Domov › Horoskopy › Kvalitatívne stanovenie bielkovín v moči. Stiahnite si knihu "Clinical Laboratory Research" (2,84 Mb)

Kvalitatívne stanovenie bielkovín v moči. Stiahnite si knihu "Clinical Laboratory Research" (2,84 Mb)

Princíp metódy:

Relatívna hustota moču je normálne 1,015-1,025 g/cm3. Stanovenie relatívnej hustoty moču sa vykonáva pomocou špeciálnych malých hustomerov nazývaných urometre. Urometre sú dvoch typov: prvý je pre moč s nízkou a normálnou relatívnou hustotou (s dielikmi od 1 000 do 1 030 g / cm 3), druhý - pre moč s vysokou relatívnou hustotou (s dielikmi od 1 030 do 1 060 g / cm 3 ).

PROGRESS

V malom valci s takým priemerom, aby sa v ňom urometer voľne vznášal, sa po stene naleje testovaný moč a urometer sa do neho opatrne ponorí. Odčítanie sa vykoná odobratím čiary na stupnici urometra, ktorá zodpovedá spodnému menisku tekutiny. Všetky stanovenia sa uskutočňujú pri teplote 20 °C, pretože stupnica urometra je odstupňovaná v súlade s touto teplotou. Ak má moč inú teplotu, potom za každých 3 0 C nad túto teplotu musíte pridať a za každé 3 0 C nižšie - odčítajte 0,001 z hodnoty na stupnici urometra.

Detekcia patologických zložiek moču

1. Kvalitatívne reakcie na dôkaz bielkovín v moči - a) Gellerov test s koncentrovanou kyselinou dusičnou

Princíp metódy:

Koncentrovaná minerálna kyselina HNO 3 spôsobuje denaturáciu bielkovín a vytvára komplexné soli bielkovín s kyselinou. Na rozhraní dvoch vrstiev kvapalín sa vytvorí zrazenina vo forme malého bieleho prstenca.

Pokrok

Do skúmavky sa naleje 1 ml koncentrovanej HNO 3, skúmavka sa nakloní pod uhlom 45 0 a po stene sa pomocou pipety opatrne navrství 1 ml moču.

b) test s koncentrovanou kyselinou sulfosalicylovou

Princíp metódy:

Koncentrovaná organická kyselina sulfosalicylová spôsobuje denaturáciu bielkovín. Precipitácia proteínu vo forme zrazeniny alebo zákalu je spojená s dehydratáciou proteínových častíc a tvorbou komplexných solí proteínu s kyselinami.

Pokrok

Do 1 ml moču nalejte 3 kvapky 20% kyseliny sulfosalicylovej. V prítomnosti bielkovín v moči sa tvorí biela zrazenina.

2. Kvantitatívne stanovenie bielkovín v moči pomocou

testovacie prúžky "Albufan".

Princíp metódy:

Test je založený na princípe „chyby indikátora proteínu“. Reaktívna zóna obsahuje kyslíkový tlmivý roztok a špeciálny indikátor, ktorý za prítomnosti bielkovín mení farbu zo žltej cez zelenú na modrú.

Test je vysoko citlivý na albumín a reaguje na jeho prítomnosť v moči v koncentrácii 0,10-0,15 g/l. Proteíny s vysokou molekulovou hmotnosťou, ako sú imunoglobulíny, sa merajú s menšou citlivosťou ako albumíny. Proteíny s nízkou molekulovou hmotnosťou, ako je beta-2 mikroglobulín, Bence-Jonesov proteín, sa týmto testom prakticky nezistia.

Vyhodnotenie testu: za pozitívny test sa považuje, ak sa zmení farba reaktívnej zóny. V závislosti od koncentrácie albumínu v moči môže reaktívna zóna nadobudnúť odtieň od zelenej po modrú. Tieto odtiene sa porovnávajú s farebnou stupnicou, ktorej zóny zodpovedajú koncentráciám bielkovín 0,3, 1, 3, 10 g/l.

PROGRESS

Bez toho, aby ste sa rukami dotkli reaktívnej zóny, spustite testovací prúžok na 1-2 sekundy do testovaného moču, aby sa zóna namočila. Potom odstráňte prebytočný moč z prúžku a po cca 1 minúte porovnajte farbu indikačnej zóny s farebnou stupnicou na súprave a stanovte množstvo bielkovín, ktoré je vyjadrené v g/l.

Nie si otrok!
Uzavretý vzdelávací kurz pre deti elity: "Skutočné usporiadanie sveta."
http://noslave.org

Z Wikipédie, voľnej encyklopédie

Gellerov test, pomenovaná po rakúskom patológ J.F. Heller, bežné meno kvalitatívna reakcia na bielkoviny v moči. Vzorka má citlivosť 0,033 g/l a používa sa v klinická diagnostika proteinúria. Princíp detekcie proteínu je založený na jeho denaturácii pod vplyvom denaturačného faktora – koncentrovaného kyselina dusičná alebo činidlo Larionova.

Je potrebné poznamenať, že určité množstvo bielkovín je vždy prítomné v moči, ale spravidla je jeho koncentrácia v moči zdravého človeka pod prahom citlivosti kvalitatívnej reakcie a nie je detegovaná jednoduchými metódami. Pre množstvá bielkovín nad 0,033 g/l nie je vzorka vhodná. Pri vyšších koncentráciách zrieďte moč alebo použite Esbachov albuminometer.

Na stanovenie množstva celkových bielkovín v moči sa používa metóda založená na Gellerovom teste – metóda Brandberg-Roberts-Stolnikov (W. Roberts, 1830-1899, anglický terapeut). Technika zahŕňa riedenie moču na spodnú hranicu citlivosti vzorky (0,033 g/l) a dobu tvorby krúžku 2-3 minúty.

Priebeh analýzy

Činidlá: koncentrovaná (dymiaca) kyselina dusičná alebo Larionova činidlo. Testovaný moč by mal byť čistý a kyslý.

Príprava Larionovho činidla

Pripravte nasýtený roztok chloridu sodného (20-30 g soli sa rozpustí v 100 ml teplej vody, nechá sa stáť do vychladnutia). Supernatant sa vyhodí a prefiltruje. Do 99 ml filtrátu pridajte 1 ml koncentrovanej kyseliny dusičnej (môžete nahradiť 2 ml kyseliny chlorovodíkovej).

Technika výskumu

Približne rovnaké množstvo moču sa opatrne navrství pozdĺž steny do skúmavky s 1-2 ml činidla. V prítomnosti proteínu sa asi po 2-3 minútach pozoruje na rozhraní medzi kvapalinami zákal – biely prstenec denaturovaného proteínu.

Pri použití kyseliny dusičnej sa môže vyskytnúť falošne pozitívny výsledok v dôsledku vysokej koncentrácie nukleoalbumínu alebo urátových solí. V prvom prípade zmizne, keď sa trubica mierne zatrasie, a v druhom prípade je krúžok umiestnený oveľa vyššie ako rozhranie medzi médiami a pri zahriatí zmizne; pri opakovaní testu so zriedeným močom sa krúžok nevytvorí. Niekedy sa tiež objaví hnedastý pigmentovaný kruh z oxidácie urochrómu kyselinou dusičnou.

Použitie Larionového činidla má na rozdiel od kyseliny dusičnej množstvo výhod: pigmentové krúžky sa netvoria na hranici vrstvenia a pozitívny výsledok poskytuje jasnejšie proteínové krúžky.

pozri tiež

Napíšte recenziu na článok "Gellerov test"

Odkazy

Literatúra

Výňatok charakterizujúci Gellerov test

Bolo mi smutno za nimi, za seba a za všetkých, ktorí bojovali a stále verili, že môžu niečo zmeniť... Ale mohli?... Ak by každý, kto bojoval, iba zomrel, ona Aký zmysel má takéto vojna?
Zrazu sa predo mnou objavil ďalší obrázok...
V tej istej malej kamennej cele, kde na podlahe stále ležalo krvavé telo Magdalény, kľačali okolo nej rytieri jej chrámu... Všetci boli nezvyčajne oblečení v bielo - snehobielych dlhých šatách. Stáli okolo Magdalény so sklonenými hrdými hlavami a po ich prísnych, skamenených tvárach stekali v potokoch slzy... Prvý vstal Mág, ktorého priateľom bol kedysi Ján. Opatrne, akoby sa bál, že si ublíži, namočil prsty do rany a krvavou rukou si na hruď nakreslil niečo, čo pripomínalo krvavý kríž... Druhý urobil to isté. A tak postupne vstali a s úctou si namáčali ruky do svätej krvi a na snehobiele šaty si nakreslili červené krížiky... Cítil som, ako mi začínajú vstávať vlasy. Bolo to ako nejaký strašidelný rituál, ktorému som stále nerozumel...
"Prečo to robia, Sever?" spýtal som sa potichu, akoby som sa bál, že ma budú počuť.
"Je to prísaha, Isidora." Prísaha večnej pomsty... Prisahali na krv Magdalény - pre nich najsvätejšiu krv -, že pomstia jej smrť. Odvtedy rytieri chrámu nosili biele plášte s červenými krížmi. Len takmer nikto z cudzincov nikdy nepoznal ich skutočný význam ... A z nejakého dôvodu všetci veľmi rýchlo „zabudli“, že rytieri chrámu sa pred smrťou Magdalény obliekali do jednoduchých tmavohnedých overalov, ktoré „nezdobili“ žiadne kríže. . Chrámoví rytieri, podobne ako Katari, nenávideli kríž v tom zmysle, v akom ho „uctieva“ kresťanská cirkev. Považovali ho za podlý a zlý nástroj vraždy, nástroj smrti. A to, čo si namaľovali na hrudi krvou Magdalény, malo úplne iný význam. Ide len o to, že kostol úplne „prekreslil“ význam chrámových rytierov tak, aby vyhovoval jeho potrebám, ako všetko ostatné súvisiace s Radomirom a Magdalénou ....
Rovnakým spôsobom po smrti verejne vyhlásila zosnulú Magdalénu za ženu z ulice ...
- tiež poprel deti Krista a jeho manželstvo s Magdalénou ...
- tiež ich oboch zničil "v mene viery Kristovej", s ktorou obaja celý život urputne bojovali...
- tiež zničili Katar, používajúc meno Krista... meno človeka, ktorého Viere a poznaniu učili...
- zničila aj templárov (Chrámových rytierov), vyhlásila ich za prisluhovačov diabla, ohovárala a oháňala blatom ich činy a vulgarizovala samotného Majstra, ktorý bol priamym potomkom Radomíra a Magdalény ...
Keď sa kresťanská cirkev zbavila všetkých, ktorí mohli nejakým spôsobom poukázať na podlosť a podlosť „najsvätejších“ diablov Ríma, vytvorila legendu, ktorú spoľahlivo potvrdili „nesporné dôkazy“, ktoré nikto z nejakého dôvodu nikdy neoveril, a nikoho ani nenapadlo zamyslieť sa nad tým, čo sa deje.

Zloženie pracoviska na stanovenie bielkovín v moči zahŕňa tieto prvky:

Chemické skúmavky, aglutinácia.
Sada odmerných pipiet.
Pipety s úzkym ťahaným koncom.
Alkoholové lampy alebo plynový horák.
Čierny papier.
Ľadová kyselina octová.
kyselina sulfosalicylová.
Koncentrovaná kyselina dusičná.
Destilovaná voda.

Metódy stanovenia bielkovín v moči

Všetky metódy používané na kvalitatívne stanovenie bielkovín v moči sú založené na koagulácii bielkovín. Koagulácia bielkovín sa prejavuje zákalom vyjadreným v rôznej miere (od opalescencie po vysoký zákal) alebo odlupovaním.

Kvalitatívne stanovenie bielkovín v moči sa môže uskutočniť jedným z nasledujúcich spôsobov:

varenie s 10% roztokom kyseliny octovej;
reakcia s 20% roztokom kyseliny sulfosalicylovej;
reakcia s 50 % roztokom kyseliny dusičnej (Gellerov test);
reakcia s 1% roztokom kyseliny dusičnej v nasýtenom roztoku kuchynskej soli (modifikovaný Gellerov test podľa Larionovej).

Pred kvalitatívnym stanovením bielkovín v moči sa vykonajú tieto prípravné práce:
1. Zakalený moč sa filtruje cez papierový filter. Ak nie je možné získať priehľadný filtrát, vykoná sa opätovná filtrácia cez ten istý filter alebo sa moč zmieša s malým množstvom kremeliny alebo mastenca a potom sa prefiltruje.
2. Ak má moč zásaditú reakciu, okyslí sa 10% roztokom kyseliny octovej do mierne kyslej reakcie pod kontrolou lakmusového alebo univerzálneho indikátorového papierika.
3. S nízkym obsahom soli (svetložltý alebo svetložltý moč s nízkou špecifickou hmotnosťou) do každého
do vzorky sa pridá niekoľko kvapiek nasýteného roztoku chloridu sodného, pretože nedostatok solí spôsobuje koaguláciu proteínu.
4. Stupeň zákalu sa sleduje pomocou čierneho pozadia. Podkladom je čierny kartón alebo čierny papier používaný pri fotografovaní. Účtovanie reakcie na čiernom pozadí vám umožňuje identifikovať najmenší stupeň zákalu.

Očíslované skúmavky sú umiestnené v samostatnom stojane. Vyvolávajú jednu z nasledujúcich reakcií.

1. Test varu s 10% roztokom kyseliny octovej. Tento test vyžaduje 10 % roztok kyseliny octovej, ktorý sa pripraví takto: 10 ml ľadovej kyseliny octovej sa umiestni do valca a doplní sa destilovanou vodou po značku 100 ml.

Technika stanovenia bielkovín. 10-12 ml filtrovaného moču mierne kyslej reakcie sa umiestni do chemickej skúmavky. Potom sa horná časť skúmavky s močom mierne zahreje do varu a pridá sa do nej 8-10 kvapiek 10% roztoku kyseliny octovej. Skúmavka s močom sa pozerá na čiernom pozadí v prechádzajúcom svetle. V prítomnosti bielkovín v moči sa objavuje zákal rôzneho stupňa (od opalescencie až po veľký zákal) alebo vypadávajú vločky. Kontrolou je spodná časť skúmavky, ktorá nie je vystavená zahrievaniu. Tento test zisťuje množstvo bielkovín, počnúc od 0,015 % o (% o - promile).

2. Reakcia s 20% roztokom kyseliny sulfosalicylovej. 20 % roztok kyseliny sulfosalicylovej sa pripraví takto: 20 g kyseliny sulfosalicylovej sa rozpustí v 70 – 80 ml destilovanej vody, prenesie sa do 100 ml valca a doplní sa destilovanou vodou po značku. Pripravené činidlo sa uchováva v nádobe z tmavého skla.

Technika stanovenia bielkovín. Do dvoch skúmaviek rovnakého priemeru sa umiestnia 2-3 ml prefiltrovaného moču slabo kyslej reakcie, do jednej skúmavky sa pridajú 3-4 kvapky 20% roztoku kyseliny sulfosalicylovej, druhá skúmavka slúži ako kontrola. . Ak je v skúmavke s činidlom prítomný proteín, objaví sa zákal alebo vločky koagulovaného proteínu. V kontrolnej trubici zostáva kvapalina číra. Kyselina sulfosalicylová spolu so sérovým proteínom zráža albumózy (peptidy), ktoré sú produktom rozkladu bielkovín. Aby sa objasnila príčina zakaleného moču, skúmavka s močom sa zahrieva. Zákal spôsobený sérovými proteínmi sa zvyšuje, zatiaľ čo zákal v dôsledku prítomnosti albumózy zmizne. Tento test má rovnakú citlivosť ako predchádzajúci.

3. Reakcia s 50% roztokom kyseliny dusičnej (Gellerov test). 50 % roztok kyseliny dusičnej sa pripraví takto: 50 ml destilovanej vody (riedenie 1:1) sa pridá k 50 ml kyseliny dusičnej so špecifickou hmotnosťou 1,2-1,4.

Technika stanovenia bielkovín. Nalejte 1 ml 50% kyseliny dusičnej do úzkej malej skúmavky (aglutinačný sliz). 1 ml filtrovaného testovaného moču sa odoberie do pipety s úzkym natiahnutým koncom, navrství sa na činidlo a skúmavka sa prenesie do zvislej polohy. V prítomnosti bielkovín sa na rozhraní kvapalín objaví biely kruh. Čas objavenia sa krúžku, jeho vlastnosti závisia od množstva proteínu: ak je proteínu nízky, krúžok sa neobjaví okamžite, preto sa jeho vzhľad monitoruje 2,5 až 3 minúty. Minimálne množstvo proteínu stanovené touto metódou je 0,033°/oo. Pri nižšom obsahu bielkovín v moči sa krúžok netvorí. Zohľadňujú sa výsledky reakcie vytvorenej na čiernom pozadí v prechádzajúcom svetle.

4. Reakcia s 1% roztokom kyseliny dusičnej v nasýtenom roztoku kuchynskej soli je modifikovaný Gellerov test (podľa Larionovej). Na test sa používa 1% roztok kyseliny dusičnej, pripravený v nasýtenom roztoku kuchynskej soli (Larionovovo činidlo). 35 g kuchynskej soli sa rozpustí v 100 ml destilovanej vody, roztok sa prefiltruje, 99 ml pripraveného nasýteného roztoku chloridu sodného sa pridá do 1 ml koncentrovanej kyseliny dusičnej s mernou hmotnosťou 1,2-1,4.

Technika stanovenia bielkovín rovnako ako pri reakcii s 50% roztokom kyseliny dusičnej (Gellerov test), ale namiesto 1 ml 50% roztoku kyseliny dusičnej sa do skúmavky naleje 1 ml Larionovho činidla a 1 ml moču. navrstvené na to. Vzhľad bieleho krúžku na hranici tekutín naznačuje prítomnosť bielkovín v testovanom moči. Larionov test je rovnako citlivý ako Hellerov test.

5. Kolorimetrický (suchý) test na kvalitatívne stanovenie bielkovín. Kolorimetrický (suchý) test na kvalitatívne stanovenie bielkovín v moči je založený na vplyve bielkovín na farbu indikátora v tlmivom roztoku.

Technika stanovenia bielkovín. Kúsok indikátorového papierika určeného na stanovenie proteínu sa na krátky čas ponorí do moču. Vzorka sa považuje za pozitívnu, ak sa papier zmení na modrozelený.

Kvantifikácia bielkovín v moči

Kvantitatívne stanovenie bielkovín v moči je založené na skutočnosti, že keď sa moč obsahujúci bielkoviny navrství na 50% roztok kyseliny dusičnej alebo Larionovho činidla, vytvorí sa biely krúžok na hranici dvoch kvapalín, a ak sa objaví číry biely krúžok o 3 minúty, potom je obsah bielkovín približne 0,033 % alebo 33 mg v 1000 ml moču. Výskyt krúžku skôr ako po 3 minútach naznačuje vyšší obsah bielkovín v moči.
Pri kvantifikácii bielkovín v moči sa dodržiavajú nasledujúce pravidlá:

Kvantitatívne stanovenie bielkovín sa vykonáva iba v tých častiach moču, kde sa kvalitatívne zistilo.
Stanovenie sa vykonáva pomocou starostlivo filtrovaného moču.
Presne dodržujte techniku vrstvenia testovaného moču na 50% roztok kyseliny dusičnej alebo Larionovej činidlo v pomere činidla k moču (1:1).
Čas objavenia sa krúžku je určený stopkami: pri konečnom výpočte množstva bielkovín sa berie do úvahy čas vrstvenia moču na kyselinu dusičnú, čo je 15 sekúnd.
Moč sa riedi na základe vlastností krúžku. V tomto prípade sa každé nasledujúce riedenie moču pripravuje z predchádzajúceho.
Prstene sú označené na čiernom pozadí.

Najbežnejšie sú dve metódy na kvantitatívne stanovenie bielkovín v moči: metóda Roberts-Stolnikov-Brandberg a metóda S. L. Erlicha a A. Ya Althausena.

Roberts-Stolnikov-Brandberg metóda. Podľa tejto metódy sa množstvo proteínu v moči určuje jeho zriedením, kým sa presne o 3 minúty neobjaví ďalšie vrstvenie moču na 50% roztoku kyseliny dusičnej alebo Larionovho prstencového činidla. Množstvo bielkovín sa vypočíta vynásobením 0,033 % stupňom zriedenia moču. Získaný výsledok vyjadruje množstvo bielkovín v miligramoch na 1000 ml moču, teda v ppm (% o).
Metóda S. L. Erlicha a A. Ya Althausena. Do stojana sa umiestni niekoľko aglutinačných skúmaviek, do ktorých sa najskôr naleje 1 ml 50 % roztoku kyseliny dusičnej alebo Larionovho činidla. Testovaný moč sa odoberie samostatnou čistou, suchou pipetou s úzkym vytiahnutým koncom a navrství sa na činidlo, potom sa zapnú stopky. Čas objavenia sa krúžku sa sleduje umiestnením skúmavky na čierne pozadie. Keď sa objaví zvonenie, stopky sa vypnú.

Pri vrstvení moču sa v závislosti od množstva bielkovín môže objaviť kompaktný, široký alebo závitovitý krúžok. Ihneď po navrstvení moču na činidlo sa objaví kompaktný široký krúžok. Vláknitý krúžok sa môže objaviť ihneď, pred uplynutím jednej minúty alebo v intervale od 1 do 4 minút.

Keď sa v priebehu jednej až 4 minút objaví nitkovitý krúžok, nie je potrebné riediť moč!
Na výpočet množstva bielkovín v tomto prípade stačí použiť tabuľkový plán navrhnutý autormi (tabuľka 1).

Príklad 1 Pri vrstvení moču na činidlo sa po 2 minútach vytvoril nitkovitý krúžok. Ak by sa prstenec vytvoril do 3 minút, množstvo proteínu by bolo 0,033 %.

V tomto prípade sa krúžok vytvoril skôr. Zodpovedajúca korekcia podľa plánovacej tabuľky pre čas 2 minút je 1 + 1/8. To znamená, že proteín v tejto časti moču bude 1 + 1/8 krát viac ako 0,033 ° / oo, t.j. 0,033 % o X (1 + 1/8) \u003d 0,037 ° / oo.

Keď sa do 1 minúty, t.j. po 40-60 sekundách, objaví nitkovitý krúžok, urobí sa jedno zriedenie moču 1,5-krát (2 diely moču + 1 diel vody) a potom sa zriedený moč opäť navrství na činidlo. a zaznamená sa vzhľad prsteňa. Pri výpočte výsledkov sa berie do úvahy, že moč bol zriedený 1,5-krát.

Príklad 2 Po vrstvení moču zriedeného 1,5-krát sa o 2 minúty objavil nitkovitý krúžok. Ak by sa krúžok objavil o 3 minúty, proteín by bol 0,033%. Zodpovedajúci pozmeňujúci a doplňujúci návrh podľa tabuľkového plánu na čas 2 minút je 1 + 1/8. Proteín v moči obsahuje 0,033% oX1,5X (1 + 1/8) \u003d 0,056% o.

Ak sa nitkovitý krúžok objaví okamžite, moč sa zriedi 2-krát (1 diel moču + 1 diel vody). Zriedený moč sa opäť navrství na činidlo a po 1 minúte sa zaznamená vzhľad krúžku.

Príklad 3 Pri vrstvení moču zriedeného 2-krát na činidlo sa po 1 minúte a 15 sekundách objavil nitkovitý krúžok. Potom sa množstvo bielkovín v skúmanom moči, analogicky s predchádzajúcimi výpočtami, bude rovnať
0,033 % oX2X (1 + 3/8) \u003d 0,091 %.
Ak sa objaví široký krúžok, moč sa zriedi 4-krát (1 diel moču + 3 diely vody).
Pri následnom vrstvení zriedeného moču sa môže pred aj po jednej minúte vytvoriť nitkovitý krúžok. V takýchto prípadoch sa výpočet množstva proteínu uskutočňuje analogicky s predchádzajúcimi príkladmi, t.j. 0,033 % o sa vynásobí stupňom zriedenia a zodpovedajúcou korekciou.

Príklad 1 Krúžok po zriedení moču 4 krát sa objavil okamžite. Moč sa zriedi 2 krát. Po vrstvení moču zriedeného 8-krát (4X2) sa po 1,5 minúte vytvoril nitkovitý krúžok. V tomto prípade je množstvo proteínu 0,033% oX8X1,25 \u003d 0,33% o atď.
Keď sa objaví kompaktný krúžok, moč sa zriedi 8-krát (1 diel moču + 7 dielov vody). Pri následnom vrstvení zriedeného moču na činidlo sa môže vytvoriť buď kompaktný, široký alebo nitkovitý krúžok.

Príklad 2 Keď sa moč navrstvil na kyselinu dusičnú, okamžite sa vytvoril kompaktný krúžok. Moč sa riedi 8x (1 diel moču + 7 dielov vody) a opäť sa vrství. Výsledkom bol opäť kompaktný prsteň. Potom sa moč ešte 8x zriedi (na to sa 1 diel zriedeného moču odoberie do valca alebo do skúmavky a pridá sa 7 dielov vody). Po ďalšom vrstvení zriedeného moču sa okamžite vytvoril nitkovitý krúžok. Moč sa zriedi 2-krát (1 diel moču + 1 diel vody). Po ďalšom vrstvení zriedeného moču sa o 2 minúty vytvoril nitkovitý krúžok. Výpočet množstva bielkovín v danej časti moču sa uskutočňuje nasledovne: 0,033,% oX8X8X2X (1 + 1/8) = 4,8% o.

Okrem tabuľky plánov existuje tabuľka s vypočítanými číslami bielkovín (tabuľka 2). Ak nie je moč zriedený, potom množstvo bielkovín nájdete v stĺpci „Celý nezriedený moč“. Pri riedení moču celočíselným počtom opakovaní (8,4,2) sa používa tabuľka 1. 1. Pri riedení moču 1,5-krát použite tabuľku. 2.

Technika použitia tabuľky na stanovenie obsahu bielkovín v moči

V zodpovedajúcich stĺpcoch tabuľky je uvedený čas objavenia sa krúžku a stupeň zriedenia moču.
Číslo umiestnené v priesečníku vodorovných a zvislých čiar nakreslených z týchto dvoch indikátorov udáva množstvo bielkovín v testovanom moči (% o).

Je možné, že pri pozitívnom kvalitatívnom teste na bielkovinu sa krúžok nevytvorí pri vrstvení na 50% roztok kyseliny dusičnej. To znamená, že množstvo bielkovín v moči je menšie ako 0,033 %. V takýchto prípadoch sa množstvo proteínu v analytickom formulári označuje ako "stopy".

Ak je proteín kvantifikovaný, obsah proteínu v ppromile sa zaznamená vo forme analýzy moču, napríklad „proteín - 0,66 % o“.

Okrem kvantitatívneho stanovenia proteínu v oddelenej časti moču sa vypočíta jeho denné množstvo v gramoch. Na tento účel sa odoberá denný moč, meria sa jeho množstvo a zisťuje sa obsah bielkovín v promile. Potom sa vykoná výpočet. Napríklad denné množstvo moču je 1800 ml, proteín - 7 ° / oo. To znamená, že proteín v dennom množstve moču obsahuje: 1,8X7 \u003d 12,6 g.

treba najskôr prefiltrovať.

Vzorka s kyselinou sulfosalicylovou. Najcitlivejší a najbežnejší je test s 20% roztokom kyseliny sulfosalicylovej.

Pokrok v definícii. Dve chemické skúmavky sú označené: "O" - skúsenosť a "K" - kontrola. Do oboch skúmaviek sa naleje 4-5 ml číreho moču. Pridajte 4-5 kvapiek 20% roztoku kyseliny sulfosalicylovej do experimentálnej skúmavky, dobre premiešajte. Obe skúmavky sa skúmajú vedľa seba na čiernom pozadí. V prítomnosti proteínu v skúmavke je zaznamenaný zákal. Na porovnanie slúži kontrolná trubica. Citlivosť testu s kyselinou sulfosalicylovou je 0,015 g/l.

Produkty štiepenia bielkovín - albumóza - tiež dávajú pozitívnu reakciu s kyselinou sulfosalicylovou. Na určenie príčiny zákalu sa vzorka zahrieva. V tomto prípade zákal spôsobený prítomnosťou albumínu zmizne a zákal spôsobený prítomnosťou proteínu sa zvyšuje.

Hellerov prstencový test. Pokrok v definícii. Nalejte 1 - 1,5 ml 50% kyseliny dusičnej alebo Larionovho činidla do centrifugačnej skúmavky. Potom navrstvite

kyseliny rovnaké množstvo moču, aby sa tekutina nemiešala. V prítomnosti proteínu na hranici kvapaliny sa objaví biely krúžok. Reakcia sa hodnotí na čiernom pozadí a berie sa do úvahy čas objavenia sa nitkového prstenca.Citlivosť vzorky je 0,033 g/l. Pri tomto obsahu bielkovín sa medzi 2. a 3. minútou objaví na rozhraní tekutín biely niťovitý prstenec.

technika vrstvenia. Moč sa vždy prekrýva s kyselinou, pretože relatívna hustota moču je nižšia ako hustota kyselín. Vrstvenie sa robí Pasteurovou pipetou s balónikom, ktorá zachytáva malé množstvo moču. Potom sa moč zavedie do úzkej časti odstredivkovej skúmavky, pričom sa drží pod uhlom, vrství sa po kvapkách a moč sa pomaly znižuje pozdĺž stien skúmavky.

Nevýhodou vzorky je výskyt pigmentového krúžku z oxidácie urochrómu kyselinou dusičnou, ktorý môže rušiť stanovenie. V moči obsahujúcom uráty sa niekedy nad hranicou tekutiny objaví belavý krúžok.

Jasnejší výsledok Hellerovho testu sa získa, ak sa namiesto 50 % roztoku kyseliny dusičnej použije Larionovovo činidlo (1 % roztok kyseliny dusičnej v nasýtenom roztoku chloridu sodného).

kvantifikácia

Množstvo bielkovín v moči možno určiť dvoma spôsobmi: 1) Brandberg-Roberts-Stolnikov metódou s riedením moču; 2) podľa zákalu vytvoreného pridaním 3 % kyseliny sulfosalicylovej.

Brandberg-Roberts-Stolnikov metóda. Táto metóda je založená na Hellerovom prstencovom teste. Je známe, že keď je obsah bielkovín v moči 0,033 g/l, vláknitý krúžok sa vytvorí v 2. – 3. minúte.Ak bielkovina v moči obsahuje viac ako 0,033 g/l, potom sa krúžok objaví skôr a nie široko vláknité. Takýto moč by mal byť zriedený destilovanou vodou a opäť prevrstvený kyselinou dusičnou so zriedeným močom. Ak sa po vrstvení medzi 2. a 3. minútou objaví niťovitý krúžok, potom treba riedenie považovať za úplné. Množstvo bielkovín sa v tomto prípade určí vynásobením 0,033 g/l ng stupňa zriedenia moču. Riedenie moču sa vyberá pomocou nasledujúceho približného hodnotenia vlastností! krúžky: ak sa ihneď po vrstvení objaví nitkovitý krúžok, moč sa zriedi 2-krát, ak sa ihneď objaví široký krúžok, 4-krát, ak sa okamžite objaví kompaktný krúžok, 8 alebo 10-krát.

Riedenie moču sa robí v odmernej centrifugačnej skúmavke, zalievanie moču po značku 1 ml a doplnenie vody po značku, koľkokrát sa riedenie robí. Obsah skúmavky sa dôkladne premieša Pasteurovou pipetou s balónikom.

Niekedy musíte moč niekoľkokrát zriediť. V tomto prípade sa pri výpočte množstva bielkovín berú do úvahy všetky riedenia. Príklad. Pri vrstvení celého moču sa okamžite objavil kompaktný krúžok. Moč sa zriedi 10-krát v odmernej centrifugačnej skúmavke (1 ml moču a 9 ml vody po značku 10). Vrstva zriedená 10-krát močom na kyselinu dusičnú. Ak sa okamžite objaví široký krúžok, potom určenie nie je dokončené, malo by sa pokračovať. Z prvého riedenia 10-krát je potrebné urobiť ďalšie riedenie 4-krát. Celková miera riedenia bude v tomto prípade 40 (10x4). So 40-krát zriedeným močom sa opäť vykoná Hellerov kruhový test. Keď sa medzi 2. a 3. minútou objaví nitkovitý krúžok, stanovenie by sa malo považovať za dokončené.

Pri práci môžete použiť korekciu Erlich-Althausen, ak sa filiformný krúžok objaví pred 2. minútou. Aby nedošlo k ďalšiemu riedeniu moču, autori navrhli určiť čas objavenia sa nitkového prstenca a opraviť výpočet na čas. V tomto prípade sa množstvo bielkovín vypočíta vynásobením 0,033 g/l stupňom zriedenia a korekciou. Hodnoty zmien sú zhrnuté v tabuľke. 3.

Tabuľka 3. Korekčné hodnoty pre stanovenie bielkovín

Čas formovania" Korekcia krúžku, min Čas formovania Korekcia krúžku, min

Populárne v kategórii: