Kvalitativno određivanje proteina u urinu. Preuzmite knjigu "Klinička laboratorijska istraživanja" (2.84Mb)

Princip metode:

Relativna gustina urina je normalno 1,015-1,025 g/cm 3 . Određivanje relativne gustoće urina vrši se pomoću posebnih malih hidrometara koji se nazivaju urometri. Urometri su dvije vrste: prvi je za urin niske i normalne relativne gustine (sa podjelama od 1.000 do 1.030 g/cm 3), drugi - za urin visoke relativne gustine (sa podjelama od 1.030 do 1.060 g/cm 3 ).

PROCES RADA

U malom cilindru takvog promjera da urometar slobodno pluta u njemu, testni urin se izlije duž zida i urometar se pažljivo uroni u njega. Očitavanje se vrši uzimanjem linije na skali urometra, koja odgovara donjem meniskusu tečnosti. Sva određivanja se vrše na temperaturi od 20 0 C, pošto je skala urometra gradirana u skladu sa ovom temperaturom. Ako urin ima drugačiju temperaturu, tada za svakih 3 0 C iznad ove temperature morate dodati, a za svakih 3 0 C ispod - oduzeti 0,001 od očitanja skale urometra.

Detekcija patoloških komponenti urina

1. Kvalitativne reakcije za detekciju proteina u urinu - a) Gellerov test sa koncentrovanom azotnom kiselinom

Princip metode:

Koncentrirana mineralna kiselina HNO 3 uzrokuje denaturaciju proteina i stvara kompleksne soli proteina s kiselinom. Na granici dva sloja tekućine formira se talog u obliku malog bijelog prstena.

Radni proces

U epruvetu se ulije 1 ml koncentrovanog HNO 3, epruveta se nagne pod uglom od 45 0 i 1 ml urina pažljivo se pipetom nanese duž zida.

b) test sa koncentrovanom sulfosalicilnom kiselinom

Princip metode:

Koncentrirana organska sulfosalicilna kiselina uzrokuje denaturaciju proteina. Taloženje proteina u obliku precipitata ili zamućenja povezano je sa dehidracijom proteinskih čestica i stvaranjem kompleksnih soli proteina sa kiselinama.

Radni proces

U 1 ml urina nalijte 3 kapi 20% sulfosalicilne kiseline. U prisustvu proteina u urinu, stvara se bijeli talog.

2. Kvantitativno određivanje proteina u urinu upotrebom

test trake "Albufan".

Princip metode:

Test se zasniva na principu "greške indikatorskog proteina". Reaktivna zona sadrži pufer kisika i poseban indikator koji mijenja boju od žute preko zelene do plave u prisustvu proteina.

Test je veoma osetljiv na albumin i reaguje na njegovo prisustvo u urinu u koncentraciji od 0,10-0,15 g/l. Proteini visoke molekularne težine, kao što su imunoglobulini, mjere se s manjom osjetljivošću od albumina. Proteini niske molekularne težine kao što su beta-2 mikroglobulin, Bence-Jones protein praktički se ne otkrivaju ovim testom.

Procjena testa: pozitivan test se smatra ako se promijeni boja reaktivne zone. Ovisno o koncentraciji albumina u urinu, reaktivna zona može poprimiti nijansu od zelene do plave. Ove nijanse se upoređuju sa skalom boja, čije zone odgovaraju koncentracijama proteina od 0,3, 1, 3, 10 g/l.

PROCES RADA

Bez dodirivanja reaktivne zone rukama, spustite test traku na 1-2 sekunde u test urin tako da se zona navlaži. Zatim uklonite višak urina sa trake i nakon otprilike 1 minute uporedite boju indikacione zone sa skalom boja na kompletu i odredite količinu proteina koja je izražena u g/l.

Ti nisi rob!
Zatvoreni edukativni kurs za djecu elite: "Pravo uređenje svijeta."
http://noslave.org

Iz Wikipedije, slobodne enciklopedije

Gellerov test, nazvan po austrijskom patolog J.F. Heller, uobičajeno ime kvalitativna reakcija on proteina u urinu. Uzorak ima osjetljivost od 0,033 g/l i koristi se u klinička dijagnostika proteinurija. Princip detekcije proteina zasniva se na njegovoj denaturaciji pod uticajem faktora denaturacije - koncentrisanog azotne kiseline ili reagens Larionova.

Treba napomenuti da je određena količina proteina uvijek prisutna u urinu, ali, u pravilu, njegova koncentracija u urinu zdrave osobe je ispod praga osjetljivosti kvalitativne reakcije i ne otkriva se jednostavnim metodama. Za količine proteina iznad 0,033 g/l, uzorak nije prikladan. Kod viših koncentracija razrijedite urin ili koristite Esbach albuminometar.

Za određivanje količine ukupnog proteina u urinu koristi se metoda zasnovana na Geller testu - Brandberg-Roberts-Stolnikov metoda (W. Roberts, 1830-1899, engleski terapeut). Tehnika uključuje razrjeđivanje urina do donje granice osjetljivosti uzorka (0,033 g/l) i vrijeme formiranja prstena od 2-3 minute.

Napredak analize

Reagensi: koncentrirana (dimljiva) dušična kiselina ili Larionova reagens. Urin koji se testira treba da bude bistar i kisel.

Priprema Larionova reagensa

Pripremite zasićeni rastvor natrijum hlorida (20-30 g soli se rastvori u 100 ml tople vode, ostavi da odstoji dok se ne ohladi). Supernatant se odbacuje i filtrira. U 99 ml filtrata dodajte 1 ml koncentrovane azotne kiseline (možete zamijeniti 2 ml hlorovodonične kiseline).

Tehnika istraživanja

Otprilike ista količina urina pažljivo se nanosi duž zida u epruvetu sa 1-2 ml reagensa. U prisustvu proteina, nakon otprilike 2-3 minute, zamućenje se uočava na granici između tekućina - bijeli prsten denaturiranog proteina.

Lažno pozitivan rezultat može se javiti kada se koristi dušična kiselina, zbog visoke koncentracije nukleoalbumina ili soli urata. U prvom slučaju nestaje kada se cijev lagano protrese, au drugom slučaju, prsten se nalazi mnogo više od granice između medija i nestaje kada se zagrije; pri ponavljanju testa s razrijeđenim urinom, prsten se ne formira. Ponekad se pojavljuje i smeđe pigmentirani prsten od oksidacije urohroma dušičnom kiselinom.

Upotreba Larionic reagensa, za razliku od dušične kiseline, ima niz prednosti: pigmentni prstenovi se ne formiraju na granici slojeva, a pozitivan rezultat daje jasnije proteinske prstenove.

vidi takođe

Napišite recenziju na članak "Gellerov test"

Linkovi

Književnost

[[C:Wikipedia:Članci bez slika (zemlja: Lua greška: callParserFunction: funkcija "#property" nije pronađena. )]][[C:Wikipedia:Članci bez slika (zemlja: Lua greška: callParserFunction: funkcija "#property" nije pronađena. )]]Lua greška: callParserFunction: funkcija "#property" nije pronađena. Gellerov test Lua greška: callParserFunction: funkcija "#property" nije pronađena. Gellerov test Lua greška: callParserFunction: funkcija "#property" nije pronađena. Gellerov test Lua greška: callParserFunction: funkcija "#property" nije pronađena. Gellerov test Lua greška: callParserFunction: funkcija "#property" nije pronađena. Gellerov test Lua greška: callParserFunction: funkcija "#property" nije pronađena. Gellerov test

Izvod koji karakterizira Gellerov test

Bio sam divlje povrijeđen i tužan zbog njih, zbog sebe i svih onih koji su se borili, i dalje vjerujući da mogu nešto promijeniti... Ali zar bi mogli?.. Da su svi koji su se borili samo umrli, da li je ona Koja je svrha takvog rat?
Odjednom se ispred mene pojavila druga slika...
U istoj istoj maloj kamenoj „ćeliji“, u kojoj je na podu još ležalo krvavo telo Magdalene, klečali su vitezovi njenog Hrama... Svi su bili neobično obučeni u belo – snežno belu dugačku odeću. Stajali su oko Magdalene pognutih ponosnih glava, a suze su tekle niz njihova stroga, skamenjena lica u potocima... Prvi je ustao Mag, čiji je prijatelj Jovan nekada bio. Pažljivo je, kao da se plašio da se ne povredi, umočio prste u ranu, i krvavom rukom nacrtao nešto nalik krvavom krstu na grudima... I drugi je uradio isto. Tako su oni redom ustajali, i pobožno umačući ruke u svetu krv, crtali crvene krstove na svojoj snežnobeloj odeći... Osećao sam da mi se kosa dizala na glavi. Bilo je to kao neka vrsta jezivog rituala, koji još uvijek nisam mogao razumjeti...
“Zašto to rade, Severe?..” upitala sam tiho, kao da se bojim da će me čuti.
„To je zakletva, Isidora. Zakletva na večnu osvetu... Zakleli su se krvlju Magdalene - najsvetijom krvlju za njih - da osvete njenu smrt. Od tada su vitezovi hrama nosili bele ogrtače sa crvenim krstovima. Samo gotovo niko od autsajdera nikada nije znao njihovo pravo značenje ... I iz nekog razloga, svi su vrlo brzo "zaboravili" da su vitezovi hrama prije smrti Magdalene obučeni u jednostavne tamnosmeđe kombinezone, ne "ukrašene" ikakvim križevima . Vitezovi hrama, kao i Katari, mrzeli su krst u smislu u kojem ga hrišćanska crkva „poštuje“. Smatrali su ga podlim i zlim oruđem ubistva, oruđem smrti. A ono što su slikali na svojim grudima krvlju Magdalene imalo je sasvim drugo značenje. Samo što je crkva potpuno "precrtala" značenje Vitezova hrama kako bi odgovarala svojim potrebama, kao i sve ostalo vezano za Radomira i Magdalenu...
Na isti način, nakon smrti, pokojnu Magdalenu je javno objavila kao uličarku...
- takođe se odrekao Hristove dece i svog braka sa Magdalenom...
- takođe ih je obojicu uništio "u ime vere Hristove", sa kojom su se obojica žestoko borili celog života...
- takođe uništio Katar, koristeći Hristovo ime... ime osobe čijoj su veri i znanju predavali...
- uništila je i templare (vitezove hrama), proglašavajući ih đavoljim slugama, klevetajući i blateći njihova djela, i vulgarizirajući samog Gospodara, koji je bio direktni potomak Radomira i Magdalene...
Oslobodivši se svih koji su na neki način mogli da ukažu na podlost i podlost „najsvetijih“ rimskih đavola, hrišćanska crkva je stvorila legendu koja je pouzdano potvrđena „neospornim dokazima“, koje niko iz nekog razloga nikada nije proverio, i nikome nije palo na pamet da razmišlja o tome šta se dešava.

Sastav radnog mjesta za određivanje proteina u urinu uključuje sljedeće elemente:

1. Hemijske epruvete, aglutinacija.
2. Set gradiranih pipeta.
3. Pipete sa uskim izvučenim krajem.
4. Alkoholne lampe ili plinski gorionik.
5. Crni papir.
6. Ledena sirćetna kiselina.
7. sulfosalicilna kiselina.
8. Koncentrovana azotna kiselina.
9. Destilovana voda.

Metode za određivanje proteina u urinu

Sve metode koje se koriste za kvalitativno određivanje proteina u urinu zasnivaju se na koagulaciji proteina. Koagulacija proteina se manifestuje zamućenjem izraženim u različitom stepenu (od opalescencije do visoke zamućenosti) ili ljuštenjem.

Kvalitativno određivanje proteina u urinu može se provesti na jedan od sljedećih načina:

1. ključanje sa 10% rastvorom sirćetne kiseline;
2. reakcija s 20% otopinom sulfosalicilne kiseline;
3. reakcija sa 50% rastvorom azotne kiseline (Gellerov test);
4. reakcija sa 1% rastvorom azotne kiseline u zasićenom rastvoru kuhinjske soli (modifikovani Gelerov test prema Larionovoj).

Prije kvalitativnog određivanja proteina u urinu, provode se sljedeći pripremni radovi:
1. Zamućeni urin se filtrira kroz papirni filter. Ako nije moguće dobiti prozirni filtrat, vrši se ponovno filtriranje kroz isti filter ili se urin pomiješa sa malom količinom dijatomejske zemlje ili talka, nakon čega se filtrira.
2. Ako urin ima alkalnu reakciju, zakiseli se sa 10% rastvorom sirćetne kiseline do blago kisele reakcije pod kontrolom lakmusa ili univerzalnog indikatorskog papira.
3. Sa malim sadržajem soli (svijetložuti ili blijedožuti urin sa niskom specifičnom težinom) svakom
Uzorku se dodaje nekoliko kapi zasićene otopine natrijum hlorida, jer nedostatak soli uzrokuje koagulaciju proteina.
4. Stepen zamućenosti se posmatra korišćenjem crne pozadine. Pozadina je crni karton ili crni papir koji se koristi u fotografiji. Računanje reakcije na crnoj pozadini omogućava vam da prepoznate najmanji stepen zamućenosti.

Numerisane epruvete se stavljaju u poseban stalak. Oni proizvode jednu od sljedećih reakcija.

1. Test ključanja sa 10% rastvorom sirćetne kiseline. Za ovaj test je potreban 10% rastvor sirćetne kiseline, koji se priprema na sledeći način: 10 ml glacijalne sirćetne kiseline se stavi u cilindar i dopuni destilovanom vodom do oznake od 100 ml.

Tehnika određivanja proteina. U hemijsku epruvetu stavlja se 10-12 ml filtriranog urina slabo kisele reakcije. Zatim se gornji dio epruvete s urinom lagano zagrije do ključanja i u njega se doda 8-10 kapi 10% otopine octene kiseline. Epruveta s urinom gleda se na crnoj pozadini u propuštenom svjetlu. U prisustvu proteina u urinu pojavljuje se zamućenost različitog stepena (od opalescencije do velike zamućenosti) ili ispadaju ljuspice. Kontrola je donji dio epruvete, koji nije podvrgnut zagrijavanju. Ovaj test detektuje količinu proteina, počevši od 0,015% o (% o - promil).

2. Reakcija sa 20% rastvorom sulfosalicilne kiseline. 20% rastvor sulfosalicilne kiseline priprema se na sledeći način: 20 g sulfosalicilne kiseline se rastvori u 70-80 ml destilovane vode, prebaci u cilindar od 100 ml i dopuni destilovanom vodom do oznake. Pripremljeni reagens se čuva u posudi od tamnog stakla.

Tehnika određivanja proteina. U dvije epruvete istog prečnika stavi se 2-3 ml filtrirane mokraće slabo kisele reakcije, u jednu epruvetu se doda 3-4 kapi 20% rastvora sulfosalicilne kiseline, druga epruveta služi kao kontrola . Ako je protein prisutan u epruveti za reagens, pojavit će se zamućenost ili ljuspice koaguliranog proteina. U kontrolnoj cijevi tečnost ostaje bistra. Sulfosalicilna kiselina, zajedno sa serumskim proteinima, taloži albumoze (peptide), koje su produkt razgradnje proteina. Kako bi se razjasnio uzrok zamućenja urina, epruveta sa urinom se zagrijava. Zamućenost uzrokovana serumskim proteinima je pojačana, dok zamućenost zbog prisustva albumoze nestaje. Ovaj test ima istu osjetljivost kao i prethodni.

3. Reakcija sa 50% rastvorom azotne kiseline (Gellerov test). 50% rastvor azotne kiseline priprema se na sledeći način: 50 ml destilovane vode (razblaživanje 1:1) dodaje se u 50 ml azotne kiseline specifične težine 1,2-1,4.

Tehnika određivanja proteina. Sipajte 1 ml 50% azotne kiseline u usku malu epruvetu (aglutinacijski iscjedak). 1 ml filtriranog test mokraće sakupi se u pipetu sa uskim izvučenim krajem, nanese na reagens, a epruveta se prenese u vertikalni položaj. U prisustvu proteina, bijeli prsten se pojavljuje na granici tečnosti. Vrijeme pojave prstena, njegova svojstva ovise o količini proteina: ako je protein nizak, tada se prsten ne pojavljuje odmah, pa se njegov izgled prati 2,5-3 minute. Minimalna količina proteina određena ovom metodom je 0,033°/oo. Sa nižim sadržajem proteina u urinu, prsten se ne formira. Obračunavanje rezultata reakcije proizvedene na crnoj pozadini u propuštenoj svjetlosti.

4. Reakcija sa 1% rastvorom azotne kiseline u zasićenom rastvoru kuhinjske soli je modifikovani Gelerov test (prema Larionovoj). Za ispitivanje se koristi 1% rastvor azotne kiseline pripremljen u zasićenom rastvoru kuhinjske soli (Larionov reagens). 35 g kuhinjske soli rastvori se u 100 ml destilovane vode, rastvor se filtrira, 99 ml pripremljenog zasićenog rastvora natrijum hlorida se doda u 1 ml koncentrovane azotne kiseline specifične težine 1,2-1,4.

Tehnika određivanja proteina isto kao u reakciji sa 50% rastvorom azotne kiseline (Gellerov test), ali se umesto 1 ml 50% rastvora azotne kiseline u epruvetu sipa 1 ml Larionovinog reagensa i 1 ml urina slojevito na njemu. Pojava bijelog prstena na granici tekućina ukazuje na prisustvo proteina u testu urina. Larionova test je osjetljiv kao i Hellerov test.

5. Kolorimetrijski (suhi) test za kvalitativno određivanje proteina. Kolorimetrijski (suhi) test za kvalitativno određivanje proteina u urinu zasniva se na učinku koji protein ima na boju indikatora u puferskom rastvoru.

Tehnika određivanja proteina. Komad indikatorskog papira dizajniran za određivanje proteina uroni se u urin na kratko vrijeme. Uzorak se smatra pozitivnim ako papir postane plavo-zelen.

Kvantifikacija proteina u urinu

Kvantitativno određivanje proteina u urinu zasniva se na činjenici da kada se urin koji sadrži protein nanese na 50% rastvor azotne kiseline ili Larionovinog reagensa, na granici dve tečnosti se formira beli prsten, a ako se pojavi bistar beli prsten za 3 minuta, tada je sadržaj proteina 0,033% oko ili 33 mg u 1000 ml mokraće. Pojava prstena prije 3 minute ukazuje na veći sadržaj proteina u urinu.
Prilikom kvantifikacije proteina u urinu, poštuju se sljedeća pravila:

1. Kvantitativno određivanje proteina provodi se samo u onim dijelovima urina gdje je kvalitativno otkriven.
2. Određivanje se vrši pažljivo filtriranim urinom.
3. Precizno slijediti tehniku ​​nanošenja test mokraće na 50% otopinu dušične kiseline ili Larionovinog reagensa u omjeru reagensa prema urinu (1:1).
4. Vrijeme pojavljivanja prstena određuje se štopericom: u konačnom proračunu količine proteina uzima se u obzir vrijeme nanošenja slojeva urina na dušičnu kiselinu, što je 15 sekundi.
5. Urin se razrjeđuje na osnovu svojstava prstena. U ovom slučaju, svako sljedeće razrjeđivanje urina priprema se iz prethodnog.
6. Prstenovi su identificirani na crnoj pozadini.

Najčešće su dvije metode za kvantitativno određivanje proteina u urinu: metoda Roberts-Stolnikov-Brandberg i metoda S. L. Erlicha i A. Ya. Althausena.

1. Roberts-Stolnikov-Brandbergova metoda. Prema ovoj metodi, količina proteina u urinu se određuje razrjeđivanjem dok se sljedeći sloj urina na 50% otopini dušične kiseline ili reagensa Larionovog prstena ne pojavi tačno za 3 minute. Količina proteina se izračunava množenjem 0,033% sa stepenom razblaženja urina. Dobijeni rezultat izražava količinu proteina u miligramima na 1000 ml urina, odnosno u ppm (% o).
2. Metoda S. L. Erlicha i A. Ya. Althausena. Nekoliko epruveta za aglutinaciju stavlja se u stalak u koji se prvo sipa 1 ml 50% rastvora azotne kiseline ili Larionovinog reagensa. Ispitni urin se uzima posebnom čistom, suhom pipetom sa uskim izvučenim krajem i nanosi na reagens, nakon čega se uključuje štoperica. Vrijeme pojavljivanja prstena prati se postavljanjem epruvete na crnu podlogu. Kada se pojavi zvono, štoperica se isključuje.

Prilikom nanošenja slojeva urina, ovisno o količini proteina, može se pojaviti kompaktan, širok ili niti sličan prsten. Kompaktan, širok prsten pojavljuje se odmah nakon nanošenja slojeva urina na reagens. Prsten u obliku niti može se pojaviti odmah, prije isteka jedne minute ili u intervalu od jedne do 4 minute.

Kada se filiformni prsten pojavi u roku od jedne do 4 minute, nije potrebno razrjeđivati ​​urin!
Za izračunavanje količine proteina u ovom slučaju dovoljno je koristiti tabelarni plan koji su predložili autori (Tablica 1).

Primjer 1 Kada se urin nanese na reagens, formirao se filiformni prsten nakon 2 minute. Da je prsten formiran za 3 minute, tada bi količina proteina bila 0,033%.

U ovom slučaju, prsten je formiran ranije. Odgovarajuća korekcija, prema tabeli planova, za vrijeme od 2 minute je 1 + 1/8. To znači da će protein u ovom dijelu urina biti 1 + 1/8 puta veći od 0,033 ° / oo, tj. 0,033% o X (1 + 1/8) = 0,037 ° / oo.

Kada se filiformni prsten pojavi do 1 minute, odnosno nakon 40-60 sekundi, napravi se jedno razrjeđivanje urina za 1,5 puta (2 dijela urina + 1 dio vode), a zatim se razrijeđeni urin ponovo nanese na reagens. i bilježi se izgled prstena. Prilikom izračunavanja rezultata uzima se u obzir da je urin razrijeđen 1,5 puta.

Primjer 2 Nakon nanošenja slojeva urina razrijeđenog 1,5 puta, za 2 minute pojavio se filiformni prsten. Ako bi se prsten pojavio za 3 minute, tada bi protein bio 0,033%. Odgovarajuća izmjena prema tabeli-planu, za vrijeme od 2 minute je 1 + 1/8. Protein u urinu sadrži 0,033% oX1,5X (1 + 1/8) = 0,056% o.

Ako se filiformni prsten odmah pojavi, urin se razrijedi 2 puta (1 dio urina + 1 dio vode). Razrijeđeni urin se ponovo nanosi na reagens i nakon 1 minute primjećuje se izgled prstena.

Primjer 3 Prilikom nanošenja slojeva urina razrijeđenog 2 puta na reagens, nakon 1 minute i 15 sekundi pojavio se filiformni prsten. Tada će količina proteina u proučavanom urinu, po analogiji s prethodnim proračunima, biti jednaka
0,033% oX2X (1 + 3/8) \u003d 0,091%.
Ako se pojavi širok prsten, urin se razrijedi 4 puta (1 dio urina + 3 dijela vode).
Uz naknadno nanošenje slojeva razrijeđenog urina, filiformni prsten može se formirati i prije i nakon jedne minute. U takvim slučajevima izračunavanje količine proteina se vrši analogno prethodnim primjerima, tj. 0,033% o se pomnoži sa stepenom razblaženja i odgovarajućom korekcijom.

Primjer 1 Prsten nakon razrjeđivanja urina 4 puta pojavio se odmah. Urin se razblaži 2 puta. Nakon nanošenja slojeva urina razrijeđenog 8 puta (4X2), formirao se filiformni prsten nakon 1,5 minuta. U ovom slučaju, količina proteina je 0,033% oX8X1,25 = 0,33% o, itd.
Kada se pojavi kompaktni prsten, urin se razrijedi 8 puta (1 dio urina + 7 dijelova vode). Nakon naknadnog nanošenja razrijeđenog urina na reagens, može se formirati kompaktan, širok ili filiformni prsten.

Primjer 2 Kada se urin nanese na azotnu kiselinu, odmah se formira kompaktni prsten. Urin se razrijedi 8 puta (1 dio urina + 7 dijelova vode) i ponovo se slojevito. Ovo je opet rezultiralo kompaktnim prstenom. Zatim se urin razrijedi još 8 puta (za to se 1 dio razrijeđenog urina uzme u cilindar ili u epruvetu i doda mu 7 dijelova vode). Nakon još jednog sloja razrijeđenog urina, odmah se formirao filiformni prsten. Urin se razrijedi 2 puta (1 dio urina + 1 dio vode). Nakon sljedećeg nanošenja razrijeđenog urina, formirao se filiformni prsten za 2 minute. Proračun količine proteina u datoj porciji urina vrši se na sljedeći način: 0,033,% oX8X8X2X (1 + 1/8) = 4,8% o.

Pored tabele plana, postoji i tabela sa izračunatim brojem proteina (tabela 2). Ako urin nije razrijeđen, tada se količina proteina nalazi u koloni "Cijeli nerazrijeđeni urin". Pri razrjeđivanju urina cijeli broj puta (8,4,2) koristi se tabela 1. 1. Kada razrijedite urin za 1,5 puta, koristite tabelu. 2.

Tehnika korištenja tablice za određivanje sadržaja proteina u urinu

U odgovarajućim kolonama tabele navedeno je vrijeme pojavljivanja prstena i stepen razblaženja urina.
Broj koji se nalazi na tački preseka horizontalnih i vertikalnih linija povučenih iz ova dva indikatora ukazuje na količinu proteina u test urinu (% o).

Moguće je da se uz pozitivan kvalitativni test na proteine ​​prsten ne formira kada se nanese na 50% otopinu dušične kiseline. To znači da je količina proteina u urinu manja od 0,033%. U takvim slučajevima, količina proteina u formi za analizu naziva se "tragovima".

Ako je protein kvantificiran, sadržaj proteina u ppromilu se bilježi u obliku analize urina, na primjer, “protein - 0,66% o”.

Uz kvantitativno određivanje proteina u zasebnom dijelu urina, izračunava se njegova dnevna količina u gramima. U tu svrhu prikuplja se dnevni urin, mjeri se njegova količina i utvrđuje sadržaj proteina u promilu. Zatim se vrši proračun. Na primjer, dnevna količina urina je 1800 ml, proteina - 7 ° / oo. To znači da protein u dnevnoj količini urina sadrži: 1,8X7 \u003d 12,6 g.

prvo treba filtrirati.

Uzorak sa sulfosalicilnom kiselinom. Najosjetljiviji i najčešći je test sa 20% otopinom sulfosalicilne kiseline.

Napredak definicije. Dvije hemijske epruvete su označene: "O" - iskustvo i "K" - kontrola. U obje epruvete ulije se 4-5 ml čistog urina. Dodajte 4-5 kapi 20% rastvora sulfosalicilne kiseline u eksperimentalnu epruvetu, dobro promešajte. Obje epruvete se ispituju jedna pored druge na crnoj pozadini. U prisustvu proteina u epruveti, primećuje se zamućenost. Kontrolna cijev se koristi za poređenje. Osetljivost testa sa sulfosalicilnom kiselinom je 0,015 g/l.

Proizvodi cijepanja proteina - albumoza - također daju pozitivnu reakciju sa sulfosalicilnom kiselinom. Da bi se utvrdio uzrok zamućenja, uzorak se zagrijava. U tom slučaju nestaje izmaglica uzrokovana prisustvom albumina, a maglica uzrokovana prisustvom proteina se povećava.

Heller test prstena. Napredak definicije. Sipajte 1 - 1,5 ml 50% azotne kiseline ili Larionovinog reagensa u epruvetu za centrifugu. Zatim sloj

kiseli istu količinu urina, kako se tečnost ne bi mešala. U prisustvu proteina na granici tečnosti, pojavljuje se bijeli prsten. Reakcija se ocjenjuje na crnoj pozadini i uzima se u obzir vrijeme pojave filiformnog prstena.Osjetljivost uzorka je 0,033 g/L. Sa ovim sadržajem proteina, između 2. i 3. minute na granici tekućina pojavljuje se bijeli prsten u obliku niti.

tehnika nanošenja slojeva. Urin se uvijek nalazi iznad kiseline, jer je relativna gustina urina niža od gustine kiselina. Naslojavanje se vrši Pasteur-ovom pipetom sa balonom, koja sakuplja malu količinu urina. Zatim se urin unosi u uski dio epruvete za centrifugiranje, držeći ga pod uglom, slojevito kap po kap, polako spuštajući urin duž stijenki cijevi.

Nedostatak uzorka je pojava pigmentnog prstena od oksidacije urohroma azotnom kiselinom.Taj smećkasti prsten može ometati određivanje. U urinu koji sadrži urat, ponekad se pojavljuje bjelkasti prsten iznad granice tekućine.

Jasniji rezultat Hellerovog testa dobija se ako se umjesto 50% otopine dušične kiseline koristi Larionov reagens (1% otopina dušične kiseline u zasićenoj otopini natrijum hlorida).

kvantitacija

Količina proteina u urinu može se odrediti na dva načina: 1) Brandberg-Roberts-Stolnikov metodom uz razblaživanje urina; 2) prema zamućenosti nastaloj dodatkom 3% sulfosalicilne kiseline.

Brandberg-Roberts-Stolnikov metoda. Ova metoda se zasniva na Heller testu prstena. Poznato je da kada je sadržaj proteina u urinu 0,033 g/l, u 2-3. minuti nastaje filamentozni prsten.Ako protein u urinu sadrži više od 0,033 g/l, tada se prsten pojavljuje ranije, a nije široka vlaknasta. Takav urin treba razrijediti destilovanom vodom i ponovo nanijeti azotnom kiselinom s razrijeđenim urinom. Ako se nakon nanošenja slojeva pojavi prsten u obliku niti između 2. i 3. minute, tada se razrjeđivanje treba smatrati završenim. Količina proteina u ovom slučaju se određuje množenjem 0,033 g/l ng stepena razblaženja urina. Razrjeđivanje urina odabire se prema sljedećoj približnoj procjeni svojstava! prstenovi: ako se odmah nakon nanošenja slojeva pojavi filiformni prsten, urin se razrijedi 2 puta, ako se odmah pojavi široki prsten, 4 puta, ako se odmah pojavi kompaktni prsten, 8 ili 10 puta.

Razrjeđivanje urina vrši se u mjernoj centrifugalnoj epruveti, sipanjem mokraće do oznake od 1 ml i dodavanjem vode do oznake, koliko puta je razrjeđenje obavljeno. Sadržaj epruvete se dobro promeša Pasteurom pipetom sa balonom.

Ponekad morate nekoliko puta razrijediti urin. U ovom slučaju, prilikom izračunavanja količine proteina, uzimaju se u obzir sva razrjeđenja. Primjer. Prilikom nanošenja cijelog urina, odmah se pojavio kompaktan prsten. Urin se razrijedi 10 puta u mjernoj centrifugalnoj epruveti (1 ml urina i 9 ml vode do oznake 10). Sloj razrijeđen 10 puta urinom na dušičnu kiselinu. Ako se odmah pojavi široki prsten, tada određivanje nije završeno, treba ga nastaviti. Od prvog razrjeđivanja od 10 puta potrebno je napraviti još jedno razrjeđivanje od 4 puta. Ukupna stopa razblaženja u ovom slučaju će biti 40 (10x4). Sa 40 puta razblaženim urinom ponovo se postavlja Heller ring test. Kada se između 2. i 3. minute pojavi filiformni prsten, određivanje treba smatrati završenim.

Prilikom rada možete koristiti Erlich-Althausen korekciju, ako se filiformni prsten pojavi prije 2. minute. Kako se urin dodatno ne bi razrjeđivao, autori su predložili da se odredi vrijeme pojavljivanja filiformnog prstena i da se ispravi proračun za vrijeme. U ovom slučaju, količina proteina se izračunava množenjem 0,033 g/l sa stepenom razblaženja i korekcijom. Vrijednosti amandmana su sažete u tabeli. 3.

Tabela 3. Vrijednosti korekcije za određivanje proteina

Vrijeme formiranja" Korekcija prstena, min Vrijeme formiranja Korekcija prstena, min