Dom › Horoskopy › Jakościowe oznaczanie białka w moczu. Pobierz książkę „Badania w laboratorium klinicznym” (2,84Mb)

Jakościowe oznaczanie białka w moczu. Pobierz książkę „Badania w laboratorium klinicznym” (2,84Mb)

Zasada metody:

Gęstość względna moczu wynosi zwykle 1,015-1,025 g/cm 3 . Oznaczanie gęstości względnej moczu odbywa się za pomocą specjalnych małych areometrów zwanych urometrami. Urometry są dwojakiego rodzaju: pierwszy do moczu o niskiej i normalnej gęstości względnej (z podziałkami od 1000 do 1,030 g/cm3), drugi - do moczu o dużej gęstości względnej (z podziałkami od 1,030 do 1,060 g/cm3 ).

POSTĘP

W małym cylindrze o takiej średnicy, aby urometr swobodnie w nim pływał, badany mocz wylewa się po ścianie i ostrożnie zanurza w nim urometr. Odczytu dokonuje się na podstawie linii na skali urometru, która odpowiada dolnemu menisku cieczy. Wszystkie oznaczenia wykonywane są w temperaturze 20 0 C, ponieważ skala urometru jest wyskalowana zgodnie z tą temperaturą. Jeśli mocz ma inną temperaturę, to za każde 3 0 C powyżej tej temperatury należy dodać, a za każde 3 0 C poniżej - odejmij 0,001 od odczytu skali urometru.

Wykrywanie patologicznych składników moczu

1. Reakcje jakościowe do wykrywania białka w moczu - a) Test Gellera ze stężonym kwasem azotowym

Zasada metody:

Stężony kwas mineralny HNO 3 powoduje denaturację białka i tworzy z kwasem złożone sole białka. Na granicy dwóch warstw cieczy tworzy się osad w postaci małego białego pierścienia.

Postęp

Do probówki wlewa się 1 ml stężonego HNO 3, probówkę przechyla się pod kątem 45° i pipetą ostrożnie nakłada się 1 ml moczu wzdłuż ścianki.

b) test ze stężonym kwasem sulfosalicylowym

Zasada metody:

Skoncentrowany organiczny kwas sulfosalicylowy powoduje denaturację białek. Wytrącanie białka w postaci osadu lub zmętnienia wiąże się z odwodnieniem cząstek białka i tworzeniem złożonych soli białka z kwasami.

Postęp

Do 1 ml moczu wlać 3 krople 20% kwasu sulfosalicylowego. W obecności białka w moczu tworzy się biały osad.

2. Ilościowe oznaczanie białka w moczu za pomocą

test - paski "Albufan".

Zasada metody:

Test opiera się na zasadzie „błędu białka wskaźnikowego”. Strefa reaktywna zawiera bufor tlenowy oraz specjalny wskaźnik, który w obecności białek zmienia kolor z żółtego przez zielony na niebieski.

Test jest bardzo czuły na albuminę i reaguje na jej obecność w moczu w stężeniu 0,10-0,15 g/l. Białka o dużej masie cząsteczkowej, takie jak immunoglobuliny, są mierzone z mniejszą czułością niż albuminy. Białka o niskiej masie cząsteczkowej, takie jak mikroglobulina beta-2, białko Bence-Jonesa, praktycznie nie są wykrywane w tym teście.

Ocena testu: pozytywny wynik testu jest uważany za zmianę koloru strefy reaktywnej. W zależności od stężenia albuminy w moczu strefa reaktywna może przybrać odcień od zielonego do niebieskiego. Te odcienie są porównywane ze skalą kolorów, której strefy odpowiadają stężeniom białka 0,3, 1, 3, 10 g/l.

POSTĘP

Nie dotykając obszaru reaktywnego rękami, opuść pasek testowy na 1-2 sekundy do badanego moczu, aby obszar został zwilżony. Następnie usuń nadmiar moczu z paska i po około 1 minucie porównaj kolor strefy wskazania ze skalą kolorów na zestawie i określ ilość białka, która jest wyrażona wg/l.

Nie jesteś niewolnikiem!
Zamknięty kurs edukacyjny dla dzieci z elity: „Prawdziwy układ świata”.
http://noslave.org

Z Wikipedii, wolnej encyklopedii

Test Gellera, nazwany na cześć Austriaka patolog J.F. Heller, nazwa zwyczajowa reakcja jakościowa na białko w moczu. Próbka ma czułość 0,033 g/l i jest używana w diagnostyka kliniczna białkomocz. Zasada wykrywania białka opiera się na jego denaturacji pod wpływem czynnika denaturującego - skoncentrowanego kwas azotowy lub odczynnik Larionowa.

Należy zauważyć, że pewna ilość białka jest zawsze obecna w moczu, ale z reguły jego stężenie w moczu osoby zdrowej jest poniżej progu wrażliwości reakcji jakościowej i nie jest wykrywane prostymi metodami. W przypadku ilości białka powyżej 0,033 g/l próbka nie jest odpowiednia. Przy wyższych stężeniach rozcieńczyć mocz lub użyć albuminometru Esbacha.

Aby określić ilość całkowitego białka w moczu, stosuje się metodę opartą na teście Gellera - metodę Brandberga-Robertsa-Stolnikowa (W. Roberts, 1830-1899, angielski terapeuta). Technika polega na rozcieńczeniu moczu do dolnej granicy czułości próbki (0,033 g/l) i czasie tworzenia pierścienia 2-3 minuty.

Postęp analizy

Odczynniki: stężony (dymiący) kwas azotowy lub odczynnik Larionova. Badany mocz powinien być klarowny i kwaśny.

Przygotowanie odczynnika Larionova

Przygotuj nasycony roztwór chlorku sodu (20-30 g soli rozpuszcza się w 100 ml ciepłej wody, odstawia do ostygnięcia). Supernatant odrzuca się i filtruje. Do 99 ml filtratu dodać 1 ml stężonego kwasu azotowego (można zastąpić 2 ml kwasu solnego).

Technika badawcza

W przybliżeniu taką samą ilość moczu ostrożnie nakłada się wzdłuż ścianki do probówki z 1-2 ml odczynnika. W obecności białka, po około 2-3 minutach, na granicy między cieczami obserwuje się zmętnienie – biały pierścień zdenaturowanego białka.

Fałszywie dodatni wynik może wystąpić podczas stosowania kwasu azotowego, ze względu na wysokie stężenie nukleoalbumin lub soli moczanów. W pierwszym przypadku znika, gdy rura jest lekko wstrząśnięta, aw drugim przypadku pierścień znajduje się znacznie wyżej niż interfejs między mediami i znika po podgrzaniu; przy powtarzaniu testu z rozcieńczonym moczem pierścień nie tworzy się. Czasami w wyniku utleniania urochromu kwasem azotowym pojawia się również brązowawy pigmentowany pierścień.

Zastosowanie odczynnika Larionowego, w przeciwieństwie do kwasu azotowego, ma szereg zalet: pierścienie pigmentowe nie tworzą się na granicy warstw, a wynik dodatni daje wyraźniejsze pierścienie białkowe.

Zobacz też

Napisz recenzję artykułu „Test Gellera”

Spinki do mankietów

Literatura

Fragment charakteryzujący Test Gellera

Byłem szalenie zraniony i smutny dla nich, dla siebie i dla wszystkich tych, którzy walczyli, wciąż wierząc, że mogą coś zmienić… Ale czy mogli?.. Gdyby wszyscy, którzy walczyli, tylko zginęli, czy ona Jaki jest sens takiego wojna?
Nagle tuż przede mną pojawił się kolejny obraz...
W tej samej małej kamiennej „celce”, gdzie zakrwawione ciało Magdaleny wciąż leżało na podłodze, klęczeli wokół niej Rycerze jej Świątyni... Wszyscy byli niezwykle ubrani w białe - śnieżnobiałe długie szaty. Stali wokół Magdaleny z pochylonymi dumnymi głowami, a łzy spływały strumieniami po ich surowych, skamieniałych twarzach... Pierwszy wstał Mag, którego kiedyś przyjacielem był Jan. Ostrożnie, jakby bojąc się zrobić sobie krzywdę, zanurzył palce w ranie i zakrwawioną ręką narysował na piersi coś na kształt zakrwawionego krzyża... Drugi zrobił to samo. Więc oni po kolei wstali iz czcią zanurzając ręce w świętej krwi, na swoich śnieżnobiałych szatach narysowali czerwone krzyże... Poczułem, że włosy mi jeżą. To było jak jakiś upiorny rytuał, którego wciąż nie mogłem zrozumieć...
„Dlaczego oni to robią, Sever?” Zapytałem cicho, jakby obawiając się, że mnie usłyszą.
– To przysięga, Isidoro. Przysięga wiecznej zemsty... Przysięgli na krew Magdaleny - najświętszą dla nich krew - pomścić jej śmierć. Od tego czasu Rycerze Świątyni nosili białe płaszcze z czerwonymi krzyżami. Tylko prawie żaden z przybyszów nigdy nie znał ich prawdziwego znaczenia… I z jakiegoś powodu wszyscy bardzo szybko „zapomnieli”, że Rycerze Świątyni przed śmiercią Magdaleny ubrani w proste ciemnobrązowe kombinezony, nie „ozdobione” żadnymi krzyżami . Rycerze Świątyni, podobnie jak katarzy, nienawidzili krzyża w takim sensie, w jakim Kościół chrześcijański „czci” go. Uważali go za podłe i złe narzędzie mordu, narzędzie śmierci. A to, co malowali na piersiach krwią Magdaleny, miało zupełnie inne znaczenie. Tyle, że kościół całkowicie „przerysował” znaczenie Rycerzy Świątyni do swoich potrzeb, podobnie jak wszystko inne związane z Radomirem i Magdaleną….
W ten sam sposób po jej śmierci publicznie ogłosiła zmarłą Magdalenę jako kobietę ulicy ...
- odmówił również dzieciom Chrystusa i jego małżeństwu z Magdaleną ...
- zniszczył też ich obu "w imię wiary Chrystusowej", z którą obaj zaciekle walczyli przez całe życie...
- zniszczył także Katar, używając imienia Chrystusa... imienia osoby, której Wiary i Wiedzy nauczali...
- zniszczyła także Templariuszy (Rycerzy Świątyni), uznając ich za sługi diabła, oczerniając i obrzucając błotem ich czyny, a także wulgaryzując samego Mistrza, który był bezpośrednim potomkiem Radomira i Magdaleny...
Pozbywszy się wszystkich, którzy w jakiś sposób mogli wskazać podłość i podłość „najświętszych” diabłów Rzymu, kościół chrześcijański stworzył legendę, która została wiarygodnie potwierdzona przez „niepodważalne dowody”, których z jakiegoś powodu nikt nigdy nie zweryfikował, i nigdy nikomu nie przyszło do głowy, żeby pomyśleć o tym, co się dzieje.

Skład miejsca pracy do oznaczania białka w moczu obejmuje następujące elementy:

Probówki chemiczne, aglutynacja.
Zestaw pipet miarowych.
Pipety z wąskim, ciągnionym końcem.
Lampy alkoholowe lub palnik gazowy.
Czarny papier.
Lodowaty kwas octowy.
kwas sulfosalicylowy.
Stężony kwas azotowy.
Woda destylowana.

Metody oznaczania białka w moczu

Wszystkie metody stosowane do jakościowego oznaczania białka w moczu opierają się na koagulacji białek. Koagulacja białek objawia się zmętnieniem wyrażającym się w różnym stopniu (od opalescencji do wysokiego zmętnienia) lub łuszczeniem.

Jakościowe oznaczenie białka w moczu można przeprowadzić na jeden z następujących sposobów:

gotowanie z 10% roztworem kwasu octowego;
reakcja z 20% roztworem kwasu sulfosalicylowego;
reakcja z 50% roztworem kwasu azotowego (test Gellera);
reakcja z 1% roztworem kwasu azotowego w nasyconym roztworze soli kuchennej (zmodyfikowany test Gellera według Larionovej).

Przed jakościowym oznaczeniem białka w moczu wykonywane są następujące prace przygotowawcze:
1. Mętny mocz jest filtrowany przez filtr papierowy. Jeśli nie ma możliwości uzyskania przezroczystego filtratu, przeprowadza się ponowną filtrację przez ten sam filtr lub miesza się mocz z niewielką ilością ziemi okrzemkowej lub talku, po czym jest filtrowany.
2. Jeśli mocz ma odczyn zasadowy, zakwasza się go 10% roztworem kwasu octowego do odczynu lekko kwaśnego pod kontrolą papierka lakmusowego lub uniwersalnego.
3. O niskiej zawartości soli (jasnożółty lub jasnożółty mocz o niskim ciężarze właściwym) dla każdego
do próbki dodaje się kilka kropli nasyconego roztworu chlorku sodu, ponieważ brak soli powoduje koagulację białka.
4. Stopień zmętnienia obserwuje się na czarnym tle. Tło to czarny karton lub czarny papier używany w fotografii. Uwzględnienie reakcji na czarnym tle pozwala zidentyfikować najmniejszy stopień zmętnienia.

Ponumerowane probówki umieszcza się w osobnym stojaku. Wywołują jedną z następujących reakcji.

1. Test wrzenia z 10% roztworem kwasu octowego. Test ten wymaga 10% roztworu kwasu octowego, który przygotowuje się w następujący sposób: 10 ml lodowatego kwasu octowego umieszcza się w cylindrze i uzupełnia wodą destylowaną do kreski 100 ml.

Technika oznaczania białka. 10-12 ml przefiltrowanego moczu o lekko kwaśnym odczynie umieszcza się w probówce chemicznej. Następnie górną część probówki z moczem delikatnie podgrzewa się do wrzenia i dodaje do niej 8-10 kropli 10% roztworu kwasu octowego. Probówkę z moczem ogląda się na czarnym tle w świetle przechodzącym. W obecności białka w moczu pojawia się zmętnienie różnego stopnia (od opalescencji do dużego zmętnienia) lub odpadają płatki. Kontrolą jest dolna część probówki, nie poddana nagrzewaniu. Ten test wykrywa ilość białka, zaczynając od 0,015% o (% o - promil).

2. Reakcja z 20% roztworem kwasu sulfosalicylowego. 20% roztwór kwasu sulfosalicylowego przygotowuje się w następujący sposób: 20 g kwasu sulfosalicylowego rozpuszcza się w 70-80 ml wody destylowanej, przenosi do cylindra o pojemności 100 ml i uzupełnia wodą destylowaną do kreski. Przygotowany odczynnik jest przechowywany w pojemniku z ciemnego szkła.

Technika oznaczania białka. W dwóch probówkach o tej samej średnicy umieszcza się 2-3 ml przefiltrowanego moczu o słabo kwaśnym odczynie, do jednej z probówek dodaje się 3-4 krople 20% roztworu kwasu sulfosalicylowego, druga probówka służy jako kontrola . Jeśli białko jest obecne w probówce z odczynnikiem, pojawi się zmętnienie lub płatki skoagulowanego białka. W probówce kontrolnej ciecz pozostaje klarowna. Kwas sulfosalicylowy wraz z białkiem surowicy wytrąca albumozy (peptydy), które są produktem rozpadu białek. W celu wyjaśnienia przyczyny zmętnienia moczu podgrzewa się probówkę z moczem. Zmętnienie wywołane białkami surowicy jest zwiększone, a zmętnienie spowodowane obecnością albumozy znika. Ten test ma taką samą czułość jak poprzedni.

3. Reakcja z 50% roztworem kwasu azotowego (test Gellera). 50% roztwór kwasu azotowego przygotowuje się w następujący sposób: 50 ml wody destylowanej (rozcieńczenie 1:1) dodaje się do 50 ml kwasu azotowego o ciężarze właściwym 1,2-1,4.

Technika oznaczania białka. Do wąskiej małej probówki wlać 1 ml 50% kwasu azotowego (szlam aglutynacyjny). 1 ml przefiltrowanego moczu testowego pobiera się do pipety z wąskim, ciągniętym końcem, nakłada się na odczynnik i probówkę przenosi się do pozycji pionowej. W obecności białka na granicy cieczy pojawia się biały pierścień. Czas pojawienia się pierścienia, jego właściwości zależą od ilości białka: jeśli białko jest niskie, pierścień nie pojawia się natychmiast, dlatego jego wygląd jest monitorowany przez 2,5-3 minuty. Minimalna ilość białka określona tą metodą wynosi 0,033°/OO. Przy niższej zawartości białka w moczu pierścień nie tworzy się. Uwzględnienie wyników reakcji wytworzonych na czarnym tle w świetle przechodzącym.

4. Reakcja z 1% roztworem kwasu azotowego w nasyconym roztworze soli kuchennej jest zmodyfikowanym testem Gellera (według Larionovej). Do testu stosuje się 1% roztwór kwasu azotowego, przygotowany w nasyconym roztworze soli kuchennej (odczynnik Larionovej). 35 g soli kuchennej rozpuszcza się w 100 ml wody destylowanej, roztwór przesącza się, 99 ml przygotowanego nasyconego roztworu chlorku sodu dodaje się do 1 ml stężonego kwasu azotowego o ciężarze właściwym 1,2-1,4.

Technika oznaczania białka tak samo jak w reakcji z 50% roztworem kwasu azotowego (test Gellera), ale zamiast 1 ml 50% roztworu kwasu azotowego do probówki wlewa się 1 ml odczynnika Larionovej i 1 ml moczu ułożone na nim. Pojawienie się białego pierścienia na granicy cieczy wskazuje na obecność białka w badanym moczu. Test Larionova jest tak samo czuły jak test Hellera.

5. Test kolorymetryczny (suchy) do jakościowego oznaczania białka. Test kolorymetryczny (suchy) do jakościowego oznaczania białka w moczu opiera się na wpływie białka na barwę wskaźnika w roztworze buforowym.

Technika oznaczania białka. Kawałek papierka wskaźnikowego przeznaczony do oznaczania białka zanurza się na krótki czas w moczu. Próbka jest uznawana za pozytywną, jeśli papier zmieni kolor na niebieskozielony.

Oznaczanie ilościowe białka w moczu

Ilościowe oznaczanie białka w moczu polega na tym, że gdy mocz zawierający białko zostanie nałożony na 50% roztwór kwasu azotowego lub odczynnika Larionovej, na granicy dwóch płynów tworzy się biały pierścień, a jeśli pojawia się przezroczysty biały pierścień przez 3 minuty, wtedy zawartość białka wynosi 0,033% około 33 mg w 1000 ml moczu. Pojawienie się pierścienia wcześniej niż 3 minuty wskazuje na wyższą zawartość białka w moczu.
Podczas oznaczania ilościowego białka w moczu przestrzegane są następujące zasady:

Ilościowe oznaczenie białka przeprowadza się tylko w tych porcjach moczu, w których zostało wykryte jakościowo.
Oznaczenie dokonywane jest ze starannie przefiltrowanego moczu.
Dokładnie postępuj zgodnie z techniką nakładania warstw testowego moczu na 50% roztwór kwasu azotowego lub odczynnika Larionovej w stosunku odczynnika do moczu (1:1).
Czas pojawienia się pierścienia określa stoper: w ostatecznym obliczeniu ilości białka uwzględnia się czas nakładania moczu na kwas azotowy, który wynosi 15 sekund.
Mocz jest rozcieńczany na podstawie właściwości pierścienia. W takim przypadku każde kolejne rozcieńczenie moczu jest przygotowywane z poprzedniego.
Pierścienie są identyfikowane na czarnym tle.

Najczęściej spotykane są dwie metody ilościowego oznaczania białka w moczu: metoda Robertsa-Stolnikova-Brandberga oraz metoda S.L. Erlicha i A.Y. Althausena.

Metoda Robertsa-Stolnikowa-Brandberga. Zgodnie z tą metodą ilość białka w moczu określa się przez jego rozcieńczenie, aż kolejne nałożenie moczu na 50% roztworze kwasu azotowego lub odczynnika pierścienia Larionowa pojawi się dokładnie po 3 minutach. Ilość białka oblicza się, mnożąc 0,033% przez stopień rozcieńczenia moczu. Otrzymany wynik wyraża ilość białka w miligramach na 1000 ml moczu, czyli w ppm (% o).
Metoda S. L. Erlicha i A. Ya Althausena. W stojaku umieszcza się kilka probówek aglutynacyjnych, do których najpierw wlewa się 1 ml 50% roztworu kwasu azotowego lub odczynnika Larionovej. Badany mocz pobiera się osobną, czystą, suchą pipetą z wąskim wyciągniętym końcem i nakłada się na odczynnik, po czym włącza się stoper. Czas pojawienia się pierścienia monitoruje się umieszczając probówkę na czarnym tle. Gdy pojawi się pierścień, stoper jest wyłączony.

Podczas nakładania warstw moczu, w zależności od ilości białka, może pojawić się zwarty, szeroki lub nitkowaty pierścień. Zwarty, szeroki pierścień pojawia się natychmiast po nałożeniu moczu na odczynnik. Nitkowaty pierścień może pojawić się natychmiast, przed upływem jednej minuty lub w odstępie od jednej do 4 minut.

Gdy w ciągu jednej do 4 minut pojawi się nitkowaty pierścień, nie trzeba rozcieńczać moczu!
Do obliczenia ilości białka w tym przypadku wystarczy posłużyć się planem tabelarycznym zaproponowanym przez autorów (tab. 1).

Przykład 1 Podczas nakładania moczu na odczynnik po 2 minutach utworzył się nitkowaty pierścień. Gdyby pierścień utworzył się przez 3 minuty, ilość białka wynosiłaby 0,033%.

W tym przypadku pierścień powstał wcześniej. Odpowiednia korekta, zgodnie z tabelą planu, dla czasu 2 minut wynosi 1 + 1/8. Oznacza to, że białko w tej porcji moczu będzie 1 + 1/8 razy większe niż 0,033 °/oo, tj. 0,033% o X (1 + 1/8) \u003d 0,037 °/oo.

W przypadku pojawienia się pierścienia nitkowatego do 1 minuty, czyli po 40-60 sekundach, jedno rozcieńczenie moczu wykonuje się 1,5 raza (2 części moczu + 1 część wody), a następnie rozcieńczony mocz ponownie nakłada się na odczynnik i zapisuje się wygląd pierścienia. Przy obliczaniu wyników bierze się pod uwagę, że mocz został rozcieńczony 1,5 raza.

Przykład 2 Po nałożeniu warstwy moczu rozcieńczonego 1,5 raza, po 2 minutach pojawił się nitkowaty pierścień. Gdyby pierścień pojawił się po 3 minutach, białko wyniosłoby 0,033%. Odpowiednia poprawka według tabeli-planu na czas 2 minut wynosi 1 + 1/8. Białko w moczu zawiera 0,033% x 1,5X (1 + 1/8) \u003d 0,056% o.

Jeśli nitkowaty pierścień pojawi się natychmiast, mocz rozcieńcza się 2 razy (1 część moczu + 1 część wody). Rozcieńczony mocz ponownie nakłada się na odczynnik i po 1 minucie odnotowuje się pojawienie się pierścienia.

Przykład 3 Po nałożeniu warstwy moczu rozcieńczonego 2 razy na odczynnik, po 1 minucie 15 sekundzie pojawił się nitkowaty pierścień. Wtedy ilość białka w badanym moczu, analogicznie do poprzednich obliczeń, będzie równa
0,033% oX2X (1 + 3/8) \u003d 0,091%.
Jeśli pojawi się szeroki pierścień, mocz rozcieńcza się 4 razy (1 część moczu + 3 części wody).
Po nałożeniu warstwy rozcieńczonego moczu może powstać nitkowaty pierścień zarówno przed, jak i po minucie. W takich przypadkach obliczenie ilości białka przeprowadza się analogicznie do poprzednich przykładów, tj. 0,033% o mnoży się przez stopień rozcieńczenia i odpowiednią poprawkę.

Przykład 1 Pierścień po 4-krotnym rozcieńczeniu moczu pojawił się natychmiast. Mocz rozcieńcza się 2 razy. Po nałożeniu warstw moczu rozcieńczonego 8 razy (4x2), po 1,5 minuty utworzył się nitkowaty pierścień. W tym przypadku ilość białka wynosi 0,033% oX8X1,25 \u003d 0,33% o itd.
Kiedy pojawia się zwarty pierścień, mocz rozcieńcza się 8 razy (1 część moczu + 7 części wody). Po nałożeniu na odczynnik rozcieńczonego moczu może powstać zwarty, szeroki lub nitkowaty pierścień.

Przykład 2 Kiedy mocz został nałożony na kwas azotowy, natychmiast utworzył się zwarty pierścień. Mocz rozcieńcza się 8 razy (1 część moczu + 7 części wody) i ponownie nakłada się warstwami. To ponownie zaowocowało zwartym pierścieniem. Następnie mocz rozcieńcza się kolejne 8 razy (w tym celu 1 część rozcieńczonego moczu pobiera się do cylindra lub do probówki i dodaje do niego 7 części wody). Po nałożeniu kolejnej warstwy rozcieńczonego moczu natychmiast utworzył się nitkowaty pierścień. Mocz rozcieńcza się 2 razy (1 część moczu + 1 część wody). Po kolejnym nałożeniu rozcieńczonego moczu po 2 minutach utworzył się nitkowaty pierścień. Obliczenie ilości białka w danej porcji moczu przeprowadza się w następujący sposób: 0,033,% oX8X8X2X (1 + 1/8) = 4,8% o.

Oprócz tabeli planu znajduje się tabela z obliczonymi liczbami białek (Tabela 2). Jeśli mocz nie jest rozcieńczony, ilość białka znajduje się w kolumnie „Cały nierozcieńczony mocz”. Podczas rozcieńczania moczu całkowitą liczbę razy (8,4,2) stosuje się tabelę 1. 1. Podczas rozcieńczania moczu 1,5 razy użyj tabeli. 2.

Technika korzystania z tabeli do oznaczania zawartości białka w moczu

W odpowiednich kolumnach tabeli wskazano czas pojawienia się pierścienia i stopień rozcieńczenia moczu.
Liczba znajdująca się w miejscu przecięcia linii poziomych i pionowych wykreślonych z tych dwóch wskaźników wskazuje na ilość białka w badanym moczu (% o).

Możliwe, że przy pozytywnym teście jakościowym na białko pierścień nie tworzy się po ułożeniu warstwy na 50% roztworze kwasu azotowego. Oznacza to, że ilość białka w moczu jest mniejsza niż 0,033%. W takich przypadkach ilość białka w postaci analitycznej określa się jako „ślady”.

Jeśli białko jest oznaczane ilościowo, zawartość białka w ppromille odnotowuje się w formie analizy moczu, na przykład „białko - 0,66% o”.

Oprócz ilościowego oznaczania białka w oddzielnej porcji moczu oblicza się jego dzienną ilość w gramach. W tym celu pobierany jest dobowy mocz, mierzona jest jego ilość oraz określana jest zawartość białka w promlu. Następnie dokonuje się obliczenia. Na przykład dzienna ilość moczu to 1800 ml, białko - 7°/OO. Oznacza to, że białko w dziennej ilości moczu zawiera: 1,8X7 \u003d 12,6 g.

należy najpierw przefiltrować.

Próbka z kwasem sulfosalicylowym. Najbardziej czuły i powszechny jest test z 20% roztworem kwasu sulfosalicylowego.

Postęp definicji. Oznaczone są dwie probówki chemiczne: „O” – doświadczenie i „K” – kontrola. Do obu probówek wlewa się 4-5 ml czystego moczu. Dodaj 4-5 kropli 20% roztworu kwasu sulfosalicylowego do eksperymentalnej probówki, dobrze wymieszaj. Obie probówki badane są obok siebie na czarnym tle. W obecności białka w probówce odnotowuje się zmętnienie. Do porównania użyto probówki kontrolnej. Czułość testu z kwasem sulfosalicylowym wynosi 0,015 g/l.

Produkty rozszczepiania białek - albumoza - również reagują pozytywnie z kwasem sulfosalicylowym. Aby określić przyczynę zmętnienia, próbka jest podgrzewana. W tym przypadku zamglenie spowodowane obecnością albuminy znika, a zamglenie spowodowane obecnością białka wzrasta.

Test pierścienia Hellera. Postęp definicji. Wlać 1-1,5 ml 50% kwasu azotowego lub odczynnika Larionovej do probówki wirówki. Następnie nałóż warstwę

kwas taką samą ilość moczu, aby płyn się nie mieszał. W obecności białka na granicy cieczy pojawia się biały pierścień. Reakcję ocenia się na czarnym tle i bierze się pod uwagę czas pojawienia się nitkowatego pierścienia Czułość próbki wynosi 0,033 g/L. Przy takiej zawartości białka na granicy faz między 2 a 3 minutą pojawia się biały nitkowaty pierścień.

technika nakładania warstw. Mocz zawsze nakłada się na kwas, ponieważ względna gęstość moczu jest mniejsza niż kwasów. Nakładanie warstw odbywa się za pomocą pipety Pasteura z balonikiem, który zbiera niewielką ilość moczu. Następnie mocz wprowadza się do wąskiej części probówki wirówkowej, trzymając ją pod kątem, warstwami kropla po kropli, powoli obniżając mocz wzdłuż ścian probówki.

Wadą próbki jest pojawienie się pierścienia pigmentowego z utleniania urochromu kwasem azotowym, który może zakłócać oznaczenie. W moczu zawierającym moczan czasami pojawia się białawy pierścień powyżej granicy płynu.

Wyraźniejszy wynik testu Hellera uzyskuje się, gdy zamiast 50% roztworu kwasu azotowego stosuje się odczynnik Larionovej (1% roztwór kwasu azotowego w nasyconym roztworze chlorku sodu).

kwantyfikacja

Ilość białka w moczu można określić na dwa sposoby: 1) metodą Brandberga-Robertsa-Stolnikowa z rozcieńczaniem moczu; 2) według zmętnienia powstałego przez dodanie 3% kwasu sulfosalicylowego.

Metoda Brandberga-Robertsa-Stolnikowa. Metoda ta opiera się na teście pierścieniowym Hellera. Wiadomo, że gdy zawartość białka w moczu wynosi 0,033 g/l, w 2-3 minucie tworzy się nitkowaty pierścień.Jeśli białko w moczu zawiera więcej niż 0,033 g/l, pierścień pojawia się wcześniej, a nie szerokie nitkowate. Taki mocz należy rozcieńczyć wodą destylowaną i ponownie pokryć kwasem azotowym z rozcieńczonym moczem. Jeśli po nałożeniu warstw pojawi się nitkowaty pierścień między 2. a 3. minutą, rozcieńczenie należy uznać za całkowite. Ilość białka w tym przypadku określa się przez pomnożenie 0,033 g/l ng stopnia rozcieńczenia moczu. Rozcieńczenie moczu dobiera się na podstawie następującej przybliżonej oceny właściwości! pierścienie: jeśli nitkowaty pierścień pojawia się natychmiast po nałożeniu warstw, mocz rozcieńcza się 2 razy, jeśli natychmiast pojawia się szeroki pierścień, 4 razy, jeśli natychmiast pojawia się zwarty pierścień, 8 lub 10 razy.

Rozcieńczanie moczu wykonuje się w probówce pomiarowej wirówki, wlewając mocz do kreski 1 ml i dodając wodę do kreski, ile razy wykonuje się rozcieńczenie. Zawartość probówki dokładnie wymieszać pipetą Pasteura z balonikiem.

Czasami trzeba kilkakrotnie rozcieńczać mocz. W takim przypadku przy obliczaniu ilości białka brane są pod uwagę wszystkie rozcieńczenia. Przykład. Podczas nakładania warstw całego moczu natychmiast pojawił się zwarty pierścień. Mocz rozcieńcza się 10 razy w probówce pomiarowej do wirowania (1 ml moczu i 9 ml wody do oznaczenia 10). Warstwa rozcieńczona 10 razy moczem na kwasie azotowym. Jeśli od razu pojawi się szeroki pierścień, oznacza to, że oznaczanie nie jest zakończone, należy je kontynuować. Od pierwszego 10-krotnego rozcieńczenia konieczne jest kolejne 4-krotne rozcieńczenie. Całkowity stopień rozcieńczenia w tym przypadku wyniesie 40 (10x4). Po 40-krotnym rozcieńczeniu moczu ponownie przeprowadza się test pierścieniowy Hellera. Gdy między 2 a 3 minutą pojawi się nitkowaty pierścień, oznaczanie należy uznać za zakończone.

Podczas pracy możesz użyć korekty Erlicha-Althausena, jeśli pierścień nitkowaty pojawi się przed 2 minutą. Aby nie rozcieńczać dalej moczu, autorzy zaproponowali określenie czasu pojawienia się pierścienia nitkowatego i skorygowanie obliczenia czasu. W tym przypadku ilość białka oblicza się przez pomnożenie 0,033 g/l przez stopień rozcieńczenia i poprawkę. Wartości poprawek zestawiono w tabeli. 3.

Tabela 3. Wartości korygujące dla oznaczenia białka

Czas formowania” Korekta pierścienia, min Czas formowania Korekta pierścienia, min

Popularne w kategorii: