavim i citratnim puferom u urin, koja mijenja boju od žute do plave ovisno o sadržaju proteina u urinu. Provizorno, koncentracija proteina u test urinu se određuje pomoću standardne skale. Da biste dobili tačne rezultate, moraju biti ispunjeni sljedeći uslovi. pH urina treba da bude u rasponu od 3,0-3,5; previše alkalan urin (pH 6,5) će dati lažno pozitivan rezultat, a previše kiseli urin (pH 3,0) lažno negativan.

Papir ne smije biti u kontaktu s test urinom duže nego što je navedeno u uputama, inače će test dati lažno pozitivnu reakciju. Potonje se također opaža kada postoji velika količina sluzi u urinu. Osjetljivost različitih vrsta i serija papira može biti različita, pa se kvantitativnoj procjeni proteina u urinu ovom metodom treba postupati s oprezom. Odrediti njegovu količinu u dnevnom urinu pomoću indikatorskog papira je nemoguće [Pletneva N.G., 1987]

Definicija dnevne proteinurije

Postoji nekoliko načina za određivanje količine proteina koji se dnevno izlučuje urinom. Najjednostavnija je Brandberg-Roberts-Stolnikov metoda.

Metodologija. U epruvetu se ulije 5-10 ml dobro izmiješanog dnevnog urina i duž njenih stijenki pažljivo se doda 30% otopina dušične kiseline. U prisustvu proteina u urinu u količini od 0,033% (tj. 33 mg na 1 litar urina), nakon 2-3 minute pojavljuje se tanak, ali jasno vidljiv bijeli prsten. Pri nižoj koncentraciji test je negativan. S većim sadržajem proteina u urinu, njegova količina se određuje ponovljenim razrjeđivanjem urina destilovanom vodom sve dok se prsten ne prestane formirati. U posljednjoj epruveti u kojoj je prsten još uvijek vidljiv, koncentracija proteina će biti 0,033%. Množenjem 0,033 sa stepenom razrijeđenosti urina, odredite sadržaj proteina u 1 litru nerazrijeđenog urina u gramima. Zatim se sadržaj proteina u dnevnom urinu izračunava po formuli:

K \u003d (x V) / 1000

gdje je K količina proteina u dnevnom urinu (g); x je količina proteina u 1 litri urina (g); V je količina izlučenog urina dnevno (ml).

Normalno, od 27 do 150 mg (prosječno 40-80 mg) proteina se izluči urinom tokom dana.

Ovaj test vam omogućava da u urinu odredite samo fine proteine ​​(albumin). Preciznije kvantitativne metode (kolorimetrijska Kjeldahlova metoda, itd.) su prilično složene i zahtijevaju posebnu opremu.

Kod bubrežne proteinurije mokraćom se ne izlučuju samo albumini, već i druge vrste proteina. Normalni proteinogram (prema Seitz et al., 1953) ima sljedeći procenat: albumini - 20%, α1 -globulini - 12%, α2 -globulini - 17%, γ-globulini - 43% i β-globulini - 8% . Omjer albumina i globulina se mijenja kod raznih bolesti bubrega, tj. kvantitativni odnos između proteinskih frakcija je narušen.

Najčešće metode frakcionisanja uroproteina su: isoljavanje neutralnim solima, elektroforetsko frakcionisanje, imunološke metode (reakcija radijalne imunodifuzije po Manciniju, imunoelektroforetska analiza, precipitacijska imunoelektroforeza), hromatografija, gel filtracija i ultracentrifugiranje.

U vezi sa uvođenjem metoda za frakcionisanje uroproteina zasnovanih na proučavanju elektroforetske pokretljivosti, varijabilnosti molekulske mase, veličine i oblika molekula uroproteina, postalo je moguće izolovati tipove proteinurije karakteristične za određenu bolest, proučavati klirense pojedinačni proteini plazme. Do danas je u urinu otkriveno više od 40 proteina plazme, uključujući 31 protein plazme u normalnom urinu.

Selektivna proteinurija

Posljednjih godina pojavio se koncept selektivnosti proteinurije. Godine 1955. Hardwicke i Squire formulirali su koncept "selektivne" i "neselektivne" proteinurije, utvrdivši da filtracija proteina plazme u urinu slijedi određeni obrazac: što je veća molekularna težina proteina izlučenog u urinu, što je manji klirens i niža koncentracija u urinu.konačni urin. Proteinurija, koja odgovara ovom obrascu, je selektivna, za razliku od neselektivne, za koju je karakteristična perverzija izvedenog uzorka.

Otkrivanje proteina s relativno velikom molekulskom težinom u urinu ukazuje na odsustvo selektivnosti bubrežnog filtera i njegovo izraženo oštećenje. U tim slučajevima se govori o niskoj selektivnosti proteinurije. Stoga je trenutno određivanje proteinskih frakcija u urinu metodama elektroforeze u škrobnim i poliakrilamidnim gelovima postalo široko rasprostranjeno. Na osnovu rezultata ovih istraživačkih metoda može se suditi o selektivnosti proteinurije.

Prema V.S. Makhlini (1975), najopravdanije je određivanje selektivnosti proteinurije poređenjem klirensa 6-7 pojedinačnih proteina krvne plazme (albumin, traneferin, α2 - makroglobulin, IgA, IgG, IgM) pomoću tačnih i specifične kvantitativne imunološke metode reakcije radijalne imunodifuzije po Manciniju, imunoelektroforetsku analizu i precipitacijske imunoelektroforeze. Stepen selektivnosti proteinurije određen je indeksom selektivnosti, koji predstavlja omjer upoređenih i referentnih proteina (albumina).

Proučavanje klirensa pojedinačnih proteina plazme omogućava dobijanje pouzdanih informacija o stanju filtracionih bazalnih membrana glomerula bubrega. Odnos između prirode proteina koji se izlučuju u mokraću i promjena bazalnih membrana glomerula je toliko izražen i konstantan da se uroproteinogramom može indirektno suditi patofiziološke promjene u glomerulima bubrega. Normalno, prosječna veličina pora bazalne membrane glomerula je 2,9-4 A ° NM, koje mogu proći proteine ​​molekulske težine do 10 4 (mioglobulin, kiseli α 1 - glikoprotein, imunoglobulinski laki lanci, Fc i Fab - IgG fragmenti, albumin i transferin).

Kod glomerulonefritisa, nefrotskog sindroma, povećava se veličina pora u bazalnim membranama glomerula, te stoga bazalna membrana postaje propusna za proteinske molekule velike veličine i mase (ceruloplazmin, haptoglobin, IgG, IgA, itd.). Uz ekstremno oštećenje glomerula bubrega, u urinu se pojavljuju džinovski molekuli proteina krvne plazme (α2-makroglobulin, IgM i β2-lipoprotein).

Određivanjem proteinskog spektra urina može se zaključiti da su određeni dijelovi nefrona pretežno zahvaćeni. Za glomerulonefritis s dominantnom lezijom bazalnih membrana glomerula karakteristično je prisustvo proteina velike i srednje molekularne težine u urinu. Za pijelonefritis s dominantnom lezijom bazalnih membrana tubula karakteristični su odsutnost velikih molekularnih proteina i prisutnost povećane količine proteina srednje i male molekularne težine.

β 2 -Mikroglobulin

Pored dobro poznatih proteina kao što su albumin, imunoglobulini, lipoproteini. fibrinogen, transferin, urin sadrži proteine ​​mikroproteina plazme, među kojima je klinički interes β 2 -mikroglobulin, koji su otkrili Berggard i Bearn 1968. Imajući malu molekulsku masu (relativna molekulska težina 1800), slobodno prolazi kroz bubrežne glomerule. i reapsorbuje se u proksimalnim tubulima. Ovo omogućava kvantitativno određivanje β2-mikroglobulina u krvi i urinu kako bi se odredila glomerularna filtracija i sposobnost bubrega da resorbuju proteine ​​u proksimalnim tubulima.

Koncentracija ovog proteina u krvnoj plazmi i urinu se određuje radioimunotestom pomoću standardnog kompleta "Phade-bas β 2 -mikroiest" (Pharmacia, Švedska). Krvni serum zdravih ljudi sadrži u prosjeku 1,7 mg/l (raspon od 0,6 do 3 mg/l), u urinu – u prosjeku 81 μg/l (maksimalno 250 μg/l) β 2 -mikroglobulina. Njegov višak u urinu preko 1000 mcg/l je patološki fenomen. Sadržaj β2-mikroglobulina u krvi raste kod bolesti praćenih poremećenom glomerularnom filtracijom, posebno kod akutnog i kroničnog glomerulonefritisa, policistične bolesti bubrega, nefroskleroze, dijabetičke nefropatije, akutnog zatajenja bubrega.

Koncentracija β2-mikroglobulina u urinu raste s bolestima praćenim kršenjem funkcije reapsorpcije tubula, što dovodi do povećanja njegovog izlučivanja u urinu za 10-50 puta, posebno kod pijelonefritisa, kroničnog bubrežnog zatajenje, gnojna intoksikacija itd. Karakteristično je da kod cistitisa u za razliku od pijelonefritisa, nema povećanja koncentracije β 2 -mikroglobulina u urinu, što se može koristiti za diferencijalnu dijagnozu ovih bolesti. Međutim, pri tumačenju rezultata studije, mora se uzeti u obzir da je svako povećanje temperature uvijek praćeno povećanjem izlučivanja β 2 -mikroglobulina u urinu.

Prosječni molekuli krvi i urina

Srednji molekuli (SM), inače zvani proteinski toksini, su tvari molekularne težine 500-5000 daltona. Njihova fizička struktura je nepoznata. Sastav SM uključuje najmanje 30 peptida: oksitocin, vazopresin, angiotenzin, glukagon, adrenokortikotropni hormon (ACTH) itd. Prekomjerna akumulacija SM se uočava sa smanjenjem funkcije bubrega i velikom količinom deformisanih proteina i njihovih metabolita u krv. Imaju različita biološka dejstva i neurotoksični su, uzrokuju sekundarnu imunosupresiju, sekundarnu anemiju, inhibiraju biosintezu i eritropoezu proteina, inhibiraju aktivnost mnogih enzima i remete faze upalnog procesa.

Nivo SM u krvi i urinu utvrđuje se skrining testom, kao i spektrofotometrijom u ultraljubičastoj zoni na talasnoj dužini 254 i 280 mm na spektrofotometru DI-8B, kao i dinamičkom spektrofotometrijom sa kompjuterskom obradom talasne dužine. opseg od 220-335 nm na istom Beckman spektrometru. Sadržaj SM u krvi uzima se kao norma, jednaka 0,24 ± 0,02 arb. jedinica, au urinu - 0,312 ± 0,09 arb. jedinice
Budući da su normalni otpadni proizvodi tijela, oni se normalno uklanjaju iz njega noću glomerularnom filtracijom za 0,5%; 5% njih se zbrinjava na drugi način. Sve SM frakcije prolaze kroz tubularnu reapsorpciju.

Uroproteini koji nisu plazma (tkivni).

Pored proteina krvne plazme, u urinu mogu biti i proteini koji nisu u plazmi (tkivi). Prema Buxbaumu i Franklinu (1970), proteini koji nisu u plazmi čine približno 2/3 svih biokoloida u urinu i značajan udio uroproteina u patološkoj proteinuriji. Tkivni proteini ulaze u urin direktno iz bubrega ili organa koji su anatomski povezani sa mokraćnim putevima, ili ulaze u krv iz drugih organa i tkiva, a iz nje kroz bazalne membrane glomerula bubrega u mokraću. U potonjem slučaju, izlučivanje proteina tkiva u urinu odvija se slično kao i izlučivanje proteina plazme različite molekularne težine. Sastav neplazma uroproteina je izuzetno raznolik. Među njima su glikoproteini, hormoni, antigeni, enzimi (enzimi).

Tkivni proteini u urinu se otkrivaju konvencionalnim metodama proteinske kemije (ultracentrifugiranje, gel kromatografija, razne vrste elektroforeza), specifičnim reakcijama na enzime i hormone i imunološkim metodama. Potonji također omogućavaju određivanje koncentracije uroproteina koji nije plazma u urinu i, u nekim slučajevima, određivanje struktura tkiva koje su postale izvor njegovog izgleda. Glavna metoda za detekciju neplazma proteina u urinu je imunodifuzijska analiza sa antiserumom dobivenim imunizacijom eksperimentalnih životinja ljudskim urinom i naknadno osiromašenim (adsorbiranim) proteinima krvne plazme.

Ispitivanje enzima u krvi i urinu

U patološkom procesu uočavaju se duboki poremećaji vitalne aktivnosti stanica, praćeni oslobađanjem intracelularnih enzima u tekući medij tijela. Enzimodijagnostika se zasniva na određivanju određenog broja enzima koji se oslobađaju iz ćelija zahvaćenih organa i nisu karakteristični za krvni serum.
Istraživanja ljudskog i životinjskog nefrona su pokazala da u njegovim pojedinim dijelovima postoji visoka enzimska diferencijacija, usko povezana sa funkcijama koje svaki odjel obavlja. Glomeruli bubrega sadrže relativno male količine različitih enzima.

Ćelije bubrežnih tubula, posebno proksimalnih, sadrže maksimalnu količinu enzima. Njihova visoka aktivnost uočena je u Henleovoj petlji, direktnim tubulima i sabirnim kanalima. Promjene aktivnosti pojedinih enzima kod različitih bubrežnih bolesti zavise od prirode, težine i lokalizacije procesa. Uočavaju se prije pojave morfoloških promjena u bubrezima. Budući da je sadržaj različitih enzima jasno lokaliziran u nefronu, određivanje jednog ili drugog enzima u urinu može doprinijeti topikalnoj dijagnozi patološkog procesa u bubrezima (glomeruli, tubuli, korteks ili medula), diferencijalnoj dijagnozi bubrežne bolesti i određivanje dinamike (slabljenje i pogoršanje) procesa u bubrežnom parenhima.

Za diferencijalnu dijagnozu bolesti genitourinarnog sistema koristi se određivanje aktivnosti u krvi i urinu sljedećih enzima: laktat dehidrogenaze (LDH), leucin aminopeptidaze (LAP), kisele fosfataze (AP), alkalne fosfataze (AP) , β-glukuronidaza, glutamin-oksaloacetatna transaminaza (GST), aldolaza, transamidinaza itd. Aktivnost enzima u krvnom serumu i urinu utvrđuje se biohemijskim, spektrofotometrijskim, hromatografskim, fluorometrijskim i hemiluminiscentnim metodama.

Enzimurija kod bolesti bubrega je izraženija i pravilnija od enzimemije. Posebno je izražen u akutnom stadijumu bolesti (akutni pijelonefritis, traume, karijes tumora, infarkt bubrega itd.). Kod ovih bolesti utvrđena je visoka aktivnost transamidinaze, LDH, alkalne fosfataze i CP, hijaluronidaze, LAP, kao i nespecifičnih enzima kao što je GST, katalaza [Polyantseva LR, 1972].

Selektivna lokalizacija enzima u nefronu nakon otkrivanja LAP-a i alkalne fosfataze u urinu omogućava nam pouzdano govoriti o akutnim i kroničnim bolestima bubrega (akutna bubrežna insuficijencija, bubrežna tubularna nekroza, kronični glomerulonefritis) [Shemetov V.D., 1968]. Prema A.A. Karelinu i L.R. Polyantsevoj (1965), transamidinaza se nalazi samo u dva organa - bubregu i pankreasu. To je mitohondrijski enzim bubrega i normalno je odsutan u krvi i urinu. Kod različitih bolesti bubrega, transamidinaza se pojavljuje u krvi i urinu, a kod oštećenja gušterače - samo u krvi.

Diferencijalni test u dijagnozi glomerulonefritisa i pijelonefritisa Krotkiewski (1963) razmatra aktivnost alkalne fosfataze u urinu, čije je povećanje tipičnije za pijelonefritis i dijabetičku glomerulosklerozu nego za akutni i kronični nefritis. Povećanje dinamike amilasemije uz istovremeno smanjenje amilazurije može ukazivati ​​na nefrosklerozu i naboranje bubrega, LAP je najvažniji za patološke promjene u glomerulima i uvijenim tubulima bubrega, jer je njegov sadržaj u ovim dijelovima nefrona veći [Shepotinovski V.P. et al., 1980]. Za dijagnozu lupusnog nefritisa preporučuje se određivanje β-glukuronidaze i CF [Privalenko M.N. et al., 1974].

Prilikom procjene uloge enzimurije u dijagnozi bolesti bubrega, treba uzeti u obzir sljedeće odredbe. Enzimi, koji su po svojoj prirodi proteini, male molekularne težine mogu proći kroz netaknute glomerule, određujući takozvani fiziološki enzim. Među ovim enzimima, α-amilaza (relativna molekulska težina 45.000) i uropepsin (relativna molekulska težina 38.000) se konstantno otkrivaju u urinu.

Uz niskomolekularne enzime u urinu zdravih osoba, u malim koncentracijama mogu se naći i drugi enzimi: LDH, aspartat i alanin aminotransferaze, alkalna fosfataza i CP, maltaza, aldolaza, lipaza, razne proteaze i peptidaze, sulfataza, katalaza, ribonukleaza, peroksidaza.

Visokomolekularni enzimi s relativnom molekularnom težinom većom od 70.000-100.000, prema Richterichu (1958) i Hessu (1962), mogu ući u urin samo ako je propusnost glomerularnog filtera narušena. Normalan sadržaj enzima u urinu ne dopušta da se isključi patološki proces u bubregu s okluzijom uretera. Kod epimurije, oslobađanje enzima je moguće ne samo iz samih bubrega, već i iz drugih parenhimskih organa, stanica sluznice mokraćnih puteva, prostate, kao i formiranih elemenata urina s hematurijom ili leukociturijom.

Većina enzima je nespecifična za bubrege, pa je teško odrediti odakle potiču enzimi koji se nalaze u urinu zdravih i bolesnih ljudi. Međutim, stepen enzimurije, čak i za nespecifične enzime kod oštećenja bubrega, veći je od normalnog ili od onog koji se opaža kod bolesti drugih organa. Vrijednije informacije mogu se pružiti opsežnim proučavanjem dinamike brojnih enzima, posebno onih specifičnih za organ, kao što je transaminaza.

U rješavanju pitanja bubrežnog porijekla enzima u urinu, proučavanje izoenzima pomaže u identifikaciji frakcija tipičnih za organ koji se proučava. Izoenzimi su enzimi koji su izogeni u djelovanju (katalizuju istu reakciju), ali heterogeni po hemijskoj strukturi i drugim svojstvima. Svako tkivo ima svoj izoenzimski spektar. Vrijedne metode odvajanja izoenzima su elektroforeza u skrobnim i poliakrilamidnim gelovima, kao i ionsko-izmjenjivačka hromatografija.

Bence Jones protein

Kod multiplog mijeloma i Waldenstromove makroglobulinemije, Bence-Jones protein se nalazi u urinu. Metoda za otkrivanje ovog proteina u urinu temelji se na reakciji termoprecipitacije. Ranije korištene metode koje procjenjuju otapanje ovog proteina na temperaturi od 100°C i ponovno taloženje nakon naknadnog hlađenja su nepouzdane, jer nemaju sva Bence-Jones proteinska tijela odgovarajuća svojstva.

Pouzdanija detekcija ovog paraproteina njegovim taloženjem na temperaturi od 40-60 °C. Međutim, čak i pod ovim uvjetima, padavine se možda neće pojaviti u previše kiselim (pH< 3,0—3,5) или слишком щелочной (рН >6,5) urin, sa niskim OPM i niskom koncentracijom Bence-Jones proteina. Najpovoljnije uslove za njegovo taloženje obezbeđuje metoda koju je predložio Patnem: 4 ml filtriranog urina pomeša se sa 1 ml 2 M acetatnog pufera pH 4,9 i zagreva se 15 minuta u vodenom kupatilu na temperaturi od 56 °C. U prisustvu Bence-Jones proteina, tokom prve 2 minute pojavljuje se izražen talog.

Pri koncentraciji Bence-Jones proteina manjoj od 3 g/l, test može biti negativan, ali u praksi je to izuzetno rijetko, jer je njegova koncentracija u urinu obično značajnija. Ne može se u potpunosti osloniti na uzorke kuhanja. Sa potpunom sigurnošću, može se otkriti u urinu imuno-elektroforetskom metodom upotrebom specifičnih seruma protiv teških i lakih lanaca imunoglobulina.