मूत्र में प्रोटीन का गुणात्मक निर्धारण। "क्लिनिकल लेबोरेटरी रिसर्च" पुस्तक डाउनलोड करें (2.84Mb)

विधि सिद्धांत:

मूत्र का आपेक्षिक घनत्व सामान्यतः 1.015-1.025 g/cm 3 होता है। मूत्र के सापेक्ष घनत्व का निर्धारण यूरोमीटर नामक विशेष छोटे हाइड्रोमीटर का उपयोग करके किया जाता है। यूरोमीटर दो प्रकार के होते हैं: पहला कम और सामान्य सापेक्ष घनत्व वाले मूत्र के लिए होता है (1.000 से 1.030 ग्राम / सेमी 3 के विभाजन के साथ), दूसरा - उच्च सापेक्ष घनत्व वाले मूत्र के लिए (1.030 से 1.060 ग्राम / सेमी 3 के विभाजन के साथ) )

प्रगति

इस व्यास वाले छोटे बेलन में मूत्रमापी स्वतंत्र रूप से तैरता है, परीक्षण मूत्र को दीवार के साथ डाला जाता है और मूत्रमापी को सावधानी से उसमें डुबोया जाता है। रीडिंग यूरोमीटर के पैमाने पर रेखा लेकर की जाती है, जो तरल के निचले मेनिस्कस से मेल खाती है। सभी निर्धारण 20 0 C के तापमान पर किए जाते हैं, क्योंकि यूरोमीटर के पैमाने को इस तापमान के अनुसार स्नातक किया जाता है। यदि मूत्र का तापमान अलग है, तो इस तापमान से ऊपर प्रत्येक 30 डिग्री सेल्सियस के लिए आपको जोड़ने की जरूरत है, और नीचे प्रत्येक 30 डिग्री सेल्सियस के लिए - यूरोमीटर स्केल रीडिंग से 0.001 घटाएं।

मूत्र के रोग संबंधी घटकों का पता लगाना

1. मूत्र में प्रोटीन का पता लगाने के लिए गुणात्मक प्रतिक्रियाएं - ए) केंद्रित नाइट्रिक एसिड के साथ गेलर का परीक्षण

विधि सिद्धांत:

सांद्र खनिज अम्ल HNO3 प्रोटीन विकृतीकरण का कारण बनता है और अम्ल के साथ प्रोटीन के जटिल लवण बनाता है। द्रवों की दो परतों की सीमा पर एक छोटे सफेद वलय के रूप में अवक्षेप बनता है।

प्रगति

1 मिली सांद्र HNO 3 को परखनली में डाला जाता है, परखनली को 45 0 के कोण पर झुकाया जाता है और 1 मिली मूत्र को एक पिपेट के साथ दीवार के साथ सावधानी से बिछाया जाता है।

बी) केंद्रित सल्फोसैलिसिलिक एसिड के साथ परीक्षण

विधि सिद्धांत:

केंद्रित कार्बनिक सल्फोसैलिसिलिक एसिड प्रोटीन विकृतीकरण का कारण बनता है। अवक्षेप या मैलापन के रूप में प्रोटीन का अवक्षेपण प्रोटीन कणों के निर्जलीकरण और अम्लों के साथ प्रोटीन के जटिल लवणों के निर्माण से जुड़ा है।

प्रगति

1 मिलीलीटर मूत्र में 20% सल्फ़ोसैलिसिलिक एसिड की 3 बूंदें डालें। मूत्र में प्रोटीन की उपस्थिति में एक सफेद अवक्षेप बनता है।

2. मूत्र में प्रोटीन का मात्रात्मक निर्धारण

परीक्षण - स्ट्रिप्स "अल्बुफ़ान".

विधि सिद्धांत:

परीक्षण "सूचक प्रोटीन त्रुटि" के सिद्धांत पर आधारित है। प्रतिक्रियाशील क्षेत्र में एक ऑक्सीजन बफर और एक विशेष संकेतक होता है जो प्रोटीन की उपस्थिति में पीले से हरे से नीले रंग में रंग बदलता है।

परीक्षण एल्ब्यूमिन के प्रति अत्यधिक संवेदनशील है और मूत्र में 0.10-0.15 g/l की सांद्रता में इसकी उपस्थिति पर प्रतिक्रिया करता है। उच्च आणविक भार प्रोटीन जैसे इम्युनोग्लोबुलिन को एल्ब्यूमिन की तुलना में कम संवेदनशीलता के साथ मापा जाता है। इस परीक्षण से कम आणविक भार प्रोटीन जैसे बीटा -2 माइक्रोग्लोबुलिन, बेंस-जोन्स प्रोटीन का व्यावहारिक रूप से पता नहीं लगाया जाता है।

परीक्षण मूल्यांकन: यदि प्रतिक्रियाशील क्षेत्र का रंग बदलता है तो एक सकारात्मक परीक्षण माना जाता है। मूत्र में एल्ब्यूमिन की सांद्रता के आधार पर, प्रतिक्रियाशील क्षेत्र हरे से नीले रंग में रंग ले सकता है। इन रंगों की तुलना रंग पैमाने से की जाती है, जिनमें से क्षेत्र 0.3, 1, 3, 10 ग्राम / एल के प्रोटीन सांद्रता के अनुरूप होते हैं।

प्रगति

अपने हाथों से प्रतिक्रियाशील क्षेत्र को छुए बिना, परीक्षण पट्टी को 1-2 सेकंड के लिए परीक्षण मूत्र में कम करें ताकि क्षेत्र गीला हो जाए। फिर पट्टी से अतिरिक्त मूत्र हटा दें और लगभग 1 मिनट के बाद किट पर लगे रंग पैमाने के साथ संकेत क्षेत्र के रंग की तुलना करें और प्रोटीन की मात्रा निर्धारित करें, जिसे g/l में व्यक्त किया गया है।

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गेलर परीक्षण, ऑस्ट्रियाई के नाम पर रोगविज्ञानी जे.एफ. हेलर, सामान्य नाम गुणात्मक प्रतिक्रियापर पेशाब में प्रोटीन. नमूने की संवेदनशीलता 0.033 g/l है और इसका उपयोग में किया जाता है नैदानिक ​​निदान प्रोटीनमेह. प्रोटीन का पता लगाने का सिद्धांत एक विकृतीकरण कारक के प्रभाव में इसके विकृतीकरण पर आधारित है - केंद्रित नाइट्रिक एसिडया अभिकर्मक लारियोनोवा.

यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि एक निश्चित मात्रा में प्रोटीन हमेशा मूत्र में मौजूद होता है, लेकिन, एक नियम के रूप में, एक स्वस्थ व्यक्ति के मूत्र में इसकी एकाग्रता गुणात्मक प्रतिक्रिया की संवेदनशीलता सीमा से नीचे होती है और सरल तरीकों से इसका पता नहीं लगाया जाता है। 0.033 g/l से अधिक प्रोटीन की मात्रा के लिए, नमूना उपयुक्त नहीं है। उच्च सांद्रता में मूत्र को पतला करें या एस्बैक एल्ब्यूमिनोमीटर का उपयोग करें।

मूत्र में कुल प्रोटीन की मात्रा निर्धारित करने के लिए, गेलर परीक्षण पर आधारित एक विधि का उपयोग किया जाता है - ब्रैंडबर्ग-रॉबर्ट्स-स्टोलनिकोव विधि (डब्ल्यू। रॉबर्ट्स, 1830-1899, अंग्रेजी चिकित्सक)। तकनीक में नमूने की संवेदनशीलता की निचली सीमा (0.033 ग्राम / एल) और 2-3 मिनट के रिंग गठन के समय में मूत्र का पतला होना शामिल है।

विश्लेषण प्रगति

अभिकर्मक: केंद्रित (फ्यूमिंग) नाइट्रिक एसिड या लारियोनोवा अभिकर्मक। परीक्षण के लिए मूत्र स्पष्ट और अम्लीय होना चाहिए।

लारियोनोवा अभिकर्मक की तैयारी

सोडियम क्लोराइड का एक संतृप्त घोल तैयार करें (100 मिलीलीटर गर्म पानी में 30-30 ग्राम नमक घोलें, ठंडा होने तक खड़े रहने दें)। सतह पर तैरनेवाला त्याग दिया जाता है और फ़िल्टर किया जाता है। छानने के 99 मिलीलीटर में 1 मिलीलीटर केंद्रित नाइट्रिक एसिड मिलाएं (आप 2 मिलीलीटर की जगह ले सकते हैं हाइड्रोक्लोरिक एसिड के).

अनुसंधान तकनीक

लगभग समान मात्रा में मूत्र को दीवार के साथ एक परखनली में 1-2 मिली अभिकर्मक के साथ सावधानी से बिछाया जाता है। प्रोटीन की उपस्थिति में, लगभग 2-3 मिनट के बाद, तरल पदार्थों के बीच इंटरफेस में मैलापन देखा जाता है - विकृत प्रोटीन की एक सफेद अंगूठी।

न्यूक्लियोएल्ब्यूमिन या यूरेट लवण की उच्च सांद्रता के कारण नाइट्रिक एसिड का उपयोग करते समय एक गलत सकारात्मक परिणाम हो सकता है। पहले मामले में, ट्यूब के थोड़ा हिलने पर यह गायब हो जाता है, और दूसरे मामले में, रिंग मीडिया के बीच के इंटरफेस की तुलना में बहुत अधिक स्थित होता है और गर्म होने पर गायब हो जाता है; पतला मूत्र के साथ परीक्षण दोहराते समय, अंगूठी नहीं बनती है। कभी-कभी नाइट्रिक एसिड के साथ यूरोक्रोम के ऑक्सीकरण से एक भूरा रंगद्रव्य वलय भी दिखाई देता है।

नाइट्रिक एसिड के विपरीत, लैरियोनिक अभिकर्मक के उपयोग के कई फायदे हैं: रंगद्रव्य के छल्ले लेयरिंग सीमा पर नहीं बनते हैं, और एक सकारात्मक परिणाम स्पष्ट प्रोटीन रिंग देता है।

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गेलर टेस्ट की विशेषता वाला एक अंश

मैं उनके लिए, अपने लिए, और उन सभी लोगों के लिए बेतहाशा आहत और दुखी था, जो अभी भी मानते थे कि वे कुछ बदल सकते हैं ... एक युद्ध?
अचानक मेरे सामने एक और तस्वीर आ गई...
उसी छोटे पत्थर "कोशिका" में, जहां मैग्डलीन का खूनी शरीर अभी भी फर्श पर पड़ा था, उसके मंदिर के शूरवीरों ने उसके चारों ओर घुटने टेक दिए ... वे सभी असामान्य रूप से सफेद - बर्फ-सफेद लंबे कपड़े पहने हुए थे। वे मगदलीनी के चारों ओर अपने गर्व से झुके हुए सिर झुकाए खड़े थे, और उनके कठोर, डरे हुए चेहरों पर आंसू बह रहे थे ... सबसे पहले उठने वाला मैगस था, जिसका दोस्त जॉन कभी था। उसने सावधानी से, जैसे कि खुद को चोट पहुंचाने के डर से, अपनी उंगलियों को घाव में डुबो दिया, और खूनी हाथ से उसकी छाती पर खूनी क्रॉस जैसा कुछ खींचा ... दूसरे ने भी ऐसा ही किया। इसलिए वे बारी-बारी से उठे, और श्रद्धापूर्वक अपने हाथों को पवित्र रक्त में डुबोकर, अपने बर्फ-सफेद कपड़ों पर लाल क्रॉस खींचे ... मुझे लगा कि मेरे बाल अंत में खड़े होने लगे हैं। यह किसी तरह के भयानक अनुष्ठान की तरह था, जिसे मैं अभी भी समझ नहीं पाया...
"वे ऐसा क्यों कर रहे हैं, सेवर?.." मैंने चुपचाप पूछा, जैसे कि डर है कि वे मुझे सुनेंगे।
"यह एक शपथ है, इसिडोरा। शाश्वत प्रतिशोध की शपथ... उन्होंने मगदलीनी के खून की शपथ ली - उनके लिए सबसे पवित्र रक्त - उसकी मौत का बदला लेने के लिए। यह तब से था जब मंदिर के शूरवीरों ने लाल क्रॉस के साथ सफेद लबादा पहना था। केवल बाहरी लोगों में से लगभग कोई भी कभी भी उनका सही अर्थ नहीं जानता था ... और किसी कारण से, हर कोई बहुत जल्दी "भूल गया" कि मैग्डलीन की मृत्यु से पहले मंदिर के शूरवीरों ने साधारण गहरे भूरे रंग के चौग़ा पहने थे, न कि किसी भी क्रॉस के साथ "सजाया"। . मंदिर के शूरवीरों, कैथरों की तरह, इस अर्थ में क्रॉस से नफरत करते थे कि ईसाई चर्च इसे "श्रद्धा" देता है। वे उसे हत्या का एक नीच और दुष्ट साधन, मृत्यु का एक साधन मानते थे। और मैग्डलीन के खून से उन्होंने अपनी छाती पर जो चित्रित किया, उसका बिल्कुल अलग अर्थ था। यह सिर्फ इतना है कि चर्च ने अपनी जरूरतों के अनुरूप मंदिर के शूरवीरों के अर्थ को पूरी तरह से "फिर से तैयार" किया, जैसे कि रेडोमिर और मैग्डेलेना से जुड़ी हर चीज ....
उसी तरह, उसकी मृत्यु के बाद, उसने सार्वजनिक रूप से मृतक मैग्डलीन को एक सड़क महिला के रूप में घोषित किया ...
- मसीह के बच्चों और मगदलीनी से उसकी शादी से भी इनकार किया ...
- उन दोनों को "मसीह के विश्वास के नाम पर" भी नष्ट कर दिया, जिसके साथ वे दोनों जीवन भर जमकर लड़े ...
- क़तर को भी नष्ट कर दिया, मसीह के नाम का उपयोग करके ... उस व्यक्ति का नाम जिसकी आस्था और ज्ञान उन्होंने सिखाया ...
- उसने टेम्पलर्स (मंदिर के शूरवीरों) को भी नष्ट कर दिया, उन्हें शैतान के मिनियन घोषित कर दिया, उनके कामों पर निंदा और कीचड़ उछाला, और खुद मास्टर को अभद्रता की, जो रेडोमिर और मैग्डलीन के प्रत्यक्ष वंशज थे ...
रोम के "सबसे पवित्र" शैतानों की नीचता और क्षुद्रता को इंगित करने वाले सभी लोगों से छुटकारा पाने के बाद, ईसाई चर्च ने एक किंवदंती बनाई, जिसे "निर्विवाद साक्ष्य" द्वारा मज़बूती से पुष्टि की गई थी, जिसे किसी ने कभी किसी कारण से सत्यापित नहीं किया था, और जो कुछ हो रहा है उसके बारे में सोचने के बावजूद यह कभी किसी को नहीं हुआ।

मूत्र में प्रोटीन के निर्धारण के लिए कार्यस्थल की संरचना में निम्नलिखित तत्व शामिल हैं:

1. रासायनिक टेस्ट ट्यूब, एग्लूटिनेशन।
2. स्नातक पिपेट का एक सेट।
3. एक संकीर्ण खींचा अंत के साथ पिपेट।
4. अल्कोहल लैंप या गैस बर्नर।
5. काला कागज़।
6. हिमनद अम्लीय अम्ल।
7. सल्फोसैलिसिलिक एसिड।
8. केंद्रित नाइट्रिक एसिड।
9. आसुत जल।

मूत्र में प्रोटीन का निर्धारण करने के तरीके

मूत्र में प्रोटीन के गुणात्मक निर्धारण के लिए उपयोग की जाने वाली सभी विधियाँ प्रोटीन जमावट पर आधारित होती हैं। प्रोटीन जमावट अलग-अलग डिग्री (ओपेलेसेंस से उच्च मैलापन तक) या फ्लेकिंग के लिए व्यक्त मैलापन द्वारा प्रकट होता है।

मूत्र में प्रोटीन का गुणात्मक निर्धारण निम्नलिखित में से किसी एक तरीके से किया जा सकता है:

1. 10% एसिटिक एसिड समाधान के साथ उबालना;
2. सल्फोसैलिसिलिक एसिड के 20% समाधान के साथ प्रतिक्रिया;
3. 50% नाइट्रिक एसिड समाधान (गेलर परीक्षण) के साथ प्रतिक्रिया;
4. सामान्य नमक के संतृप्त घोल में नाइट्रिक एसिड के 1% घोल के साथ प्रतिक्रिया (लारियोनोवा के अनुसार संशोधित गेलर परीक्षण)।

मूत्र में प्रोटीन के गुणात्मक निर्धारण से पहले, निम्नलिखित प्रारंभिक कार्य किया जाता है:
1. टर्बिड मूत्र को एक पेपर फिल्टर के माध्यम से फ़िल्टर किया जाता है। यदि एक पारदर्शी छानना प्राप्त करना संभव नहीं है, तो उसी फिल्टर के माध्यम से पुन: निस्पंदन किया जाता है, या मूत्र को थोड़ी मात्रा में डायटोमेसियस पृथ्वी या तालक के साथ मिलाया जाता है, जिसके बाद इसे फ़िल्टर किया जाता है।
2. यदि मूत्र में क्षारीय प्रतिक्रिया होती है, तो इसे लिटमस या सार्वभौमिक संकेतक पेपर के नियंत्रण में एसिटिक एसिड के 10% समाधान के साथ थोड़ा अम्लीय प्रतिक्रिया के साथ अम्लीकृत किया जाता है।
3. प्रत्येक के लिए कम नमक सामग्री (कम विशिष्ट गुरुत्व के साथ हल्का पीला या हल्का पीला मूत्र) के साथ
एक संतृप्त सोडियम क्लोराइड समाधान की कुछ बूंदों को नमूने में जोड़ा जाता है, क्योंकि लवण की कमी के कारण प्रोटीन जमा हो जाता है।
4. काले रंग की पृष्ठभूमि का उपयोग करके मैलापन की डिग्री देखी जाती है। बैकग्राउंड ब्लैक कार्डबोर्ड या ब्लैक पेपर है जिसका इस्तेमाल फोटोग्राफी में किया जाता है। एक काली पृष्ठभूमि पर प्रतिक्रिया के लिए लेखांकन आपको थोड़ी सी भी गड़बड़ी की पहचान करने की अनुमति देता है।

गिने हुए परखनलियों को एक अलग रैक में रखा जाता है। वे निम्नलिखित प्रतिक्रियाओं में से एक उत्पन्न करते हैं।

1. 10% एसिटिक अम्ल विलयन के साथ क्वथनांक परीक्षण। इस परीक्षण के लिए एसिटिक एसिड के 10% घोल की आवश्यकता होती है, जिसे निम्नानुसार तैयार किया जाता है: 10 मिली ग्लेशियल एसिटिक एसिड को एक सिलेंडर में रखा जाता है और आसुत जल के साथ 100 मिलीलीटर के निशान तक ऊपर किया जाता है।

प्रोटीन निर्धारण तकनीक। थोड़ा अम्लीय प्रतिक्रिया के 10-12 मिलीलीटर फ़िल्टर्ड मूत्र को एक रासायनिक परखनली में रखा जाता है। फिर मूत्र के साथ परखनली के ऊपरी भाग को धीरे से उबालने के लिए गर्म किया जाता है और इसमें एसिटिक एसिड के 10% घोल की 8-10 बूंदें डाली जाती हैं। मूत्र के साथ एक परखनली को काले रंग की पृष्ठभूमि में प्रेषित प्रकाश में देखा जाता है। मूत्र में प्रोटीन की उपस्थिति में, अलग-अलग डिग्री की मैलापन दिखाई देता है (ओपेलेसेंस से महान मैलापन तक) या गुच्छे बाहर गिर जाते हैं। नियंत्रण टेस्ट ट्यूब का निचला हिस्सा होता है, जिसे गर्म नहीं किया जाता है। यह परीक्षण 0.015% o (% o - प्रोमिल) से शुरू होकर प्रोटीन की मात्रा का पता लगाता है।

2. 20% सल्फोसैलिसिलिक एसिड समाधान के साथ प्रतिक्रिया। सल्फोसैलिसिलिक एसिड का 20% घोल निम्नानुसार तैयार किया जाता है: 20 ग्राम सल्फोसैलिसिलिक एसिड को 70-80 मिलीलीटर आसुत जल में घोल दिया जाता है, 100 मिलीलीटर सिलेंडर में स्थानांतरित कर दिया जाता है और आसुत जल के साथ निशान को ऊपर कर दिया जाता है। तैयार अभिकर्मक को एक गहरे रंग के कांच के कंटेनर में संग्रहित किया जाता है।

प्रोटीन निर्धारण तकनीक। एक ही व्यास के दो ट्यूबों में, कमजोर एसिड प्रतिक्रिया के 2-3 मिलीलीटर फ़िल्टर किए गए मूत्र को रखा जाता है, सल्फोसैलिसिलिक एसिड के 20% समाधान की 3-4 बूंदों को एक ट्यूब में जोड़ा जाता है, दूसरी ट्यूब नियंत्रण के रूप में कार्य करती है . यदि अभिकर्मक ट्यूब में प्रोटीन मौजूद है, तो मैलापन या जमा प्रोटीन के गुच्छे दिखाई देंगे। नियंत्रण नली में द्रव स्पष्ट रहता है। सल्फोसैलिसिलिक एसिड, सीरम प्रोटीन के साथ, एल्बमोस (पेप्टाइड्स) को अवक्षेपित करता है, जो प्रोटीन के टूटने का एक उत्पाद है। बादल मूत्र के कारण को स्पष्ट करने के लिए, मूत्र के साथ परखनली को गर्म किया जाता है। सीरम प्रोटीन के कारण होने वाली मैलापन बढ़ जाता है, जबकि एल्ब्यूज की उपस्थिति के कारण मैलापन गायब हो जाता है। इस परीक्षण में पिछले वाले की तरह ही संवेदनशीलता है।

3. 50% नाइट्रिक एसिड समाधान (गेलर परीक्षण) के साथ प्रतिक्रिया। नाइट्रिक एसिड का 50% घोल निम्नानुसार तैयार किया जाता है: 50 मिलीलीटर आसुत जल (1:1 कमजोर पड़ने) को 50 मिलीलीटर नाइट्रिक एसिड में 1.2-1.4 के विशिष्ट गुरुत्व के साथ जोड़ा जाता है।

प्रोटीन निर्धारण तकनीक। एक संकीर्ण छोटी परखनली (एग्लूटिनेशन ऊज) में 50% नाइट्रिक एसिड का 1 मिलीलीटर डालें। फ़िल्टर किए गए परीक्षण मूत्र के 1 मिलीलीटर को एक संकीर्ण खींचे गए अंत के साथ एक पिपेट में एकत्र किया जाता है, अभिकर्मक पर स्तरित किया जाता है, और ट्यूब को एक लंबवत स्थिति में स्थानांतरित किया जाता है। प्रोटीन की उपस्थिति में, द्रवों के इंटरफेस पर एक सफेद वलय दिखाई देता है। अंगूठी की उपस्थिति का समय, इसके गुण प्रोटीन की मात्रा पर निर्भर करते हैं: यदि प्रोटीन कम है, तो अंगूठी तुरंत प्रकट नहीं होती है, इसलिए इसकी उपस्थिति की निगरानी 2.5-3 मिनट के लिए की जाती है। इस विधि द्वारा निर्धारित प्रोटीन की न्यूनतम मात्रा 0.033°/oo है। मूत्र में प्रोटीन की मात्रा कम होने से वलय नहीं बनता है। प्रेषित प्रकाश में एक काली पृष्ठभूमि पर उत्पन्न प्रतिक्रिया के परिणामों के लिए लेखांकन।

4. सामान्य नमक के संतृप्त घोल में नाइट्रिक एसिड के 1% घोल के साथ प्रतिक्रिया एक संशोधित गेलर परीक्षण (लारियोनोवा के अनुसार) है।परीक्षण के लिए, सामान्य नमक (लारियोनोवा के अभिकर्मक) के संतृप्त घोल में तैयार नाइट्रिक एसिड के 1% घोल का उपयोग किया जाता है। सामान्य नमक के 35 ग्राम को 100 मिलीलीटर आसुत जल में घोल दिया जाता है, घोल को छान लिया जाता है, तैयार संतृप्त सोडियम क्लोराइड घोल के 99 मिलीलीटर को 1 मिलीलीटर केंद्रित नाइट्रिक एसिड में 1.2-1.4 के विशिष्ट गुरुत्व के साथ मिलाया जाता है।

प्रोटीन निर्धारण तकनीक नाइट्रिक एसिड (गेलर का परीक्षण) के 50% समाधान के साथ प्रतिक्रिया के समान ही, लेकिन नाइट्रिक एसिड के 50% समाधान के 1 मिलीलीटर के बजाय, लारियोनोवा के अभिकर्मक के 1 मिलीलीटर को एक परखनली में डाला जाता है और 1 मिलीलीटर मूत्र होता है उस पर स्तरित। तरल पदार्थ की सीमा पर एक सफेद अंगूठी की उपस्थिति परीक्षण मूत्र में प्रोटीन की उपस्थिति को इंगित करती है। लारियोनोवा परीक्षण हेलर परीक्षण की तरह ही संवेदनशील है।

5. प्रोटीन के गुणात्मक निर्धारण के लिए वर्णमिति (सूखा) परीक्षण। मूत्र में प्रोटीन के गुणात्मक निर्धारण के लिए वर्णमिति (शुष्क) परीक्षण इस प्रभाव पर आधारित है कि प्रोटीन बफर समाधान में संकेतक के रंग पर पड़ता है।

प्रोटीन निर्धारण तकनीक। प्रोटीन को निर्धारित करने के लिए डिज़ाइन किए गए संकेतक पेपर का एक टुकड़ा थोड़े समय के लिए मूत्र में डुबोया जाता है। यदि कागज नीला-हरा हो जाता है तो नमूना सकारात्मक माना जाता है।

मूत्र में प्रोटीन की मात्रा

मूत्र में प्रोटीन का मात्रात्मक निर्धारण इस तथ्य पर आधारित होता है कि जब प्रोटीन युक्त मूत्र को नाइट्रिक एसिड या लारियोनोवा के अभिकर्मक के 50% समाधान पर स्तरित किया जाता है, तो दो तरल पदार्थों की सीमा पर एक सफेद अंगूठी बनती है, और यदि एक स्पष्ट सफेद अंगूठी दिखाई देती है 3 मिनट तक, तो प्रोटीन की मात्रा 0.033% या 1000 मिली मूत्र में 33 मिलीग्राम है। 3 मिनट से पहले अंगूठी की उपस्थिति मूत्र में उच्च प्रोटीन सामग्री को इंगित करती है।
मूत्र में प्रोटीन की मात्रा निर्धारित करते समय, निम्नलिखित नियमों का पालन किया जाता है:

1. प्रोटीन का मात्रात्मक निर्धारण केवल मूत्र के उन हिस्सों में किया जाता है जहां यह गुणात्मक रूप से पाया गया था।
2. निर्धारण सावधानी से फ़िल्टर किए गए मूत्र के साथ किया जाता है।
3. मूत्र के अभिकर्मक (1:1) के अनुपात में नाइट्रिक एसिड या लारियोनोवा के अभिकर्मक के 50% समाधान पर परीक्षण मूत्र को स्तरित करने की तकनीक का सटीक रूप से पालन करें।
4. रिंग की उपस्थिति का समय स्टॉपवॉच द्वारा निर्धारित किया जाता है: प्रोटीन की मात्रा की अंतिम गणना में, नाइट्रिक एसिड पर मूत्र के स्तर को ध्यान में रखा जाता है, जो कि 15 सेकंड है।
5. अंगूठी के गुणों के आधार पर मूत्र पतला होता है। इस मामले में, मूत्र के प्रत्येक बाद के कमजोर पड़ने को पिछले एक से तैयार किया जाता है।
6. काले रंग की पृष्ठभूमि पर छल्ले की पहचान की जाती है।

मूत्र में प्रोटीन के मात्रात्मक निर्धारण के लिए सबसे आम दो तरीके हैं: रॉबर्ट्स-स्टोलनिकोव-ब्रांडबर्ग विधि और एस एल एर्लिच और ए। हां अल्थौसेन की विधि।

1. रॉबर्ट्स-स्टोलनिकोव-ब्रांडबर्ग विधि।इस पद्धति के अनुसार, मूत्र में प्रोटीन की मात्रा को नाइट्रिक एसिड या लारियोनोव के रिंग अभिकर्मक के 50% घोल पर मूत्र की अगली परत तक पतला करके निर्धारित किया जाता है, ठीक 3 मिनट तक। प्रोटीन की मात्रा की गणना मूत्र के कमजोर पड़ने की डिग्री से 0.033% गुणा करके की जाती है। प्राप्त परिणाम प्रति 1000 मिलीलीटर मूत्र में मिलीग्राम में प्रोटीन की मात्रा को व्यक्त करता है, अर्थात पीपीएम (% o) में।
2. S. L. Erlich और A. Ya. Althausen की विधि।एक रैक में कई एग्लूटिनेशन ट्यूब रखे जाते हैं, जिसमें पहले नाइट्रिक एसिड या लारियोनोवा के अभिकर्मक के 50% घोल का 1 मिलीलीटर डाला जाता है। परीक्षण मूत्र को एक अलग साफ, सूखे पिपेट के साथ एक संकीर्ण खींचे गए अंत के साथ लिया जाता है और अभिकर्मक पर स्तरित किया जाता है, जिसके बाद स्टॉपवॉच चालू होती है। टेस्ट ट्यूब को काली पृष्ठभूमि पर रखकर रिंग के प्रकट होने के समय की निगरानी की जाती है। जब रिंग दिखाई देती है, तो स्टॉपवॉच बंद हो जाती है।

प्रोटीन की मात्रा के आधार पर पेशाब करते समय, एक कॉम्पैक्ट, चौड़ी या धागे जैसी अंगूठी दिखाई दे सकती है। अभिकर्मक पर मूत्र डालने के तुरंत बाद एक कॉम्पैक्ट, चौड़ा वलय दिखाई देता है। धागे की तरह की अंगूठी एक मिनट की समाप्ति से पहले या एक से 4 मिनट के अंतराल में तुरंत दिखाई दे सकती है।

जब एक से 4 मिनट के भीतर एक फिल्मी अंगूठी दिखाई दे, तो पेशाब को पतला करना आवश्यक नहीं है!
इस मामले में प्रोटीन की मात्रा की गणना करने के लिए, लेखकों द्वारा प्रस्तावित तालिका-योजना का उपयोग करना पर्याप्त है (तालिका 1)।

उदाहरण 1अभिकर्मक पर मूत्र बिछाते समय, 2 मिनट के बाद एक फिल्म जैसा वलय बनता है। अगर 3 मिनट में वलय बन गया होता तो प्रोटीन की मात्रा 0.033% होती।

इस मामले में, अंगूठी पहले बनाई गई थी। योजना तालिका के अनुसार, 2 मिनट के समय के लिए संबंधित सुधार 1 + 1/8 है। इसका मतलब है कि मूत्र के इस हिस्से में प्रोटीन 0.033 ° / oo से 1 + 1/8 गुना अधिक होगा, अर्थात 0.033% o X (1 + 1/8) \u003d 0.037 ° / oo।

जब 1 मिनट तक फिलीफॉर्म वलय दिखाई देता है, अर्थात 40-60 सेकंड के बाद, मूत्र का एक पतलापन 1.5 गुना (मूत्र के 2 भाग + 1 भाग पानी) से किया जाता है, और फिर पतला मूत्र फिर से अभिकर्मक पर स्तरित होता है और अंगूठी की उपस्थिति दर्ज की गई है। परिणामों की गणना करते समय, यह ध्यान में रखा जाता है कि मूत्र 1.5 गुना पतला था।

उदाहरण 2मूत्र को 1.5 बार पतला करने के बाद, 2 मिनट में एक फिल्मी अंगूठी दिखाई देती है। यदि अंगूठी 3 मिनट में दिखाई देती है, तो प्रोटीन 0.033% होगा। तालिका-योजना के अनुसार 2 मिनट के समय के लिए संबंधित संशोधन 1 + 1/8 है। मूत्र में प्रोटीन में 0.033% oX1.5X (1 + 1/8) \u003d 0.056% o होता है।

यदि फिलीफॉर्म वलय तुरंत दिखाई देता है, तो मूत्र को 2 बार (1 भाग मूत्र + 1 भाग पानी) पतला किया जाता है। पतला मूत्र फिर से अभिकर्मक पर स्तरित होता है और अंगूठी की उपस्थिति 1 मिनट के बाद नोट की जाती है।

उदाहरण 3जब अभिकर्मक पर मूत्र को 2 बार पतला किया जाता है, तो 1 मिनट 15 सेकंड के बाद एक फिल्मी अंगूठी दिखाई देती है। फिर अध्ययन के तहत मूत्र में प्रोटीन की मात्रा, पिछली गणना के अनुरूप, के बराबर होगी
0.033% oX2X (1 + 3/8) \u003d 0.091%।
यदि एक विस्तृत वलय दिखाई देता है, तो मूत्र 4 बार (1 भाग मूत्र + 3 भाग पानी) पतला होता है।
पतला मूत्र के बाद के स्तर के साथ, एक मिनट के पहले और बाद में एक फिल्मी अंगूठी बन सकती है। ऐसे मामलों में, प्रोटीन की मात्रा की गणना पिछले उदाहरणों के साथ सादृश्य द्वारा की जाती है, अर्थात, 0.033% o को कमजोर पड़ने की डिग्री और संबंधित सुधार से गुणा किया जाता है।

उदाहरण 1 4 बार पेशाब को पतला करने के बाद अंगूठी तुरंत दिखाई देती है। मूत्र 2 बार पतला होता है। मूत्र को 8 बार (4X2) पतला करने के बाद, 1.5 मिनट के बाद एक फिल्मी आकार का वलय बनता है। इस मामले में, प्रोटीन की मात्रा 0.033% oX8X1.25 \u003d 0.33% o, आदि है।
जब एक कॉम्पैक्ट रिंग दिखाई देती है, तो मूत्र 8 बार (1 भाग मूत्र + 7 भाग पानी) पतला होता है। अभिकर्मक पर पतला मूत्र के बाद के स्तर पर, या तो एक कॉम्पैक्ट, या चौड़ा, या फिल्मीफॉर्म रिंग बन सकता है।

उदाहरण 2जब मूत्र को नाइट्रिक एसिड पर स्तरित किया गया, तो तुरंत एक कॉम्पैक्ट रिंग बन गई। मूत्र को 8 बार (मूत्र का 1 भाग + पानी का 7 भाग) पतला किया जाता है और फिर से इसे स्तरित किया जाता है। यह फिर से एक कॉम्पैक्ट रिंग में परिणत हुआ। फिर मूत्र को 8 बार और पतला किया जाता है (इसके लिए पतला मूत्र का 1 भाग एक सिलेंडर में या एक परखनली में लिया जाता है और उसमें 7 भाग पानी मिलाया जाता है)। पतला मूत्र की एक और परत के बाद, तुरंत एक फिल्मी आकार का वलय बनता है। मूत्र को 2 बार (1 भाग मूत्र + 1 भाग पानी) पतला किया जाता है। पतला मूत्र की अगली परत के बाद, 2 मिनट में एक फिल्मी आकार का वलय बनता है। मूत्र के दिए गए हिस्से में प्रोटीन की मात्रा की गणना निम्नानुसार की जाती है: 0.033,% oX8X8X2X (1 + 1/8) = 4.8% o।

योजना तालिका के अलावा, गणना की गई प्रोटीन संख्या (तालिका 2) के साथ एक तालिका है। यदि मूत्र पतला नहीं होता है तो प्रोटीन की मात्रा "संपूर्ण अविरल मूत्र" कॉलम में पाई जाती है। मूत्र को पूर्णांक संख्या (8,4,2) से पतला करते समय, तालिका 1 का उपयोग किया जाता है। 1. मूत्र को 1.5 गुना पतला करते समय, तालिका का उपयोग करें। 2.

मूत्र में प्रोटीन की मात्रा निर्धारित करने के लिए तालिका का उपयोग करने की तकनीक

तालिका के संगत स्तंभों में, अंगूठी के प्रकट होने का समय और मूत्र के कमजोर पड़ने की डिग्री का संकेत दिया गया है।
इन दो संकेतकों से खींची गई क्षैतिज और ऊर्ध्वाधर रेखाओं के प्रतिच्छेदन बिंदु पर स्थित संख्या परीक्षण मूत्र में प्रोटीन की मात्रा (% o) को इंगित करती है।

यह संभव है कि प्रोटीन के लिए सकारात्मक गुणात्मक परीक्षण के साथ, नाइट्रिक एसिड के 50% समाधान पर स्तरित होने पर अंगूठी नहीं बनती है। इसका मतलब है कि मूत्र में प्रोटीन की मात्रा 0.033% से कम है। ऐसे मामलों में, विश्लेषण के रूप में प्रोटीन की मात्रा को "निशान" कहा जाता है।

यदि प्रोटीन की मात्रा निर्धारित की जाती है, तो पीप्रोमिल में प्रोटीन सामग्री को यूरिनलिसिस के रूप में नोट किया जाता है, उदाहरण के लिए, "प्रोटीन - 0.66% ओ"।

मूत्र के एक अलग हिस्से में प्रोटीन के मात्रात्मक निर्धारण के अलावा, ग्राम में इसकी दैनिक मात्रा की गणना की जाती है। इस प्रयोजन के लिए, दैनिक मूत्र एकत्र किया जाता है, इसकी मात्रा को मापा जाता है और प्रोमिल में प्रोटीन की मात्रा निर्धारित की जाती है। फिर एक गणना की जाती है। उदाहरण के लिए, मूत्र की दैनिक मात्रा 1800 मिली, प्रोटीन - 7 ° / oo है। इसका मतलब है कि मूत्र की दैनिक मात्रा में प्रोटीन होता है: 1.8X7 \u003d 12.6 ग्राम।

पहले छानना चाहिए।

सल्फोसैलिसिलिक एसिड के साथ नमूना। सल्फोसैलिसिलिक एसिड के 20% समाधान के साथ सबसे संवेदनशील और आम परीक्षण है।

परिभाषा प्रगति. दो रासायनिक परीक्षण ट्यूब चिह्नित हैं: "ओ" - अनुभव और "के" - नियंत्रण। दोनों नलियों में 4-5 मिली साफ मूत्र डाला जाता है। परखनली में सल्फ़ोसैलिसिलिक एसिड के 20% घोल की 4-5 बूँदें डालें, अच्छी तरह मिलाएँ। दोनों परखनलियों की एक काले रंग की पृष्ठभूमि में कंधे से कंधा मिलाकर जांच की जाती है। परखनली में प्रोटीन की उपस्थिति में मैलापन देखा जाता है। नियंत्रण ट्यूब का उपयोग तुलना के लिए किया जाता है। सल्फोसैलिसिलिक एसिड के साथ परीक्षण की संवेदनशीलता 0.015 g/l है।

प्रोटीन क्लीवेज उत्पाद - एल्बमोज - भी सल्फोसैलिसिलिक एसिड के साथ सकारात्मक प्रतिक्रिया देते हैं। मैलापन का कारण निर्धारित करने के लिए, नमूना गरम किया जाता है। साथ ही, एल्ब्यूमिन की उपस्थिति से उत्पन्न धुंध गायब हो जाती है, और प्रोटीन की उपस्थिति के कारण होने वाली धुंध बढ़ जाती है।

हेलर रिंग टेस्ट। परिभाषा प्रगति. एक अपकेंद्रित्र ट्यूब में 50% नाइट्रिक एसिड या लारियोनोवा के अभिकर्मक का 1 - 1.5 मिलीलीटर डालें। फिर परत

मूत्र की समान मात्रा में अम्ल करें, ताकि तरल मिश्रण न हो। तरल सीमा पर प्रोटीन की उपस्थिति में, एक सफेद वलय दिखाई देता है। प्रतिक्रिया का मूल्यांकन एक काले रंग की पृष्ठभूमि पर किया जाता है और फ़िलीफ़ॉर्म रिंग के प्रकट होने के समय को ध्यान में रखा जाता है।नमूने की संवेदनशीलता 0.033 g/L है। इस प्रोटीन सामग्री के साथ, दूसरे और तीसरे मिनट के बीच तरल पदार्थ के इंटरफेस पर एक सफेद धागे जैसा वलय दिखाई देता है।

लेयरिंग तकनीक। मूत्र हमेशा अम्ल पर आरोपित होता है, क्योंकि मूत्र का आपेक्षिक घनत्व अम्ल के घनत्व से कम होता है। एक गुब्बारे के साथ पाश्चर पिपेट के साथ लेयरिंग की जाती है, जो थोड़ी मात्रा में मूत्र एकत्र करता है। फिर मूत्र को अपकेंद्रित्र ट्यूब के संकीर्ण हिस्से में पेश किया जाता है, इसे एक कोण पर पकड़कर, बूंद-बूंद स्तरित, धीरे-धीरे ट्यूब की दीवारों के साथ मूत्र को नीचे किया जाता है।

नमूने का नुकसान नाइट्रिक एसिड के साथ यूरोक्रोम के ऑक्सीकरण से एक वर्णक अंगूठी की उपस्थिति है। यह भूरे रंग की अंगूठी निर्धारण में हस्तक्षेप कर सकती है। यूरेट युक्त मूत्र में, कभी-कभी द्रव की सीमा के ऊपर एक सफेद रंग का वलय दिखाई देता है।

हेलर परीक्षण का एक स्पष्ट परिणाम प्राप्त होता है यदि नाइट्रिक एसिड के 50% समाधान के बजाय, लारियोनोवा के अभिकर्मक का उपयोग किया जाता है (सोडियम क्लोराइड के संतृप्त समाधान में नाइट्रिक एसिड का 1% समाधान)।

परिमाणीकरण

मूत्र में प्रोटीन की मात्रा को दो तरीकों से निर्धारित किया जा सकता है: 1) ब्रैंडबर्ग-रॉबर्ट्स-स्टोलनिकोव विधि द्वारा मूत्र कमजोर पड़ने के साथ; 2) 3% सल्फोसैलिसिलिक एसिड के अतिरिक्त द्वारा गठित मैलापन के अनुसार।

ब्रैंडबर्ग-रॉबर्ट्स-स्टोलनिकोव विधि। यह विधि हेलर रिंग टेस्ट पर आधारित है। यह ज्ञात है कि जब मूत्र में प्रोटीन की मात्रा 0.033 ग्राम / लीटर होती है, तो 2-3 वें मिनट में एक फिलामेंटस वलय बनता है। यदि मूत्र में प्रोटीन 0.033 ग्राम / लीटर से अधिक होता है, तो वलय पहले दिखाई देता है, और विस्तृत फिलामेंटस नहीं। इस तरह के मूत्र को आसुत जल से पतला किया जाना चाहिए और फिर से पतला मूत्र के साथ नाइट्रिक एसिड के साथ स्तरित किया जाना चाहिए। यदि, लेयरिंग के बाद, दूसरे और तीसरे मिनट के बीच एक धागे की तरह की अंगूठी दिखाई देती है, तो कमजोर पड़ने को पूरा माना जाना चाहिए। इस मामले में प्रोटीन की मात्रा मूत्र के कमजोर पड़ने की डिग्री को 0.033 ग्राम / लीटर से गुणा करके निर्धारित की जाती है। गुणों के निम्नलिखित अनुमानित मूल्यांकन का उपयोग करके मूत्र का पतलापन चुना जाता है! छल्ले: यदि एक फ़िलीफ़ॉर्म रिंग बिछाने के बाद तुरंत दिखाई देता है, तो मूत्र को 2 बार पतला किया जाता है, यदि एक विस्तृत रिंग तुरंत दिखाई देती है, तो 4 बार, यदि एक कॉम्पैक्ट रिंग तुरंत दिखाई देती है, तो 8 या 10 बार।

मूत्र का तनुकरण मापक अपकेंद्रित्र ट्यूब में किया जाता है, मूत्र को 1 मिली के निशान तक डालकर निशान में पानी मिलाकर कितनी बार तनुकरण किया जाता है। टेस्ट ट्यूब की सामग्री को एक गुब्बारे के साथ पाश्चर पिपेट के साथ अच्छी तरह मिलाया जाता है।

कभी-कभी आपको कई बार पेशाब को पतला करना पड़ता है। इस मामले में, प्रोटीन की मात्रा की गणना करते समय, सभी कमजोरियों को ध्यान में रखा जाता है। उदाहरण। पूरे मूत्र को बिछाते समय, एक कॉम्पैक्ट रिंग तुरंत दिखाई देती है। एक मापने वाली अपकेंद्रित्र ट्यूब में मूत्र को 10 बार पतला किया जाता है (मूत्र का 1 मिलीलीटर और पानी का 9 मिलीलीटर पानी 10 चिह्नित करने के लिए)। नाइट्रिक एसिड पर 10 गुना मूत्र पतला। यदि तुरंत एक चौड़ी अंगूठी दिखाई देती है, तो दृढ़ संकल्प पूरा नहीं हुआ है, इसे जारी रखा जाना चाहिए। 10 बार के पहले कमजोर पड़ने से, 4 बार का एक और कमजोर पड़ना आवश्यक है। इस मामले में कुल कमजोर पड़ने की दर 40 (10x4) होगी। मूत्र को 40 बार पतला करने पर, हेलर रिंग टेस्ट फिर से किया जाता है। जब 2 और 3 मिनट के बीच एक फिल्मी अंगूठी दिखाई देती है, तो निर्धारण को पूर्ण माना जाना चाहिए।

काम करते समय, आप Erlich-Althausen सुधार का उपयोग कर सकते हैं, यदि 2 मिनट से पहले फ़िलीफ़ॉर्म रिंग दिखाई देती है। मूत्र को और अधिक पतला न करने के लिए, लेखकों ने फिलीफॉर्म रिंग की उपस्थिति का समय निर्धारित करने और समय के लिए गणना को सही करने का प्रस्ताव दिया। इस मामले में, प्रोटीन की मात्रा की गणना कमजोर पड़ने की डिग्री और सुधार द्वारा 0.033 g/l गुणा करके की जाती है। संशोधनों के मूल्यों को तालिका में संक्षेपित किया गया है। 3.

तालिका 3. प्रोटीन निर्धारण के लिए सुधार मूल्य

गठन समय" रिंग सुधार, न्यूनतम गठन समय रिंग सुधार, मिनट