Kvalitativno določanje beljakovin v urinu. Beljakovine v urinu, laboratorijske preiskave

Metoda Brandberg-Roberts-Stolnikova se nanaša na polkvantitativne metode za določanje skupnih beljakovin v urinu. Metoda temelji na Hellerjevem obročnem testu, ki je sestavljen iz dejstva, da na meji dušikove kisline in urina v prisotnosti beljakovin koagulira in pojavi se bel obroč.

Reagenti

50% raztopina dušikove kisline oz reagent Larionova.
Priprava reagenta Larionova: pripravimo nasičeno raztopino natrijevega klorida (20 - 30 g soli raztopimo v 100 ml vode, ko se segrejemo, pustimo stati, dokler se ne ohladi). Supernatant se odcedi, filtrira. K 99 ml filtrata dodamo 1 ml koncentrirane dušikove kisline. Namesto dušikove kisline lahko dodamo 2 ml koncentrirane klorovodikove kisline.

Napredek definicije

V epruveto vlijemo 1 - 2 ml dušikove kisline (ali Larionovega reagenta), pustimo, da kislina odteče s sten epruvete (5 - 8 minut), sicer se pri nanosu beljakovinskega urina tvori motnost. zaradi mešanja dušikove kisline na stenah epruvete z urinom, kar prepreči nastanek izrazitega obroča . Zato je treba vnaprej pripraviti vrsto epruvet s kislino. S pipeto previdno nanesemo enako količino filtriranega prozornega urina vzdolž stene epruvete, pri tem pa se trudimo, da se tekočina v epruveti ne stresa. Pojav tankega belega obroča na meji med tekočinama med 2. in 3. minuto kaže na prisotnost beljakovin v koncentraciji približno 0,033 g/l. Čas nanosa plasti se šteje kot četrt minute.

Če se obroček pojavi prej kot 2 minuti po nanosu, je treba urin razredčiti z vodo in ponovno nanesti že razredčen urin. Stopnja redčenja urina je izbrana glede na vrsto obroča, to je njegovo širino, kompaktnost in čas pojava. S filiformnim obročem, ki se pojavi pred 2 minutama, se urin razredči 2-krat, s širokim - 4-krat, s kompaktnim - 8-krat itd. Oznaka za 1 ml in dodajanje vode do oznake, kolikokrat se opravi vzreja. Vsebino epruvete temeljito premešamo s Pasteurjevo pipeto z balonom. Če se med redčenjem urina pojavi motnost, je treba mešanico ponovno filtrirati in na dušikovo kislino nanesti le prozoren filtrat. Koncentracija beljakovin se nato izračuna tako, da se 0,033 pomnoži z razmerjem redčenja in izrazi v gramih na liter (g/l). Takšna razredčitev urina je izbrana tako, da se ob nanosu na dušikovo kislino obroč pojavi v 2. - 3. minuti.

V primeru, da se med 1. in 4. minuto pri nerazredčenem ali razredčenem urinu oblikuje obroč, lahko uporabimo Ehrlich-Althausenov popravek, da urina ne redčimo dodatno (to prihrani čas). Avtorji so predlagali določitev časa pojava nitastega obroča in popravek izračuna za čas. V tem primeru se količina beljakovin izračuna tako, da se 0,033 g/l pomnoži s stopnjo razredčitve in s popravkom.

Ko se obroček oblikuje pred iztekom 1 minute, je treba narediti eno delno razredčitev, in sicer 1,5-krat (dva dela urina in 1 del vode). To redčenje se upošteva tudi pri izračunu količine beljakovin v urinu.

Primer določanja skupnih beljakovin v urinu po metodi Brandberg-Roberts-Stolnikova.

Pri nanosu urina na reagent takoj nastane širok obroč. Urin razredčimo 4-krat (1 del urina + 3 dele vode), plasti; takoj dobimo filiformen obroč. Obstoječo razredčitev je treba razredčiti še 2-krat; pri plastenju te raztopine se po 1,5 minutah oblikuje obroč. Ne moreš se več razmnoževati.

Izračun beljakovin: urin je bil razredčen 4-krat in 2-krat, torej 8-krat. Količina beljakovin je 0,033*8*1 1/4 = 0,33 g/l

Slabosti Brandberg-Roberts-Stolnikove metode:

• subjektivnost,
• delavnost,
• zmanjšanje natančnosti določanja koncentracije beljakovin, ko se urin razredči.

Poglej tudi:

Literatura:

• Priročnik "Laboratorijske raziskovalne metode v kliniki", ed. prof. V. V. Menšikov. - Moskva, "Medicina", 1987
• L. V. Kozlovskaya, A. Yu. Nikolaev. Učbenik o kliničnih laboratorijskih raziskovalnih metodah. Moskva, Medicina, 1985
• A. Ya. Althausen, "Klinična laboratorijska diagnostika" - Moskva, Medgiz, 1959
• A. Ya. Lyubina, L. P. Ilyicheva in soavtorji, "Klinične laboratorijske raziskave", Moskva, "Medicina", 1984

Proteinurija (proteinurija) - pojav beljakovin v urinu v koncentracijah, ki omogočajo identifikacijo s kvalitativnimi metodami.

Razlikovati

• Ledvična proteinurija in
• Ekstrarenalna (postrenalna) proteinurija

Ledvična proteinurija

Ledvična proteinurija je posledica poškodbe glomerulnega filtra ali disfunkcije epitelija zvitih tubulov.

Razlikovati med selektivno in neselektivno proteinurijo odvisno od razmerja določenih beljakovin v plazmi in urinu, njihove molekulske mase in naboja.

Selektivna proteinurija

Selektivna proteinurija se pojavi z minimalno (pogosto reverzibilno) kršitvijo glomerularnega filtra, ki ga predstavljajo beljakovine z nizko molekulsko maso (molekulska masa ne presega 68.000) - albumin, ceruloplazmin, transferin.

Neselektivna proteinurija

Neselektivna proteinurija je pogostejša pri hujši poškodbi filtra, ko se začnejo izgubljati velike molekularne beljakovine. Selektivnost proteinurije je pomembna diagnostična in prognostična značilnost.

Ledvična proteinurija je lahko:

• organsko in
• funkcionalni (fiziološki).

Organska ledvična proteinurija

Organska ledvična proteinurija se pojavi pri organski poškodbi nefrona. Glede na prevladujoči mehanizem nastanka lahko ločimo nekatere vrste organske proteinurije.

Glomerularna proteinurija

Glomerularna proteinurija - zaradi poškodbe glomerularnega filtra se pojavi pri glomerulonefritisu in nefropatiji, povezani s presnovnimi ali žilnimi boleznimi. (glomerulonefritis, hipertenzija, infekcijski in alergijski dejavniki, srčna dekompenzacija)

tubulna proteinurija

Tubularna proteinurija - povezana z nezmožnostjo tubulov, da reabsorbirajo plazemske beljakovine z nizko molekulsko maso, ki so prešle skozi nespremenjen glomerularni filter. (amiloidoza, akutna tubularna nekroza, intersticijski nefritis, Fanconijev sindrom)

Prerenalna proteinurija

Prerenalna proteinurija (prekomerna) - se razvije v prisotnosti nenavadno visoke plazemske koncentracije beljakovine z nizko molekulsko maso, ki jo normalni glomeruli filtrirajo v količini, ki presega fiziološko sposobnost reabsorpcije tubulov. (multipli mielom, nekroza mišičnega tkiva, hemoliza eritrocitov)

Funkcionalna ledvična proteinurija

Funkcionalna ledvična proteinurija ni povezana z boleznijo ledvic in ne zahteva zdravljenja.

Funkcionalna proteinurija vključuje:

• korakanje,
• čustveno
• hladno,
• zastrupitev,
• ortostatski (samo pri otrocih in samo v stoječem položaju).

Ekstrarenalna (postrenalna) proteinurija

Z ekstrarenalno (postrenalno) proteinurijo lahko beljakovine vstopijo v urin iz sečil in genitalnega trakta (s kolpitisom in vaginitisom - z nepravilno zbranim urinom). V tem primeru to ni nič drugega kot primesi vnetnega eksudata.

Ekstrarenalna proteinurija običajno ne presega 1 g/dan in je pogosto prehodna.

Diagnozo zunajledvične proteinurije pomagata test s tremi skodelicami in urološki pregled.

Postrenalna proteinurija se pojavi pri cistitisu, uretritisu.

Metode za določanje beljakovin v urinu

Predpogoj za izvajanje študij o prisotnosti beljakovin je absolutna preglednost urina.

Kakovostni vzorci

Vzorec s sulfosalicilno kislino

V dve epruveti vlijemo 3–4 ml filtriranega urina. V poskusno epruveto dodajte 6–8 kapljic 20 % raztopine sulfosalicilne kisline. Druga cev je krmilna. Na temnem ozadju primerjaj kontrolno epruveto s poskusno. Ob prisotnosti beljakovin v vzorcih urina se pojavi opalescentna motnost.

Rezultat je prikazan na naslednji način:

• reakcija je šibko pozitivna (+),
• pozitivno (++),
• izrazito pozitivno (+++).

Vzorec je zelo občutljiv.

Uporabite lahko tudi suhi test, ko več mililitrom urina dodate nekaj kristalov sulfosalicilne kisline ali filtrirni papir, predhodno namočen z raztopino te kisline.

Lažno pozitivni rezultati je lahko posledica vnosa jodovih pripravkov, sulfanilamidov, velikih odmerkov penicilina in prisotnosti visokih koncentracij sečne kisline v urinu.

Test z dušikovo kislino (Gellerjev test)

V epruveto vlijemo 1-2 ml 50% raztopine dušikove kisline, nato pa na kislino nanesemo enako količino urina. V prisotnosti beljakovin se na meji med dvema tekočinama pojavi bel obroč. Včasih se zaradi prisotnosti uratov nekoliko nad mejo med tekočinami oblikuje rdečkasto vijoličen obroč. Uratni obroč se za razliko od beljakovinskega obroča raztopi z rahlim segrevanjem.

Svetel vzorec

Test Bright boil in presejalni testi proteinurije (suhi kolorimetrični vzorci) ne zahtevajo skoraj nobenih reagentov.

Pri kuhanju urina, ki vsebuje beljakovine, se denaturira, pri čemer nastane motna oborina ali kosmiči, ki se za razliko od fosfatnih soli ne raztopijo v 6% ocetni kislini. Presejalni testi temeljijo na sposobnosti beljakovine (albumina), da spremeni barvo papirja, prevlečenega z indikatorjem (običajno bromofenol modrim) in pufrom. Neposredna povezava med intenzivnostjo barve indikatorskega papirja (Albufan, Albutest - Češka; Labstix, Multistix - ZDA; Comburtest - Nemčija) in količino beljakovin omogoča približno oceno količine proteinurije. Vendar trenutno uporabljeni presejalni testi niso brez pomanjkljivosti. Zlasti bromofenol modro ne zazna beljakovin Bence-Jones.

Kvantitativne metode

Brandberg-Roberts-Stolnikova metoda

Metoda temelji na kvalitativnem vzorcu z dušikovo kislino. Potek testa je opisan zgoraj. Pojav tankega obroča na meji dveh tekočin med 2. in 3. minuto po plastenju kaže na prisotnost 0,033 g / l beljakovin v urinu (koncentracija beljakovin v urinu je običajno izražena v ppm, tj. v gramih na liter ). Če se obroček pojavi prej kot po 2 minutah, je treba urin razredčiti z vodo. Takšna razredčitev urina je izbrana tako, da se ob nanosu na dušikovo kislino obroč pojavi v 2-3 minuti. Stopnja redčenja je odvisna od širine in kompaktnosti obroča ter časa njegovega pojava.

Koncentracijo beljakovin izračunamo tako, da 0,033 g/l pomnožimo s stopnjo razredčitve urina (tabela 8).

Roberts-Stolnikova metoda redčenja ima številne pomanjkljivosti: je subjektivna, dolgotrajna, natančnost določanja koncentracije beljakovin se z redčenjem urina zmanjšuje.

Najbolj priročne in natančne so nefelometrične in biuretne metode.

Nefelometrična metoda

Temelji na lastnosti beljakovine, da daje motnost s sulfosalicilno kislino, katere intenzivnost je sorazmerna s koncentracijo beljakovine. 1,25 ml filtriranega urina vlijemo v graduirano epruveto in dodamo 3% raztopino sulfosalicilne kisline do prostornine 5 ml, dobro premešamo. Po 5 minutah izmerimo ekstinkcijo na FEK-M (ali katerem koli drugem fotometru) pri valovni dolžini 590–650 nm (oranžni ali rdeči svetlobni filter) proti kontroli v kiveti s slojem debeline 0,5 cm Za kontrolo , uporabimo 1,25 ml filtriranega urina (enako), ki mu dodamo izotonično raztopino natrijevega klorida do prostornine 5 ml.

Umeritvena krivulja je predhodno zgrajena glede na vrednost ekstinkcije na koncentracijo beljakovin. Standardna raztopina albumina (iz človeškega ali govejega seruma) se uporablja za pripravo različnih beljakovinskih koncentracij. Izpolni delovni list.

Biuretna metoda

Temelji na zmožnosti beljakovine, da z bakrovim sulfatom in jedkimi alkalijami tvori vijoličen biuretni kompleks, katerega intenzivnost barve je neposredno sorazmerna s količino beljakovine. 2 ml urina dodamo 2 ml raztopine trikloroocetne kisline, da oborimo beljakovine in centrifugiramo. Supernatant se zavrže. Usedlini (beljakovini) dodamo 4 ml 3% raztopine NaOH in 0,1 ml 20% raztopine bakrovega sulfata, premešamo in centrifugiramo. Vijolični supernatant se fotometrira pri valovni dolžini 540 nm (zeleni svetlobni filter) proti destilirani vodi v kiveti s plastjo debeline 1,0 cm Koncentracija beljakovin se določi iz tabele, pridobljene empirično (umeritvena krivulja je zgrajena kot v prejšnjem metoda).

Ortostatski test

Indicirano pri sumu na ortostatsko proteinurijo in nefroptozo. Po popolnem praznjenju mehurja preiskovanec vzdržuje vodoravni položaj 2 uri, nato pa brez vstajanja izloči en (kontrolni) del urina. V naslednjih 2 urah preiskovanec neprekinjeno hodi, ohranja položaj maksimalne ledvene lordoze (drži palico za spodnjim delom hrbta), nato pa odda drugi del urina. V obeh delih urina se določi koncentracija beljakovin in vsebnost beljakovin v gramih, v primeru nefroptoze pa število rdečih krvnih celic v 1 ml. Z ortostatsko proteinurijo se v drugem odmerku odkrije proteinurija ali 2-3-kratno povečanje začetne vsebnosti beljakovin v gramih. Pojav hematurije, pogosto v kombinaciji s proteinurijo v sledovih v drugem delu, je značilen za nefroptozo.

Določanje uroproteinov Bence-Jones

Bence-Jonesovi proteini so termolabilni paraproteini z nizko molekulsko maso (relativna molekulska masa 20.000–45.000), ki jih najdemo predvsem pri multiplem mielomu in Waldenströmovi makroglobulinemiji. So lahke L-verige imunoglobulinov. Zaradi majhne molekulske mase L-verige zlahka preidejo iz krvi skozi nepoškodovan ledvični filter v urin in jih tam lahko določimo z reakcijo termoprecipitacije. Študijo je priporočljivo izvajati le s pozitivnim testom s sulfosalicilno kislino. Opredelitev se izvede na naslednji način. V 10 ml urina dodamo 3-4 kapljice 10% raztopine ocetne kisline in 2 ml nasičene raztopine natrijevega klorida, rahlo segrevamo v vodni kopeli in postopoma povečujemo temperaturo. Če so v urinu proteini Bence-Jones, se pri temperaturi 45–60 ° C pojavi razpršena motnost ali nastane gosta bela oborina. Pri nadaljnjem segrevanju do vrelišča se oborina raztopi, pri ohlajanju pa se ponovno pojavi. Ta vzorec ni dovolj občutljiv in ga je treba preveriti z elektroforezo in imunoelektroforezo.

Tarča- Določanje beljakovin v urinu.

Indikacije- hipertenzivna stanja med nosečnostjo, bolezni ledvic pri nosečnicah

Kontraindikacije- Ne.

Možni zapleti- Ne

Viri- posoda, sterilni kozarec, epruvete, 30% sulfosalicilna ali 3% ocetna kislina, pipeta, alkoholni gorilnik.

Algoritem dejanj:

1. Nosečnici razložite potrebo po določanju beljakovin v urinu.

2. Prosite nosečnico, naj zbere urin v sterilni kozarec.

3. Test s sulfosalicilno kislino: v epruveto vlijemo 4-5 ml urina, dodamo 6-10 kapljic kisline. Če je v urinu beljakovina, nastane oborina ali motnost.

4. Vzorec s 3% ocetno kislino: v epruveto vlijemo 8-10 ml urina, zavremo na alkoholnem gorilniku, če je v urinu beljakovina, postane moten. V moten urin dodajte nekaj kapljic 3% raztopine ocetne kisline. Če motnost izgine v urinu, je test negativen.

OPOMBE Določi se v sprejemnem oddelku porodniške ustanove.

Standard "Določitev datuma pričakovanega datuma rojstva."

Cilj: oceniti praktično sposobnost diplomanta pri določanju datuma pričakovanega poroda

Indikacije- vsak obisk nosečnice v porodnišnici.

Kontraindikacije- Ne

Možni zapleti- Ne

Viri- miza, dva stola, koledar, porodniški koledar, pisni podatki o datumu prvega dne zadnje menstruacije, prvi pregled v porodnišnici, datum ultrazvoka z zaključkom, datum predporodnega dopusta.

Algoritem dejanj:

1. Predstavite se, ženski razložite pomen izračuna predvidenega roka poroda.
2. Ugotovite prvi dan zadnje menstruacije pri nosečnici, temu datumu dodajte 280 dni ali z uporabo formule Negele 1 dnevu zadnje menstruacije dodajte 7 dni in odštejte 3 mesece, dobljeni datum je rok poroda. za menstruacijo.
3. Ugotovite datum prvega gibanja ploda, temu dnevu prištejte 140 dni za primiparous in 154 dni za multiparous, dobljeni datum je rok za gib ploda.
4. Glede na menstrualni cikel določite, na kateri dan je bila zadnja ovulacija in od prvega dne zadnje menstruacije odštejte tri mesece nazaj ter seštejte število dni pred ovulacijo, dobite datum poroda.
5. Izračunajte rok poroda ob prvem nastopu v porodnišnici. Napaka bo minimalna, če je nosečnica šla k zdravniku v prvih 12 tednih nosečnosti.
6. Določite datum poroda glede na datum predporodnega dopusta. Obdobje predporodnega dopusta se začne pri 30 tednih nosečnosti. Temu datumu doda 10 tednov in dobi datum rojstva.
7. Izračunajte rok poroda z ultrazvokom, opravljenim v ženski kliniki.

Standard "Pregled zunanjih genitalij"

Cilj: ovrednotiti praktične sposobnosti diplomanta pri pregledu zunanjih genitalij nosečnice

Indikacije- začetna pritožba nosečnice v porodniški ustanovi, sprejem v bolnišnico z redno porodno aktivnostjo.

Kontraindikacije- Ne

Možni zapleti- Ne

Viri– ženska fantomka, kavč, perilo za kavč za enkratno uporabo

Algoritem dejanj:

1. Predstavite se, razložite ženski pomen pregleda zunanjih genitalij, faze njegovega izvajanja, pridobite njeno soglasje

2. Izvedite higiensko razkuževanje rok

3. Na obe roki si nadenite sterilne rokavice.

4. Preglejte zunanje spolne organe: ocenite vrsto poraščenosti, zgradbo velikih in malih sramnih ustnic, klitoris, stanje perineuma.

5. S palcem in kazalcem obeh rok razširite velike sramne ustnice, preglejte stanje zunanje odprtine sečnice, preddverje nožnice, palpirajte območje Bartholinovih žlez (spodnja tretjina velikih sramnih ustnic).

6. Odstranite rokavice za enkratno uporabo in jih postavite v varno škatlo za odlaganje.

7. Umijte si roke z milom.

8. Nosečnici posredujte podatke o stanju zunanjih spolovil.

9. Zabeležite v dokumentacijo.

OPOMBA Pregled poteka zaupno, brez poniževanja dostojanstva ženske.

Standard "Zagotavljanje nujne oskrbe za eklampsijo"

Cilj: oceniti praktične spretnosti diplomanta, ki nudi nujno oskrbo pri eklampsiji

Indikacije- Krči pri eklampsiji

Kontraindikacije- Ne

Možni zapleti- ponavljajoči se epileptični napadi, eklamptična koma.

Viri– model ženske, 25 % raztopina magnezijevega sulfata, spatula, držalo za jezik, 20 ml brizga, 500 ml fiziološke raztopine, intravenski infuzijski sistem, alkohol, vata, podveza

Algoritem dejanj:

1. V primeru napadov pokličite vse prosto osebje in ekipo za oživljanje, ne da bi zapustili pacienta.

2. Hkrati naredite naslednje:

· sprostite dihalne poti z odpiranjem ust z lopatko ali žlico, ovito v gazo, izvlecite jezik z držalom za jezik.

Odstranite slino iz ustne votline, takoj ko pride do vdihavanja, zagotovite prost dostop zraka.

Po prekinitvi napadov intravensko vnesite začetni odmerek magnezijevega sulfata - 25% -20 ml 10-15 minut.

3. Začnite intravensko infuzijo 320 ml fiziološke raztopine z 80 ml 25 % raztopine magnezijevega sulfata.

4. Bolnico pod nadzorom krvnega tlaka in potekajoče terapije z magnezijem prenesti na nosila in prepeljati v oddelek intenzivne nege najbližje porodnišnice.

OPOMBA

Pri eklampsiji je treba porod opraviti po stabilizaciji bolnikovega stanja, vendar najkasneje 12 ur od začetka napadov.

Standard "Nujna pomoč pri hudi preeklampsiji".

Cilj: oceniti praktične veščine diplomanta pri zagotavljanju nujne pomoči pri hudi preeklampsiji

Indikacije- huda preeklampsija

Kontraindikacije- med napadom

Možni zapleti- Krči, eklamptična koma.

Viri– model ženske, 25% raztopina magnezijevega sulfata, 20 ml brizga, 500 ml fiziološke raztopine, sistem za intravensko infuzijo, alkohol, vata, podveza

Algoritem dejanj:

1. Postavite diagnozo: "Huda preeklampsija", če je prisoten eden od teh simptomov: glavobol, bolečina v nadželodčni regiji, motnje vida, muhe pred očmi, slabost, bruhanje v ozadju arterijske hipertenzije (140/90 mm Hg in več). ) in proteinurijo.

2. Pokličite vse prosto osebje in ekipo za oživljanje, ne da bi zapustili bolnika.

3. Hkrati naredite naslednje:

Nosečnico položite na ravno površino, izogibajte se poškodbam in obrnite bolnikovo glavo na eno stran.

Intravensko vnesite začetni odmerek magnezijevega sulfata - 25% -20 ml 10-15 minut.

4. Začnite intravensko infuzijo 320 ml fiziološke raztopine z 80 ml 25 % raztopine magnezijevega sulfata.

5. Ko je krvni tlak enak ali višji od 160/100 mm Hg. uravnavamo krvni tlak tako, da predpišemo 10 mg nifedipina sublingvalno, ponovno po 30 minutah 10 mg pod kontrolo krvnega tlaka (vzdržujemo krvni tlak 130/90-140/95 mm Hg).

6. Bolnico pod nadzorom krvnega tlaka in potekajoče terapije z magnezijem prenesti na nosila in prepeljati v oddelek intenzivne nege najbližje porodnišnice.

OPOMBAČe se pojavijo znaki prevelikega odmerjanja magnezijevega sulfata, injicirajte 10 ml 10% raztopine Ca glukonata intravensko 10 minut.

Standard amniotomije.

Tarča- odpiranje plodovega mehurja.

Indikacije- pred indukcijo poroda, stimulacijo poroda, oslabelost poroda Kontraindikacije- ogrožajoča stanja matere ali ploda

Možni zapleti- prolaps majhnih delov ploda, ascendentna okužba, poškodba žil plodovega mehurja, odstop normalno locirane posteljice

Viri- ginekološki stol, individualna plenica, sterilne rokavice, antiseptik za zdravljenje zunanjih genitalij ženske, veja klešč.

Algoritem dejanj:

1. Predstavite se.

2. Ženski razložite potrebo po tej operaciji.

3. Vzemite bolnikovo informirano soglasje za poseg

4. Žensko položite na ginekološki stol, pod njo pa ležišče za enkratno uporabo.

5. Zunanje spolne organe ženske zdravite z antiseptično raztopino, na želodec položite sterilno plenico.

6. Izvedite higiensko razkuževanje rok.

7. Na obeh rokah nosite rokavice za enkratno uporabo.

8. Razprite sramne ustnice s prsti leve roke in jih zaporedno vstavite v nožnico

kazalec, nato sredinec desne roke.

9. Vnesite vejo klešč v vagino med kazalcem in sredino

prsti.

10. Punkcija amnijske ovojnice.

11. Vnesite kazalec in nato sredinec v luknjo v plodovem mehurju, postopoma razširite luknjo, odstranite membrane iz glave. Počasi, pod nadzorom prstov, sproščajte amnijsko tekočino (preprečevanje prolapsa majhnih delov, odstop normalno locirane posteljice).

13. Izvlecite prste.

14. Odstranite rokavice in jih postavite v varno škatlo za odlaganje.

15. Umijte si roke z milom.

16. Zapišite podatke v zgodovino poroda.

OPOMBA.

Pri polihidramniju se naredi majhna luknjica in voda se počasi sprošča. Potrebno je nadzorovati hitrost odtekanja vode, saj lahko s hitrim in ostrim odtokom iz njih izpadejo majhni deli ploda. Po odteku vode je priporočljivo, da ženska leži 30 minut.

Navodilo

Kvalitativne metode za določanje beljakovin v urin: Hellerjeva metoda, test z 20% sulfosalicilno kislino, test z vrenjem itd. Polkvantitativne metode: uporaba diagnostičnih testnih lističev za določanje beljakovin v urin, Brandberg-Roberts-Stolnikova metoda. Kvantitativne metode: turbidimetrična in kolorimetrična.

Določitev dnevnih beljakovin urin pri koncentraciji 0,033 g/l ali več je patologija. Praviloma koncentracija beljakovin v jutranjem delu urina ne presega 0,002 g / l, v dnevnem pa urin koncentracija beljakovin ni večja od 50-150 mg beljakovin.

Viri:

• določanje beljakovin v urinu

Urin je produkt človeškega metabolizma. Nastane med filtracijo krvi v ledvicah, zato sestava urina jasno opisuje stanje človeškega telesa.

Urin je kompleksna raztopina več kot 150 spojin. Nekatere specifične snovi, na primer aceton, žolčne kisline, beljakovine, glukoza, so lahko prisotne le pri določenih boleznih.

Za nadzor zdravja ljudi je najprej treba določiti količino urina. Norma je nastanek 1-1,8 litra urina na dan. Če se izloči več kot 2 litra urina, je to znak možne motnje v delovanju ledvic, sladkorne bolezni in številnih drugih bolezni. Če na dan nastane manj kot 0,5 litra urina, gre za zamašitev sečevoda ali mehurja.

barva urina

Barva izločenega urina je odvisna od številnih dejavnikov, zato je lahko različna, od svetlo rumene do oranžne. Na prisotnost določenih odtenkov lahko vplivajo nekatera živila, pa tudi zdravila, ki jih jemlje oseba.

Po jemanju zdravil se lahko urin obarva in pridobi rdečkast odtenek. Če se oseba aktivno giblje, medtem ko sprošča veliko količino znoja, bo urin imel intenzivno rumeno barvo, kot pri jemanju zdravil, kot sta Nitroxoline ali Biomycin.

Če oseba ni jedla nobenih barvil in zdravil, vendar je barva njegovega urina drugačna od običajne, lahko sumite na prisotnost bolezni v telesu. Na primer, pri boleznih jeter bo urin temno rumene ali zelenkaste barve.

Prisotnost krvi v izločenem urinu jasno kaže na prisotnost kamna ali ledvične krvavitve, če opazimo tudi bolečino.

Če je uriniranje oteženo, lahko to kaže na vnetni proces, ki ga povzroča okužba v mehurju. Toda umazan in moten urin kaže na hudo bolezen ledvic.

Beljakovine v urinu

V krvi osebe ni beljakovin ali pa je njihova količina tako majhna, da je ni mogoče določiti z laboratorijskimi preiskavami. Če se v urinu odkrije beljakovina, je treba opraviti ponavljajoče se teste, saj je lahko prisotna, ko se oseba zjutraj zbudi, pa tudi po težkem fizičnem delu ali vadbi pri športnikih.

Vizualno ugotoviti, ali so beljakovine v urinu ali ne, je 100% nemogoče. Lahko samo ugibate, ko je v urinu velika količina belkastih kosmičev.

Če se beljakovine v urinu večkrat odkrijejo, to kaže na prisotnost neke vrste bolezni ledvic. Vnetni procesi, ki se pojavljajo v njih, izzovejo rahlo povečanje količine beljakovin. Če se z urinom izloči več kot 2 grama, je to znak za alarm.

Pielonefritis je vnetna bolezen, ki prizadene ledvično medenico, čašice in parenhim. V večini primerov je vnetje posledica bakterijske okužbe. Popolno okrevanje je možno le s pravočasno diagnozo, zato je ob pojavu simptomov potreben temeljit pregled.

V dnevnem urinu zdravih posameznikov najdemo majhne količine beljakovin. Vendar tako majhnih koncentracij ni mogoče zaznati z običajnimi raziskovalnimi metodami. Izločanje večjih količin beljakovin, pri katerem so običajni kvalitativni testi na beljakovine v urinu pozitivni, imenujemo proteinurija. Obstaja ledvična (prava) in ekstrarenalna (lažna) proteinurija. Pri ledvični proteinuriji beljakovine vstopijo v urin neposredno iz krvi zaradi povečane filtracije v glomerulih ledvic ali zmanjšane tubularne reabsorpcije.

Ledvična (prava) proteinurija

Ledvična (prava) proteinurija je funkcionalna in organska. Med funkcionalno ledvično proteinurijo najpogosteje opazimo naslednje vrste:

Fiziološka proteinurija novorojenčkov, ki izgine 4. - 10. dan po rojstvu, pri nedonošenčkih pa nekoliko kasneje;
- ortostatska albuminurija, ki je značilna za otroke od 7 do 18 let in se pojavi le v pokončnem položaju telesa;
- prehodna (možganska) albuminurija, ki jo lahko povzročijo različne bolezni prebavil, huda anemija, opekline, poškodbe ali fiziološki dejavniki: težki fizični napori, podhladitev, močna čustva, obilna, beljakovinsko bogata hrana itd.

Organsko (ledvično) proteinurijo opazimo zaradi prehajanja beljakovin iz krvi skozi poškodovana območja endotelija ledvičnih glomerulov pri boleznih ledvic (glomerulonefritis, nefroza, nefroskleroza, amiloidoza, nefropatija nosečnosti), motnjah ledvične hemodinamike (ledvična venska bolezen). hipertenzija, hipoksija), trofični in toksični (vključno z zdravili) učinki na stene glomerularnih kapilar.

Ekstrarenalna (lažna) proteinurija

Ekstrarenalna (lažna) proteinurija, pri kateri je vir beljakovin v urinu primesi levkocitov, eritrocitov, bakterij, urotelijskih celic. opazili pri uroloških boleznih (urolitiaza, ledvična tuberkuloza, tumorji ledvic in sečil itd.).

Določitev beljakovin v urinu

Večina kvalitativnih in kvantitativnih metod za določanje beljakovin v urinu temelji na njihovi koagulaciji v volumnu urina ali na meji medijev (urina in kisline).

Med kvalitativnimi metodami za določanje bedke v urinu se najbolj uporabljata enotni test s sulfosalicilno kislino in Hellerjev obročni test.

Standardiziran vzorec s sulfasalicilno kislino se izvede na naslednji način. 3 ml filtriranega urina vlijemo v 2 epruveti. V eno od njih dodajte 6-8 kapljic 20% raztopine sulfasalicilne kisline. Obe cevi primerjamo na temnem ozadju. Motnost urina v epruveti s sulfasalicilno kislino kaže na prisotnost beljakovin. Pred študijo je treba določiti reakcijo urina in če je alkalna, jo nakisajte z 2-3 kapljicami 10% raztopine ocetne kisline.

Gellerjev test temelji na dejstvu, da ob prisotnosti beljakovin v urinu na meji med dušikovo kislino in urinom le-ta koagulira in pojavi se bel obroč. V epruveto vlijemo 1-2 ml 30% raztopine dušikove kisline in natančno enako količino filtriranega urina previdno nanesemo po steni epruvete. Pojav belega obroča na meji med dvema tekočinama kaže na prisotnost beljakovin v urinu. Ne smemo pozabiti, da včasih v prisotnosti velike količine uratov nastane bel obroč, vendar se za razliko od beljakovinskega obroča pojavi nekoliko nad mejo med dvema tekočinama in se pri segrevanju raztopi [Pletneva N.G., 1987].

Najpogosteje uporabljene kvantitativne metode so:

1) enotna metoda Brandberg-Roberts-Stolnikova, ki temelji na Hellerjevem obročnem testu;
2) fotoelektrokolorimetrična metoda za kvantitativno določanje beljakovin v urinu z motnostjo, ki nastane z dodatkom sulfasalicilne kisline;
3) biuretna metoda.

Določanje beljakovin v urinu s poenostavljeno pospešeno metodo se izvaja s kolorimetrično metodo z uporabo indikatorskega papirja, ki ga proizvajajo Lachema (Slovaška), Albuphan, Ames (Anglija), Albustix, Boehringer (Nemčija), Comburtest itd. Metoda je sestavljena iz potopitev v urin posebnega papirnatega traku, impregniranega s tetrabromofenol modrim in citratnim pufrom, ki spreminja barvo iz rumene v modro glede na vsebnost beljakovin v urinu. Pogojno se koncentracija beljakovin v testnem urinu določi s standardno lestvico. Za pravilne rezultate morajo biti izpolnjeni naslednji pogoji. pH urina mora biti v območju 3,0-3,5; preveč alkalen urin (pH 6,5) bo dal lažno pozitiven rezultat, preveč kisel urin (pH 3,0) pa lažno negativen.

Papir ne sme biti v stiku s testnim urinom dlje, kot je navedeno v navodilih, sicer bo test dal lažno pozitivno reakcijo. Slednje opazimo tudi, ko je v urinu velika količina sluzi. Občutljivost različnih vrst in serij papirja je lahko različna, zato je treba kvantitativno oceno beljakovin v urinu s to metodo obravnavati previdno. Določanje njegove količine v dnevnem urinu z indikatorskim papirjem je nemogoče [Pletneva N.G., 1987]

Opredelitev dnevne proteinurije

Obstaja več načinov za določitev količine beljakovin, izločenih z urinom na dan. Najenostavnejša je metoda Brandberg-Roberts-Stolnikova.

Metodologija. V epruveto vlijemo 5-10 ml temeljito premešanega dnevnega urina in vzdolž njenih sten previdno dodamo 30% raztopino dušikove kisline. Pri prisotnosti beljakovin v urinu v količini 0,033% (to je 33 mg na 1 liter urina) se po 2-3 minutah pojavi tanek, a jasno viden bel obroč. Pri nižji koncentraciji je test negativen. Z večjo vsebnostjo beljakovin v urinu se njegova količina določi s ponavljajočimi se razredčitvami urina z destilirano vodo, dokler se obroč ne preneha oblikovati. V zadnji epruveti, v kateri je obroč še viden, bo koncentracija beljakovin 0,033 %. Če pomnožite 0,033 s stopnjo razredčitve urina, določite vsebnost beljakovin v 1 litru nerazredčenega urina v gramih. Nato se vsebnost beljakovin v dnevnem urinu izračuna po formuli:

K \u003d (x V) / 1000

Kjer je K količina beljakovin v dnevnem urinu (g); x je količina beljakovin v 1 litru urina (g); V je količina urina, izločenega na dan (ml).

Običajno se čez dan z urinom izloči od 27 do 150 mg (povprečno 40-80 mg) beljakovin.

Ta test vam omogoča, da v urinu določite le fine beljakovine (albumin). Natančnejše kvantitativne metode (kolorimetrična metoda po Kjeldahlu itd.) so precej zapletene in zahtevajo posebno opremo.

Pri ledvični proteinuriji se z urinom ne izločajo le albumini, temveč tudi druge vrste beljakovin. Normalni proteinogram (po Seitzu et al., 1953) ima naslednji odstotek: albumini - 20%, α 1 -globulini - 12%, α 2 -globulini - 17%, γ-globulini - 43% in β-globulini - 8 % . Razmerje med albumini in globulini se spreminja z različnimi boleznimi ledvic, tj. porušeno je količinsko razmerje med beljakovinskimi frakcijami.

Najpogostejše metode frakcioniranja uroproteinov so: soljenje z nevtralnimi solmi, elektroforetsko frakcioniranje, imunološke metode (radialna imunodifuzijska reakcija po Manciniju, imunoelektroforetska analiza, precipitacijska imunoelektroforeza), kromatografija, gelska filtracija in ultracentrifugiranje.

V povezavi z uvedbo metod za frakcioniranje uroproteinov, ki temeljijo na preučevanju elektroforetske mobilnosti, variabilnosti molekulske mase, velikosti in oblike molekul uroproteinov, je postalo mogoče izolirati vrste proteinurije, značilne za določeno bolezen, preučiti očistke posamezne plazemske beljakovine. Do danes je bilo v urinu identificiranih več kot 40 plazemskih beljakovin, vključno z 31 plazemskimi beljakovinami v normalnem urinu.

Selektivna proteinurija

V zadnjih letih se je pojavil koncept selektivnosti proteinurije. Leta 1955 sta Hardwicke in Squire oblikovala koncept "selektivne" in "neselektivne" proteinurije, pri čemer sta ugotovila, da filtracija plazemskih proteinov v urin poteka po določenem vzorcu: večja kot je molekulska masa proteina, izločenega v urinu, manjši je njegov očistek in manjša je njegova koncentracija v urinu.končni urin. Proteinurija, ki ustreza temu vzorcu, je selektivna, v nasprotju z neselektivno, za katero je značilna perverzija pridobljenega vzorca.

Odkrivanje beljakovin z relativno veliko molekulsko maso v urinu kaže na odsotnost selektivnosti ledvičnega filtra in njegovo izrazito poškodbo. V teh primerih govorimo o nizki selektivnosti proteinurije. Zato je trenutno določitev beljakovinskih frakcij urina z metodami elektroforeze v škrobnih in poliakrilamidnih gelih postala zelo razširjena. Na podlagi rezultatov teh raziskovalnih metod je mogoče oceniti selektivnost proteinurije.

Po mnenju V. S. Makhlina (1975) je najbolj upravičena določitev selektivnosti proteinurije s primerjavo očistka 6-7 posameznih beljakovin krvne plazme (albumin, traneferin, α 2 - makroglobulin, IgA, IgG, IgM) z uporabo natančnih in specifične kvantitativne imunološke metode reakcije radialne imunodifuzije po Manciniju, imunoelektroforetska analiza in precipitacijska imunoelektroforeza. Stopnja selektivnosti proteinurije je določena z indeksom selektivnosti, ki je razmerje med primerjanimi in referenčnimi proteini (albumini).

Študija očistka posameznih plazemskih proteinov omogoča pridobitev zanesljivih informacij o stanju filtracijskih bazalnih membran glomerulov ledvic. Razmerje med naravo beljakovin, izločenih v urin, in spremembami v bazalnih membranah glomerulov je tako izrazito in konstantno, da lahko uroproteinogram posredno oceni patofiziološke spremembe v glomerulih ledvic. Običajno je povprečna velikost por glomerularne bazalne membrane 2,9-4 A ° NM, ki lahko prehaja beljakovine z molekulsko maso do 10 4 (mioglobulin, kislina α 1 - glikoprotein, lahke verige imunoglobulina, Fc in Fab - IgG fragmenti, albumin in transferin).

Z glomerulonefritisom, nefrotskim sindromom, se velikost por v bazalnih membranah glomerulov poveča, zato bazalna membrana postane prepustna za beljakovinske molekule velike velikosti in mase (ceruloplazmin, haptoglobin, IgG, IgA itd.). Pri skrajni stopnji poškodbe glomerulov ledvic se v urinu pojavijo velikanske molekule beljakovin krvne plazme (α 2 -makroglobulin, IgM in β 2 -lipoprotein).

Če določimo beljakovinski spekter urina, lahko sklepamo, da so pretežno prizadeti nekateri deli nefrona. Za glomerulonefritis s prevladujočo lezijo glomerularnih bazalnih membran je značilna prisotnost beljakovin z veliko in srednjo molekulsko maso v urinu. Za pielonefritis s prevladujočo lezijo bazalnih membran tubulov je značilna odsotnost velikih molekularnih beljakovin in prisotnost povečanih količin beljakovin srednje in nizke molekulske mase.

β 2 -mikroglobulin

Poleg znanih beljakovin, kot so albumini, imunoglobulini, lipoproteini. fibrinogen, transferin, urin vsebuje plazemske mikroproteinske proteine, med katerimi je klinično zanimiv β 2 -mikroglobulin, ki sta ga odkrila Berggard in Bearn leta 1968. Z nizko molekulsko maso (relativna molekulska masa 1800) prosto prehaja skozi ledvične glomerule. in se reabsorbira v proksimalnih tubulih. To omogoča kvantitativno določanje β 2 -mikroglobulina v krvi in ​​urinu za določitev glomerulne filtracije in sposobnosti ledvic za resorbcijo beljakovin v proksimalnih tubulih.

Koncentracijo tega proteina v krvni plazmi in urinu določimo z radioimunološkim testom s standardnim kompletom "Phade-bas β 2 -mikroiest" (Pharmacia, Švedska). Krvni serum zdravih ljudi vsebuje povprečno 1,7 mg / l (razpon od 0,6 do 3 mg / l), v urinu - povprečno 81 μg / l (največ 250 μg / l) β 2 -mikroglobulina. Njegov presežek v urinu nad 1000 mcg/l je patološki pojav. Vsebnost β2-mikroglobulina v krvi se poveča pri boleznih, ki jih spremlja okvara glomerularne filtracije, zlasti pri akutnem in kroničnem glomerulonefritisu, policistični bolezni ledvic, nefrosklerozi, diabetični nefropatiji, akutni odpovedi ledvic.

Koncentracija β 2 -mikroglobulina v urinu se poveča z boleznimi, ki jih spremlja kršitev reabsorpcijske funkcije tubulov, kar povzroči povečanje njegovega izločanja z urinom za 10-50 krat, zlasti s pielonefritisom, kroničnim ledvičnim odpoved, gnojna zastrupitev itd. Značilno je, da pri cistitisu v nasprotju s pielonefritisom ni povečanja koncentracije β 2 -mikroglobulina v urinu, kar se lahko uporablja za diferencialno diagnozo teh bolezni. Vendar pa je pri razlagi rezultatov študije treba upoštevati, da vsako zvišanje temperature vedno spremlja povečanje izločanja β2-mikroglobulina z urinom.

Povprečne molekule krvi in ​​urina

Srednje molekule (SM), drugače imenovane beljakovinski toksini, so snovi z molekulsko maso 500-5000 daltonov. Njihova fizična struktura ni znana. Sestava SM vključuje vsaj 30 peptidov: oksitocin, vazopresin, angiotenzin, glukagon, adrenokortikotropni hormon (ACTH) itd. Prekomerno kopičenje SM opazimo z zmanjšanim delovanjem ledvic in veliko količino deformiranih beljakovin in njihovih metabolitov v krvi. Imajo različne biološke učinke in so nevrotoksični, povzročajo sekundarno imunosupresijo, sekundarno anemijo, zavirajo biosintezo beljakovin in eritropoezo, zavirajo delovanje številnih encimov in motijo ​​faze vnetnega procesa.

Nivo SM v krvi in ​​urinu določamo s presejalnim testom, pa tudi s spektrofotometrijo v ultravijoličnem območju pri valovni dolžini 254 in 280 mm na spektrofotometru DI-8B ter dinamično spektrofotometrijo z računalniško obdelavo v valovni dolžini. območje 220-335 nm na istem spektrometru Beckman. Vsebnost SM v krvi je norma, ki je enaka 0,24 ± 0,02 arb. enot in v urinu - 0,312 ± 0,09 arb. enote
Ker so normalni odpadni produkti telesa, se običajno ponoči odstranijo iz njega z glomerularno filtracijo za 0,5 %; 5 % jih odstranimo na drug način. Vse frakcije SM so podvržene tubulni reabsorpciji.

Neplazemski (tkivni) uroproteini

Poleg beljakovin v krvni plazmi so lahko v urinu tudi neplazemske (tkivne) beljakovine. Po Buxbaumu in Franklinu (1970) neplazemski proteini predstavljajo približno 2/3 vseh urinskih biokoloidov in pomemben delež uroproteinov pri patološki proteinuriji. Tkivne beljakovine vstopajo v urin neposredno iz ledvic ali organov, ki so anatomsko povezani z urinarnim traktom, ali vstopajo v kri iz drugih organov in tkiv ter iz nje skozi bazalne membrane glomerulov ledvic v urin. V slednjem primeru poteka izločanje tkivnih beljakovin v urin podobno kot izločanje plazemskih beljakovin različnih molekulskih mas. Sestava neplazemskih uroproteinov je izjemno raznolika. Med njimi so glikoproteini, hormoni, antigeni, encimi (encimi).

Tkivne beljakovine v urinu ugotavljamo s konvencionalnimi metodami beljakovinske kemije (ultracentrifugiranje, gelska kromatografija, različne vrste elektroforeze), specifičnimi reakcijami na encime in hormone ter imunološkimi metodami. Slednji omogočajo tudi določitev koncentracije neplazemskega uroproteina v urinu in v nekaterih primerih določitev tkivnih struktur, ki so postale vir njegovega videza. Glavna metoda za odkrivanje neplazemskih beljakovin v urinu je imunodifuzijska analiza z antiserumom, pridobljenim z imunizacijo poskusnih živali s človeškim urinom in nato osiromašenim (adsorbiranim) s proteini krvne plazme.

Preiskava encimov v krvi in ​​urinu

V patološkem procesu opazimo globoke motnje vitalne aktivnosti celic, ki jih spremlja sproščanje znotrajceličnih encimov v tekoče medije telesa. Encimodiagnostika temelji na določanju števila encimov, ki se sproščajo iz celic prizadetih organov in niso značilni za krvni serum.
Študije človeškega in živalskega nefrona so pokazale, da v njegovih posameznih delih obstaja visoka encimska diferenciacija, ki je tesno povezana s funkcijami, ki jih vsak oddelek opravlja. Ledvični glomeruli vsebujejo relativno majhne količine različnih encimov.

Celice ledvičnih tubulov, zlasti proksimalnih, vsebujejo največjo količino encimov. Njihovo visoko aktivnost opazimo v Henlejevi zanki, neposrednih tubulih in zbiralnih kanalih. Spremembe aktivnosti posameznih encimov pri različnih boleznih ledvic so odvisne od narave, resnosti in lokalizacije procesa. Opazimo jih pred pojavom morfoloških sprememb v ledvicah. Ker je vsebnost različnih encimov jasno lokalizirana v nefronu, lahko določitev enega ali drugega encima v urinu prispeva k aktualni diagnozi patološkega procesa v ledvicah (glomerulih, tubulih, skorji ali meduli), diferencialni diagnozi bolezni ledvic in določanje dinamike (oslabitev in poslabšanje) procesa v ledvičnem parenhimu.

Za diferencialno diagnozo bolezni genitourinarnega sistema se uporablja določanje aktivnosti naslednjih encimov v krvi in ​​urinu: laktat dehidrogenaza (LDH), levcin aminopeptidaza (LAP), kisla fosfataza (AP), alkalna fosfataza (AP) , β-glukuronidaza, glutamin-oksaloacetna transaminaza (GST), aldolaza, transamidinaza itd. Aktivnost encimov v krvnem serumu in urinu se določa z biokemičnimi, spektrofotometričnimi, kromatografskimi, fluorimetričnimi in kemiluminiscenčnimi metodami.

Enzimurija pri ledvični bolezni je bolj izrazita in pravilna kot encimemija. Posebej izrazit je v akutni fazi bolezni (akutni pielonefritis, travma, tumorski razpad, ledvični infarkt itd.). Pri teh boleznih je ugotovljena visoka aktivnost transamidinaze, LDH, alkalne fosfataze in CP, hialuronidaze, LAP, pa tudi nespecifičnih encimov, kot je GST, katalaze [Polyantseva LR, 1972].

Selektivna lokalizacija encimov v nefronu ob odkritju LAP in alkalne fosfataze v urinu nam omogoča, da z zaupanjem govorimo o akutnih in kroničnih boleznih ledvic (akutna odpoved ledvic, nekroza ledvičnih tubulov, kronični glomerulonefritis) [Shemetov V.D., 1968]. Po A. A. Karelin in L. R. Polyantseva (1965) se transamidinaza nahaja le v dveh organih - ledvicah in trebušni slinavki. Je mitohondrijski encim ledvic in ga običajno ni v krvi in ​​urinu. Pri različnih boleznih ledvic se transamidinaza pojavi v krvi in ​​urinu, pri poškodbah trebušne slinavke pa le v krvi.

Diferencialni test pri diagnozi glomerulonefritisa in pielonefritisa Krotkiewski (1963) upošteva aktivnost alkalne fosfataze v urinu, katere povečanje je bolj značilno za pielonefritis in diabetično glomerulosklerozo kot za akutni in kronični nefritis. Povečanje dinamične amilasemije s hkratnim zmanjšanjem amilazurije lahko kaže na nefrosklerozo in gubanje ledvic, LAP je najpomembnejši za patološke spremembe v glomerulih in zavitih tubulih ledvic, saj je njegova vsebnost v teh delih nefrona višja [Shepotinovsky V.P. et al., 1980]. Za diagnozo lupusnega nefritisa se priporoča določitev β-glukuronidaze in CF [Privalenko M.N. et al., 1974].

Pri ocenjevanju vloge encimurije pri diagnozi bolezni ledvic je treba upoštevati naslednje določbe. Encimi, ki so po svoji naravi beljakovine, z majhno molekulsko maso lahko prehajajo skozi nedotaknjene glomerule, kar določa tako imenovani fiziološki encim. Med temi encimi sta v urinu nenehno zaznavna α-amilaza (relativna molekulska masa 45.000) in uropepsin (relativna molekulska masa 38.000).

Poleg nizkomolekularnih encimov v urinu zdravih oseb najdemo v majhnih koncentracijah tudi druge encime: LDH, aspartat in alanin aminotransferaze, alkalne fosfataze in CP, maltazo, aldolazo, lipazo, različne proteaze in peptidaze, sulfatazo, katalazo, ribonukleaza, peroksidaza.

Visokomolekularni encimi z relativno molekulsko maso več kot 70.000-100.000 po Richterichu (1958) in Hessu (1962) lahko vstopijo v urin le, če je motena prepustnost glomerularnega filtra. Normalna vsebnost encimov v urinu ne omogoča izključitve patološkega procesa v ledvicah z okluzijo sečnice. Z epimurijo je možno sproščanje encimov ne le iz samih ledvic, temveč tudi iz drugih parenhimskih organov, celic sluznice sečil, prostate, pa tudi oblikovanih elementov urina s hematurijo ali levkociturijo.

Večina encimov je nespecifičnih za ledvice, zato je težko ugotoviti, od kod prihajajo encimi, ki jih najdemo v urinu zdravih in bolnih ljudi. Vendar pa je stopnja encimurije, tudi za nespecifične encime pri poškodbi ledvic, višja od normalne ali tiste, ki jo opazimo pri boleznih drugih organov. Več dragocenih informacij lahko zagotovi obsežna študija dinamike številnih encimov, zlasti organsko specifičnih, kot je transaminaza.

Pri reševanju vprašanja ledvičnega izvora encima v urinu študija izoencimov pomaga identificirati frakcije, značilne za proučevani organ. Izoencimi so encimi, ki so po delovanju izogeni (katalizirajo isto reakcijo), vendar heterogeni po kemijski strukturi in drugih lastnostih. Vsako tkivo ima svoj izoencimski spekter. Dragocene metode za ločevanje izoencimov so elektroforeza v škrobnih in poliakrilamidnih gelih ter ionsko izmenjevalna kromatografija.

Beljakovine Bence Jones

Z multiplim mielomom in Waldenströmovo makroglobulinemijo najdemo v urinu beljakovine Bence-Jones. Metoda za odkrivanje tega proteina v urinu temelji na reakciji termoprecipitacije. Prej uporabljene metode, ki ocenjujejo raztapljanje tega proteina pri temperaturi 100 ° C in ponovno obarjanje ob poznejšem ohlajanju, so nezanesljive, saj vsa proteinska telesa Bence-Jones nimajo ustreznih lastnosti.

Zanesljivejša detekcija tega paraproteina z njegovim obarjanjem pri temperaturi 40-60 °C. Vendar tudi v teh pogojih padavine morda ne bodo padale v preveč kislem (pH< 3,0—3,5) или слишком щелочной (рН >6,5) urin z nizkim OPM in nizko koncentracijo beljakovin Bence-Jones. Najbolj ugodne pogoje za njegovo obarjanje zagotavlja metoda, ki jo je predlagal Patnem: 4 ml filtriranega urina zmešamo z 1 ml 2 M acetatnega pufra pH 4,9 in segrevamo 15 minut v vodni kopeli pri temperaturi 56 °C. V prisotnosti proteina Bence-Jones se v prvih 2 minutah pojavi izrazita oborina.

Pri koncentraciji beljakovin Bence-Jones, nižji od 3 g / l, je lahko test negativen, vendar je v praksi to izjemno redko, saj je njegova koncentracija v urinu običajno večja. Na vzorce vrenja se ni mogoče popolnoma zanesti. S popolno gotovostjo ga lahko odkrijemo v urinu z imunoelektroforetično metodo s specifičnimi serumi proti težkim in lahkim verigam imunoglobulinov.