Dom › Horoskopi › Kvalitativno određivanje proteina u urinu. Preuzmite knjigu "Klinička laboratorijska istraživanja" (2.84Mb)

Kvalitativno određivanje proteina u urinu. Preuzmite knjigu "Klinička laboratorijska istraživanja" (2.84Mb)

Princip metode:

Relativna gustoća urina je normalno 1,015-1,025 g/cm 3 . Određivanje relativne gustoće urina provodi se pomoću posebnih malih hidrometara koji se nazivaju urometri. Urometri su dvije vrste: prvi je za urin niske i normalne relativne gustoće (s podjelama od 1.000 do 1.030 g / cm 3), drugi - za urin visoke relativne gustoće (s podjelama od 1.030 do 1.060 g / cm 3 ).

NAPREDAK

U malom cilindru takvog promjera da urometar slobodno pluta u njemu, ispitni urin se ulije uz stijenku i urometar pažljivo uroni u njega. Očitavanje se vrši uzimanjem crte na skali urometra, koja odgovara donjem meniskusu tekućine. Sva određivanja se rade na temperaturi od 20 0 C, budući da je skala urometra graduirana u skladu s tom temperaturom. Ako urin ima drugačiju temperaturu, tada za svakih 3 0 C iznad te temperature morate dodati, a za svakih 3 0 C ispod - oduzeti 0,001 od očitanja ljestvice urometra.

Otkrivanje patoloških komponenti urina

1. Kvalitativne reakcije za dokazivanje bjelančevina u mokraći - a) Gellerov test s koncentriranom dušičnom kiselinom

Princip metode:

Koncentrirana mineralna kiselina HNO 3 uzrokuje denaturaciju proteina i stvara kompleksne soli proteina s kiselinom. Na granici dva sloja tekućine stvara se talog u obliku malog bijelog prstena.

Napredak

U epruvetu se ulije 1 ml koncentrirane HNO 3, epruveta se nagne pod kutom od 45 0 i pipetom pažljivo naslaga 1 ml urina uz stijenku.

b) test s koncentriranom sulfosalicilnom kiselinom

Princip metode:

Koncentrirana organska sulfosalicilna kiselina uzrokuje denaturaciju proteina. Taloženje proteina u obliku taloga ili zamućenja povezano je s dehidracijom proteinskih čestica i stvaranjem kompleksnih soli proteina s kiselinama.

Napredak

U 1 ml urina ulijte 3 kapi 20% sulfosalicilne kiseline. U prisutnosti bjelančevina u mokraći nastaje bijeli talog.

2. Kvantitativno određivanje proteina u urinu pomoću

test trake "Albufan".

Princip metode:

Test se temelji na principu "pogreške proteina indikatora". Reaktivna zona sadrži pufer kisika i poseban indikator koji u prisutnosti proteina mijenja boju od žute preko zelene do plave.

Test je vrlo osjetljiv na albumin i reagira na njegovu prisutnost u mokraći u koncentraciji od 0,10-0,15 g/l. Proteini visoke molekularne težine kao što su imunoglobulini mjere se s manjom osjetljivošću od albumina. Niskomolekularni proteini poput beta-2 mikroglobulina, Bence-Jones proteina praktički se ne otkrivaju ovim testom.

Ocjena testa: pozitivnim se test smatra ako se promijeni boja reaktivne zone. Ovisno o koncentraciji albumina u urinu, reaktivna zona može poprimiti nijansu od zelene do plave. Ove se nijanse uspoređuju s ljestvicom boja čije zone odgovaraju koncentracijama proteina od 0,3, 1, 3, 10 g/l.

NAPREDAK

Ne dodirujući reaktivnu zonu rukama, spustite test traku na 1-2 sekunde u testni urin tako da se zona navlaži. Zatim uklonite višak urina s trake i nakon otprilike 1 minute usporedite boju indikacijske zone sa skalom boja na priboru i odredite količinu proteina, koja se izražava u g/l.

Ti nisi rob!
Zatvoreni edukacijski tečaj za djecu elite: "Pravo uređenje svijeta."
http://noslave.org

Iz Wikipedije, slobodne enciklopedije

Gellerov test, nazvan po austr patolog J.F. Heller, uobičajeno ime kvalitativna reakcija na bjelančevine u mokraći. Uzorak ima osjetljivost od 0,033 g/l i koristi se u klinička dijagnostika proteinurija. Princip detekcije proteina temelji se na njegovoj denaturaciji pod utjecajem denaturirajućeg faktora - koncentriranog dušična kiselina ili reagens Larionova.

Treba napomenuti da je određena količina proteina uvijek prisutna u urinu, ali, u pravilu, njegova koncentracija u urinu zdrave osobe je ispod praga osjetljivosti kvalitativne reakcije i ne otkriva se jednostavnim metodama. Za količine proteina iznad 0,033 g/l uzorak nije prikladan. Pri većim koncentracijama razrijedite urin ili koristite Esbach albuminometar.

Za određivanje količine ukupnih bjelančevina u mokraći koristi se metoda koja se temelji na Gellerovom testu - Brandberg-Roberts-Stolnikova metoda (W. Roberts, 1830.-1899., engleski terapeut). Tehnika uključuje razrjeđivanje urina do donje granice osjetljivosti uzorka (0,033 g/l) i vrijeme formiranja prstena od 2-3 minute.

Napredak analize

Reagensi: koncentrirana (dimeća) dušična kiselina ili Larionov reagens. Urin koji se testira mora biti bistar i kiseo.

Priprema Larionova reagensa

Pripremite zasićenu otopinu natrijevog klorida (20-30 g soli otopi se u 100 ml tople vode, ostavi stajati dok se ne ohladi). Supernatant se odbaci i filtrira. U 99 ml filtrata dodajte 1 ml koncentrirane dušične kiseline (možete zamijeniti 2 ml klorovodične kiseline).

Tehnika istraživanja

Približno ista količina urina pažljivo se naslanja uz stijenku u epruvetu s 1-2 ml reagensa. U prisutnosti proteina, nakon otprilike 2-3 minute, na granici između tekućina uočava se zamućenje - bijeli prsten denaturiranog proteina.

Lažno pozitivan rezultat može se pojaviti pri uporabi dušične kiseline, zbog visoke koncentracije nukleoalbumina ili soli urata. U prvom slučaju nestaje kada se cijev lagano protrese, au drugom slučaju prsten se nalazi mnogo više od sučelja između medija i nestaje kada se zagrije; kod ponavljanja testa s razrijeđenim urinom, prsten se ne formira. Ponekad se smećkasto pigmentirani prsten pojavljuje i zbog oksidacije urokroma dušičnom kiselinom.

Korištenje Larionskog reagensa, za razliku od dušične kiseline, ima niz prednosti: pigmentni prstenovi se ne formiraju na granici slojeva, a pozitivan rezultat daje jasnije proteinske prstenove.

vidi također

Napišite recenziju na članak "Gellerov test"

Linkovi

Književnost

Odlomak koji karakterizira Gellerov test

Bila sam divlje povrijeđena i tužna zbog njih, zbog sebe i zbog svih onih koji su se borili, još uvijek vjerujući da mogu nešto promijeniti... Ali jesu li?.. Kad bi svi koji su se borili samo umrli, je li ona rat?
Odjednom se ispred mene pojavila druga slika...
U istoj toj maloj kamenoj “ćeliji”, gdje je još uvijek na podu ležalo krvavo tijelo Magdalene, oko nje su klečali vitezovi njezina Hrama... Svi su bili neobično odjeveni u bijelo - snježnobijelu dugu odjeću. Stajali su oko Magdalene ponosno pognutih glava, a suze su im tekle niz stroga, skamenjena lica u potocima... Prvi je ustao Mag, čiji je Ivan nekoć bio prijatelj. Pažljivo je, kao da se boji da se ne ozlijedi, umočio prste u ranu, i krvavom rukom nacrtao nešto nalik na krvavi križ na prsima... Drugi je učinio isto. Tako su redom ustajali, i pobožno umačući ruke u svetu krv, iscrtavali crvene križeve na svojoj snježnobijeloj odjeći... Osjetio sam kako mi se diže kosa na glavi. Bilo je to kao nekakav jeziv ritual, koji još uvijek nisam mogao razumjeti...
“Zašto to rade, Sever?..”, upitala sam tiho, kao da se bojim da će me čuti.
“To je zakletva, Isidora. Zakletva vječne osvete... Zakleli su se Magdaleninom krvlju - za njih najsvetijom krvlju - da će osvetiti njezinu smrt. Od tada su vitezovi hrama nosili bijele plašteve s crvenim križevima. Samo gotovo nitko od autsajdera nikada nije znao njihovo pravo značenje ... I iz nekog razloga, svi su vrlo brzo "zaboravili" da su vitezovi Hrama prije smrti Magdalene odjeveni u jednostavne tamno smeđe kombinezone, ne "ukrašene" nikakvim križevima . Vitezovi Hrama, kao i katari, mrzili su križ u smislu u kojem ga kršćanska crkva “poštuje”. Smatrali su ga podlim i zlim oruđem ubojstva, oruđem smrti. A ono što su na prsima slikali krvlju Magdalene imalo je sasvim drugo značenje. Samo što je crkva potpuno “prekrojila” značenje Vitezova Hrama za svoje potrebe, kao i sve drugo vezano za Radomira i Magdalenu...
Na isti je način, nakon njezine smrti, javno proglasila pokojnu Magdalenu uličarkom...
- također je zanijekao Kristovu djecu i svoj brak s Magdalenom ...
- i uništio ih obojicu "u ime vjere Kristove", s kojom su se obojica žestoko borili cijeli život ...
- također uništili Katar, koristeći Kristovo ime... ime osobe čiju su Vjeru i Znanje poučavali...
- uništila je i templare (vitezove hrama), proglašavajući ih slugama đavla, klevećući i blateći njihova djela, te vulgarizirajući samog Učitelja, koji je bio izravni potomak Radomira i Magdalene...
Riješivši se svih koji su na bilo koji način mogli ukazati na niskost i podlost “presvetih” đavola Rima, kršćanska je crkva stvorila legendu koja je pouzdano potvrđena “neospornim dokazima”, koje iz nekog razloga nitko nikada nije provjerio, i nikome ipak nije palo na pamet razmišljati o tome što se događa.

Sastav radnog mjesta za određivanje proteina u urinu uključuje sljedeće elemente:

Kemijske epruvete, aglutinacija.
Set graduiranih pipeta.
Pipete s uskim izvučenim krajem.
Alkoholne svjetiljke ili plinski plamenik.
Crni papir.
Ledena octena kiselina.
sulfosalicilna kiselina.
Koncentrirana dušična kiselina.
Destilirana voda.

Metode određivanja proteina u mokraći

Sve metode koje se koriste za kvalitativno određivanje proteina u mokraći temelje se na koagulaciji proteina. Koagulacija proteina očituje se zamućenjem izraženim u različitim stupnjevima (od opalescencije do velike zamućenosti) ili ljuštenjem.

Kvalitativno određivanje proteina u mokraći može se provesti na jedan od sljedećih načina:

kipući s 10% otopinom octene kiseline;
reakcija s 20% otopinom sulfosalicilne kiseline;
reakcija s 50% otopinom dušične kiseline (Gellerov test);
reakcija s 1% otopinom dušične kiseline u zasićenoj otopini kuhinjske soli (modificirani Gellerov test po Larionovoj).

Prije kvalitativnog određivanja proteina u urinu provode se sljedeći pripremni radovi:
1. Mutna mokraća se filtrira kroz papirnati filter. Ako se ne može dobiti proziran filtrat, vrši se refiltracija kroz isti filter ili se mokraća pomiješa s malom količinom dijatomejske zemlje ili talka, nakon čega se filtrira.
2. Ako je mokraća alkalne reakcije, zakiseli se 10% otopinom octene kiseline do blago kisele reakcije uz kontrolu lakmusa ili univerzalnog indikator papira.
3. S niskim sadržajem soli (svijetložuta ili blijedožuta mokraća niske specifične težine) za svaku
u uzorak se doda nekoliko kapi zasićene otopine natrijevog klorida, budući da nedostatak soli uzrokuje koagulaciju proteina.
4. Stupanj zamućenja promatra se pomoću crne pozadine. Pozadina je crni karton ili crni papir koji se koristi u fotografiji. Obračunavanje reakcije na crnoj pozadini omogućuje vam prepoznavanje najmanjeg stupnja zamućenja.

Numerirane epruvete stavljaju se u poseban stalak. Oni proizvode jednu od sljedećih reakcija.

1. Ispitivanje vrenjem s 10% otopinom octene kiseline. Ovo ispitivanje zahtijeva 10% otopinu octene kiseline koja se priprema na sljedeći način: 10 ml ledene octene kiseline stavi se u cilindar i dolije destilirane vode do oznake od 100 ml.

Tehnika određivanja proteina. U kemijsku epruvetu stavi se 10-12 ml filtriranog urina blago kisele reakcije. Zatim se gornji dio epruvete s urinom lagano zagrije do vrenja i u njega se doda 8-10 kapi 10% otopine octene kiseline. Epruveta s urinom promatra se na crnoj pozadini u prolaznom svjetlu. U prisutnosti bjelančevina u mokraći pojavljuje se zamućenje različitog stupnja (od opalescencije do velike zamućenosti) ili ispadaju ljuskice. Kontrola je donji dio epruvete koji nije podvrgnut zagrijavanju. Ovaj test otkriva količinu proteina, počevši od 0,015% o (% o - promil).

2. Reakcija s 20% otopinom sulfosalicilne kiseline. 20% otopina sulfosalicilne kiseline priprema se na sljedeći način: 20 g sulfosalicilne kiseline otopi se u 70-80 ml destilirane vode, prenese u cilindar od 100 ml i dolije destilirane vode do oznake. Pripremljeni reagens se čuva u posudi od tamnog stakla.

Tehnika određivanja proteina. U dvije epruvete istog promjera stavi se 2-3 ml filtriranog urina slabo kisele reakcije, u jednu epruvetu dodaju se 3-4 kapi 20% otopine sulfosalicilne kiseline, druga epruveta služi kao kontrola. . Ako je protein prisutan u epruveti s reagensom, pojavit će se zamućenost ili ljuskice koaguliranog proteina. U kontrolnoj cijevi tekućina ostaje bistra. Sulfosalicilna kiselina, zajedno sa serumskim proteinima, taloži albumoze (peptide), koji su produkt razgradnje proteina. Kako bi se razjasnio uzrok mutne mokraće, epruveta s mokraćom se zagrijava. Povećava se zamućenje uzrokovano proteinima seruma, dok zamućenje zbog prisutnosti albumoze nestaje. Ovaj test ima istu osjetljivost kao i prethodni.

3. Reakcija s 50% otopinom dušične kiseline (Gellerov test). 50% otopina dušične kiseline priprema se na sljedeći način: 50 ml destilirane vode (razrjeđenje 1:1) doda se u 50 ml dušične kiseline specifične težine 1,2-1,4.

Tehnika određivanja proteina. U usku malu epruvetu (aglutinacijski iscjedak) ulijte 1 ml 50% dušične kiseline. 1 ml filtriranog ispitnog urina skuplja se u pipetu s uskim izvučenim krajem, nanosi se na reagens i epruveta se prebacuje u okomiti položaj. U prisutnosti proteina, bijeli prsten se pojavljuje na granici tekućina. Vrijeme pojavljivanja prstena, njegova svojstva ovise o količini proteina: ako je protein nizak, tada se prsten ne pojavljuje odmah, stoga se njegov izgled prati 2,5-3 minute. Minimalna količina proteina određena ovom metodom je 0,033°/oo. S nižim sadržajem proteina u urinu, prsten se ne formira. Uzimanje rezultata reakcije proizvedene na crnoj pozadini u prolaznom svjetlu.

4. Reakcija s 1% otopinom dušične kiseline u zasićenoj otopini kuhinjske soli je modificirani Gellerov test (prema Larionovoj). Za ispitivanje se koristi 1% otopina dušične kiseline pripremljena u zasićenoj otopini kuhinjske soli (Larionov reagens). 35 g kuhinjske soli otopi se u 100 ml destilirane vode, otopina se filtrira, 99 ml pripremljene zasićene otopine natrijevog klorida doda se u 1 ml koncentrirane dušične kiseline specifične težine 1,2-1,4.

Tehnika određivanja proteina isto kao u reakciji s 50% otopinom dušične kiseline (Gellerov test), ali se umjesto 1 ml 50% otopine dušične kiseline u epruvetu ulije 1 ml Larionova reagensa i 1 ml urina. slojevito na njemu. Pojava bijelog prstena na granici tekućina ukazuje na prisutnost proteina u ispitivanom urinu. Larionova test je jednako osjetljiv kao Hellerov test.

5. Kolorimetrijski (suhi) test za kvalitativno određivanje proteina. Kolorimetrijski (suhi) test za kvalitativno određivanje proteina u mokraći temelji se na utjecaju proteina na boju indikatora u puferskoj otopini.

Tehnika određivanja proteina. Komad indikatorskog papira namijenjenog određivanju proteina uroni se nakratko u mokraću. Uzorak se smatra pozitivnim ako papir postane plavo-zelen.

Kvantifikacija proteina u urinu

Kvantitativno određivanje bjelančevina u urinu temelji se na činjenici da kada se urin koji sadrži bjelančevine nanese na 50% otopinu dušične kiseline ili Larionova reagensa, na granici dviju tekućina nastaje bijeli prsten, a ako se pojavi bistri bijeli prsten za 3 minute, tada je sadržaj proteina 0,033% oko ili 33 mg u 1000 ml urina. Pojava prstena ranije od 3 minute ukazuje na veći sadržaj proteina u mokraći.
Pri kvantificiranju proteina u urinu slijede se sljedeća pravila:

Kvantitativno određivanje proteina provodi se samo u onim dijelovima urina u kojima je kvalitativno otkriven.
Određivanje se vrši pažljivo filtriranim urinom.
Točno slijedite tehniku nanošenja ispitnog urina na 50% otopinu dušične kiseline ili Larionova reagensa u omjeru reagensa i urina (1:1).
Vrijeme pojavljivanja prstena određuje se štopericom: u konačnom izračunu količine proteina uzima se u obzir vrijeme slojevitosti urina na dušičnoj kiselini, što je 15 sekundi.
Urin se razrjeđuje na temelju svojstava prstena. U tom slučaju, svako sljedeće razrjeđivanje urina priprema se iz prethodnog.
Prstenovi su prepoznati na crnoj pozadini.

Najčešće su dvije metode za kvantitativno određivanje bjelančevina u mokraći: Roberts-Stolnikov-Brandbergova metoda i metoda S. L. Erlicha i A. Ya. Althausena.

Roberts-Stolnik-Brandbergova metoda. Prema ovoj metodi, količina bjelančevina u urinu određuje se razrjeđivanjem do sljedećeg sloja urina na 50% otopini dušične kiseline ili reagensa Larionovog prstena koji se pojavi točno za 3 minute. Količina proteina izračunava se množenjem 0,033% sa stupnjem razrjeđenja urina. Dobiveni rezultat izražava količinu proteina u miligramima na 1000 ml urina, odnosno u ppm (% o).
Metoda S. L. Erlicha i A. Ya. Althausena. U stalak se stavi više aglutinacijskih epruveta u koje se prethodno ulije 1 ml 50%-tne otopine dušične kiseline ili Larionova reagensa. Ispitni urin uzima se posebnom čistom, suhom pipetom s uskim izvučenim krajem i nanosi se na reagens, nakon čega se uključuje štoperica. Vrijeme pojavljivanja prstena prati se postavljanjem epruvete na crnu podlogu. Kada se pojavi prsten, štoperica se isključuje.

Kod slojevitosti urina, ovisno o količini proteina, može se pojaviti kompaktan, širok ili končast prsten. Zbijeni, široki prsten pojavljuje se odmah nakon nanošenja urina na reagens. Nitasti prsten može se pojaviti odmah, prije isteka jedne minute ili u intervalu od jedne do 4 minute.

Kada se filiformni prsten pojavi unutar jedne do 4 minute, nije potrebno razrjeđivati urin!
Za izračun količine proteina u ovom slučaju dovoljno je koristiti tablični plan koji su predložili autori (tablica 1).

Primjer 1 Prilikom nanošenja urina na reagens nakon 2 minute formira se filiformni prsten. Da se prsten formirao nakon 3 minute, tada bi količina proteina bila 0,033%.

U ovom slučaju, prsten je formiran ranije. Odgovarajuća korekcija, prema tablici plana, za vrijeme od 2 minute je 1 + 1/8. To znači da će protein u ovom dijelu urina biti 1 + 1/8 puta više od 0,033 ° / oo, tj. 0,033% o X (1 + 1/8) \u003d 0,037 ° / oo.

Kada se filiformni prsten pojavi do 1 minute, tj. nakon 40-60 sekundi, napravi se jedno razrjeđenje urina 1,5 puta (2 dijela urina + 1 dio vode), a zatim se razrijeđeni urin ponovno nanosi na reagens. a izgled prstena se bilježi. Pri izračunavanju rezultata uzima se u obzir da je urin razrijeđen 1,5 puta.

Primjer 2 Nakon slojevitog urina razrijeđenog 1,5 puta, nakon 2 minute pojavio se filiformni prsten. Ako bi se prsten pojavio nakon 3 minute, tada bi protein bio 0,033%. Odgovarajuća dopuna prema tablici, za vrijeme od 2 minute je 1 + 1/8. Protein u urinu sadrži 0,033% oX1,5X (1 + 1/8) \u003d 0,056% o.

Ako se filiformni prsten pojavi odmah, urin se razrijedi 2 puta (1 dio urina + 1 dio vode). Razrijeđeni urin ponovno se nanosi na reagens i nakon 1 minute bilježi se pojava prstena.

Primjer 3 Prilikom nanošenja urina razrijeđenog 2 puta na reagens, nakon 1 minute i 15 sekundi pojavio se filiformni prsten. Tada će količina proteina u urinu koja se proučava, po analogiji s prethodnim izračunima, biti jednaka
0,033% oX2X (1 + 3/8) \u003d 0,091%.
Ako se pojavi široki prsten, urin se razrijedi 4 puta (1 dio urina + 3 dijela vode).
Uz naknadno nanošenje slojeva razrijeđenog urina, filiformni prsten može se formirati i prije i nakon jedne minute. U takvim slučajevima izračunavanje količine proteina provodi se analogno prethodnim primjerima, tj. 0,033% o množi se sa stupnjem razrjeđenja i odgovarajućom korekcijom.

Primjer 1 Prsten nakon razrjeđivanja urina 4 puta pojavio se odmah. Urin se razrijedi 2 puta. Nakon nanošenja urina razrijeđenog 8 puta (4X2), formiran je filiformni prsten nakon 1,5 minuta. U ovom slučaju, količina proteina je 0,033% oX8X1,25 \u003d 0,33% o, itd.
Kada se pojavi kompaktni prsten, urin se razrijedi 8 puta (1 dio urina + 7 dijelova vode). Nakon naknadnog nanošenja slojeva razrijeđenog urina na reagens, može se formirati ili kompaktan, ili širok, ili filiforman prsten.

Primjer 2 Kad se urin nanese na dušičnu kiselinu, odmah se formira kompaktni prsten. Urin se razrijedi 8 puta (1 dio urina + 7 dijelova vode) i ponovno se slojevito. To je ponovno rezultiralo kompaktnim prstenom. Zatim se urin razrijedi još 8 puta (za to se 1 dio razrijeđenog urina uzme u cilindar ili u epruvetu i doda mu se 7 dijelova vode). Nakon još jednog nanošenja razrijeđenog urina odmah se stvorio filiformni prsten. Urin se razrijedi 2 puta (1 dio urina + 1 dio vode). Nakon sljedećeg nanošenja razrijeđenog urina nakon 2 minute formiran je filiformni prsten. Izračun količine proteina u određenom dijelu urina provodi se na sljedeći način: 0,033,% oX8X8X2X (1 + 1/8) = 4,8% o.

Uz tablicu plana nalazi se i tablica s izračunatim brojevima proteina (tablica 2). Ako urin nije razrijeđen, tada se količina bjelančevina nalazi u stupcu "Cijeli nerazrijeđeni urin". Kod razrjeđivanja urina za cijeli broj puta (8,4,2) koristi se tablica 1. 1. Prilikom razrjeđivanja urina za 1,5 puta, koristite tablicu. 2.

Tehnika korištenja tablice za određivanje sadržaja proteina u mokraći

U odgovarajućim stupcima tablice naznačeno je vrijeme pojavljivanja prstena i stupanj razrjeđivanja urina.
Broj koji se nalazi na sjecištu vodoravne i okomite linije izvučene iz ova dva pokazatelja označava količinu proteina u ispitivanom urinu (% o).

Moguće je da se s pozitivnim kvalitativnim testom na proteine prsten ne formira kada se nanese na 50% otopinu dušične kiseline. To znači da je količina proteina u urinu manja od 0,033%. U takvim slučajevima, količina proteina u obrascu za analizu naziva se "tragovi".

Ako se protein kvantificira, sadržaj proteina u ppromilu se bilježi u obrascu analize urina, na primjer, "protein - 0,66% o".

Osim kvantitativnog određivanja proteina u zasebnom dijelu urina, izračunava se njegova dnevna količina u gramima. U tu svrhu prikuplja se dnevni urin, mjeri se njegova količina i određuje sadržaj bjelančevina u promilima. Zatim se napravi izračun. Na primjer, dnevna količina urina je 1800 ml, proteina - 7 ° / oo. To znači da protein u dnevnoj količini urina sadrži: 1,8x7 \u003d 12,6 g.

treba prvo filtrirati.

Uzorak sa sulfosalicilnom kiselinom. Najosjetljiviji i najčešći je test s 20% otopinom sulfosalicilne kiseline.

Napredak definicije. Označene su dvije kemijske epruvete: "O" - iskustvo i "K" - kontrola. U obje epruvete ulije se 4-5 ml bistre mokraće. U pokusnu epruvetu dodati 4-5 kapi 20% otopine sulfosalicilne kiseline, dobro promiješati. Obje epruvete se ispituju jedna do druge na crnoj pozadini. U prisutnosti proteina u epruveti, bilježi se zamućenje. Za usporedbu se koristi kontrolna cijev. Osjetljivost testa sa sulfosalicilnom kiselinom je 0,015 g/l.

Produkti cijepanja proteina - albumoza - također daju pozitivnu reakciju sa sulfosalicilnom kiselinom. Da bi se utvrdio uzrok zamućenja, uzorak se zagrijava. U tom slučaju nestaje zamagljenost uzrokovana prisutnošću albumina, a povećava se zamagljenost uzrokovana prisutnošću proteina.

Hellerov prstenasti test. Napredak definicije. U epruvetu za centrifugu ulijte 1 - 1,5 ml 50% dušične kiseline ili Larionova reagensa. Zatim nanesite sloj

kiseline istu količinu mokraće, da se tekućina ne miješa. U prisustvu proteina na granici tekućine pojavljuje se bijeli prsten. Reakcija se ocjenjuje na crnoj podlozi i uzima se u obzir vrijeme pojave filiformnog prstena.Osjetljivost uzorka je 0,033 g/l. S ovim sadržajem proteina, bijeli končasti prsten pojavljuje se na granici tekućina između 2. i 3. minute.

tehnika nanošenja slojeva. Urin je uvijek superponiran na kiselinu, budući da je relativna gustoća urina niža od gustoće kiselina. Raslojavanje se vrši Pasteur-ovom pipetom s balonom, koja skuplja malu količinu urina. Zatim se urin uvodi u uski dio epruvete centrifuge, držeći je pod kutom, slojevito kap po kap, polako spuštajući urin uz stijenke epruvete.

Nedostatak uzorka je pojava pigmentnog prstena od oksidacije urokroma dušičnom kiselinom. Ovaj smećkasti prsten može ometati određivanje. U urinu koji sadrži urate ponekad se pojavljuje bjelkasti prsten iznad granice tekućine.

Jasniji rezultat Hellerovog testa dobiva se ako se umjesto 50% otopine dušične kiseline koristi Larionov reagens (1% otopina dušične kiseline u zasićenoj otopini natrijeva klorida).

kvantitativno određivanje

Količina bjelančevina u mokraći može se odrediti na dva načina: 1) metodom Brandberg-Roberts-Stolnikova s razrjeđivanjem mokraće; 2) prema mutnoći nastaloj dodatkom 3% sulfosalicilne kiseline.

Brandberg-Roberts-Stolnikova metoda. Ova se metoda temelji na Hellerovom prstenastom testu. Poznato je da kada je sadržaj bjelančevina u mokraći 0,033 g/l, filamentozni prsten se formira u 2-3. nije široka nitasta. Takav urin treba razrijediti destiliranom vodom i ponovno naslagati dušičnom kiselinom s razrijeđenim urinom. Ako se nakon nanošenja slojeva između 2. i 3. minute pojavi končasti prsten, tada se razrjeđivanje treba smatrati dovršenim. Količina proteina u ovom slučaju određuje se množenjem 0,033 g/l ng stupnja razrjeđenja urina. Razrjeđivanje urina odabire se pomoću sljedeće približne procjene svojstava! prstenovi: ako se filiformni prsten odmah pojavi nakon nanošenja slojeva, urin se razrijedi 2 puta, ako se odmah pojavi široki prsten, 4 puta, ako se odmah pojavi kompaktni prsten, 8 ili 10 puta.

Razrjeđivanje urina vrši se u epruveti mjerne centrifuge, ulijevanjem urina do oznake od 1 ml i dodavanjem vode do oznake, koliko puta se vrši razrjeđivanje. Sadržaj epruvete temeljito se promiješa Pasteurovom pipetom s balonom.

Ponekad morate razrijediti urin nekoliko puta. U tom slučaju, pri izračunavanju količine proteina, uzimaju se u obzir sva razrjeđenja. Primjer. Prilikom slojevitosti cijelog urina odmah se pojavio kompaktni prsten. Urin se razrijedi 10 puta u epruveti mjerne centrifuge (1 ml urina i 9 ml vode do oznake 10). Sloj razrijeđen 10 puta urin na dušičnoj kiselini. Ako se odmah pojavi široki prsten, određivanje nije dovršeno, treba ga nastaviti. Od prvog razrjeđivanja od 10 puta, potrebno je napraviti još jedno razrjeđenje od 4 puta. Ukupna stopa razrjeđivanja u ovom će slučaju biti 40 (10x4). S urinom razrijeđenim 40 puta ponovno se postavlja Hellerov prstenasti test. Kada se filiformni prsten pojavi između 2. i 3. minute, određivanje treba smatrati dovršenim.

Tijekom rada možete koristiti Erlich-Althausen korekciju, ako se filiformni prsten pojavi prije 2. minute. Kako se urin ne bi dodatno razrijedio, autori su predložili da se odredi vrijeme pojavljivanja filiformnog prstena i da se ispravi izračun vremena. U ovom slučaju, količina proteina se izračunava množenjem 0,033 g/l sa stupnjem razrjeđenja i korekcijom. Vrijednosti izmjena su sažete u tablici. 3.

Tablica 3. Vrijednosti korekcije za određivanje proteina

Vrijeme formiranja" Korekcija prstena, min Vrijeme formiranja Korekcija prstena, min

Popularno u kategoriji: